十三味辛夷滴鼻剂抗炎和体外抑菌作用研究

黄 玲，黄春新（海南省人民医院药学部，海口 570311）

十三味辛夷滴鼻剂主要由苍耳子、辛夷、白芷、细辛、荜茇、当归、鱼腥草、荆芥、沙棘、鹅不吃草、薄荷脑、冰片等组成，具有芳香通窍的功效，用于缓解鼻腔炎症引起的鼻塞及鼻塞所致的头痛等症状。十三味辛夷滴鼻剂对酿脓链球菌、甲型溶血性链球菌的抗菌作用未见文献报道，故本文对十三味辛夷滴鼻剂的抗炎和体外抗菌作用进行研究，以期为临床治疗各种鼻炎提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

721型分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）；SW-CJ-1FD型医用超净工作台（常州诺基仪器有限公司）；DNP-9082型电热恒温培养箱（杭州汇尔仪器设备有限公司）；DHG-9000型电热恒温干燥箱（嘉兴中新医疗仪器有限公司）；FA2104S型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；1-14型离心机（德国Sigma公司）。

1.2 试药

十三味辛夷滴鼻剂（山西黄河中药有限公司，批号：20101203），用时以1%的吐温80（上海沪峰化工有限公司，批号：20101026）先乳化，用灭菌生理盐水制成不同浓度的乳剂（50%、25%、12.5%）；注射用青霉素钾（大同市惠达制药厂，批号20101102，规格：80万u）；阿司匹林片（哈药集团制药总厂，批号：20101103），用时以生理盐水配成所需浓度的溶液；二甲苯（分析纯，沈阳市新化试剂厂，批号：20101223）；乙酸（分析纯，天津联合化学试剂厂，批号：20101216）。

1.3 菌种

金黄色葡萄球菌（26001）、酿脓链球菌（32172）、甲型溶血性链球菌（32209-19）、肺炎链球菌（31001-19）均由中国食品药品检定研究院提供。

1.4 动物

昆明种小鼠120只，♀♂兼半，体重（20±2）g，由广东省医学实验动物中心提供（动物生产合格证号：2011A013）。

2 方法与结果

2.1 统计学方法

2.2 十三味辛夷滴鼻剂的抗炎作用

2.2.1 十三味辛夷滴鼻剂对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响[1]

实验分为5组，即生理盐水（20 mL·kg－1）、阿司匹林（0.28 g·kg－1）和十三味辛夷滴鼻剂高、中、低浓度（50%、25%、12.5%）组，滴鼻给药，给药容积为0.4 mL，每天1次，连续7 d。末次给药1 h后，将各组小鼠耳廓用蒸馏水擦洗，以干棉球擦拭干，在每只小鼠的右耳上涂0.05 mL二甲苯，左耳涂等量的生理盐水作为正常对照，30 min后用颈脱臼法处死小鼠，用直径为8 mm的打孔器将小鼠左右耳同部位等面积切下，用电子分析天平分别称两耳片重量，按下列公式计算肿胀度和肿胀抑制率：肿胀度（mg）＝右耳片重－左耳片重；肿胀抑制率＝（生理盐水组肿胀均值－用药组肿胀均值）/生理盐水组肿胀均值×100%。十三味辛夷滴鼻剂对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响见表1。

表1 十三味辛夷滴鼻剂对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（±s，n＝12）Tab 1 Effect of Shisanwei magnolia xingyi on xylene-induced ear edema in mice（±s，n＝12）

表1 十三味辛夷滴鼻剂对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（±s，n＝12）Tab 1 Effect of Shisanwei magnolia xingyi on xylene-induced ear edema in mice（±s，n＝12）

与生理盐水组比较：＊P＜0.01vs.N.S group：＊P＜0.01

组别生理盐水组阿司匹林组十三味辛夷滴鼻剂高浓度组十三味辛夷滴鼻剂中浓度组十三味辛夷滴鼻剂低浓度组n 1212121212肿胀度/mg 11.01±1.214.13±1.02＊4.32±1.13＊4.61±1.12＊4.98±1.17＊抑制率/%－76.18＊78.34＊70.46＊65.41＊

由表1可知，与生理盐水组比较，十三味辛夷滴鼻剂高、中、低浓度组耳廓肿胀度显著减弱，抑制率显著增加（P＜0.01）。表明高、中、低浓度十三味辛夷滴鼻剂对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用。

2.2.2 十三味辛夷滴鼻剂对小鼠毛细血管通透性的影响 分组与给药同“2.2.1”项下方法。末次给药1 h后，于小鼠尾iv伊文思蓝0.2 mL（浓度为0.5%），随即再ip 0.2 mL乙酸（浓度为0.6%），20 min后用颈脱臼法处死小鼠，用剪刀剪开腹部皮肤和肌肉，以6 mL生理盐水分3次洗涤腹腔，用吸管吸出洗涤液，加入生理盐水至10 mL，3000 r·min－1离心15 min，取上清液，在590 nm波长处比色，测定吸光度，即可表明毛细血管通透性状态。十三味辛夷滴鼻剂对小鼠毛细血管通透性的影响见表2。

表2 十三味辛夷滴鼻剂对小鼠毛细血管通透性的影响（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Shisanwei xingyi drops on capillary permeability in mice（±s，n＝12）

表2 十三味辛夷滴鼻剂对小鼠毛细血管通透性的影响（±s，n＝12）Tab 2 Effect of Shisanwei xingyi drops on capillary permeability in mice（±s，n＝12）

与生理盐水组比较：＊P＜0.01vs.N.S group：＊P＜0.01

组别生理盐水组阿司匹林组十三味辛夷滴鼻剂高浓度组十三味辛夷滴鼻剂中浓度组十三味辛夷滴鼻剂低浓度组n 1212121212吸光度0.484±0.1120.183±0.078＊0.223±0.063＊0.257±0.037＊0.299±0.043＊

由表2可知，与生理盐水组比较，十三味辛夷滴鼻剂高、中、低浓度组吸光度显著降低（P＜0.01）。表明高、中、低浓度十三味辛夷滴鼻剂能明显抑制由乙酸所致的小鼠毛细血管通透性增高。

2.3 十三味辛夷滴鼻剂体外抑菌活性的测定——杯碟法[2]

将营养琼脂培养基溶化，取19 mL铺于碟（直径90 mm，深20 mm，大小一致，皿底平坦）中，作为底层，另取5 mL培养基冷却到50℃，加入金黄色葡萄球菌（26001）、酿脓链球菌（32172）、甲型溶血性链球菌（32209-19）、肺炎链球菌（31001-19）混悬液，制成0.05 mL·mL－1的含菌培养基，均匀摊铺碟中，待上层充分凝固后，每个琼脂板上轻轻放置5个牛津小杯，其间距应相等，用无菌洁净移液管滴加青霉素钾标准液（1 u·mL－1）和高、中、低浓度十三味辛夷滴鼻剂，每个牛津小杯中的加液量为0.2 mL。待所有试液加毕后，换上无菌素烧瓷盖作为培养皿的盖子，上述操作做3个重复，并将平板置37℃温箱内培养18～24 h，之后移去培养皿的素烧瓷盖，再将牛津小杯移去。由于牛津小杯围产生浓度梯度，各种菌的繁殖被阻止于有效浓度范围之内而形成圆形的透明带。精确测量各试验液和青霉素钾的抑制圈直径。各菌种对十三味辛夷滴鼻剂、青霉素钾的敏感性见表3（抑菌圈直径16～20 mm，为高度敏感，记“+++”；抑菌圈直径11～15 mm，为中度敏感，记“++”；抑菌圈直径10 mm，为轻度敏感，记“+”；抑菌圈直径小于10 mm，为不敏感或抗药性，记“－”）。

表3 各菌种对十三味辛夷滴鼻剂、青霉素钾的敏感性Tab 3 Sensitivity of the strains to Shisanwei xingyi drops and penicillin potassium

由表3可知，高、中、低浓度十三味辛夷滴鼻剂对金黄色葡萄球菌、酿脓链球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎链球菌的抑菌圈直径均超过16 mm，为高度敏感。

3 讨论

鼻窦炎是常见的鼻部感染之一，其病原菌大多为金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、流感杆菌与少数肠道革兰阴性菌。感染后，鼻黏膜血管也会发生肿胀，从而导致鼻塞[3]。炎症产生是由于局部受到刺激而引起机体各种组织的损伤，进而激活化学介质，随之产生血管通透性亢进、白细胞游走与组织增生等变化[4]。本研究表明，十三味辛夷滴鼻剂对急性非特异性炎性渗出、肿胀有明显的抑制作用，对金黄色葡萄球菌、酿脓链球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎链球菌的抑菌圈直径均超过16 mm，为高度敏感。说明其具有明显的抗炎和抗菌作用。

十三味辛夷滴鼻剂是乳剂，稀释成各浓度时要用吐温80乳化，保持均一性，否则会影响结果。在进行体外抑菌活性的测定时，每一稀释度应更换一支移液管，待所有试液加毕后，要换上无菌素烧瓷盖，因其吸湿性好，在盖内不易形成水滴。测量抑菌圈时应避免主观误差，注意检查抑菌圈是否圆整，眼睛视线与所读数刻度垂直，读数要准确[5]。在测量抑制圈直径时，如采用圆规两脚的针尖测量可提高精度。

为对十三味辛夷滴鼻剂的药效学进行较为全面的评价，可对其化学性和物理性致痛的镇痛效果与血液流变学的影响作进一步的研究。

[1]徐淑云.药理学实验方法[M].北京：人民卫生出版社，1994：159.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录79、附录81、附录115.

[3]张石革，孙定人.鼻黏膜肿胀与药物治疗[J].中国药房，2005，16（4）：320.

[4]李 红，孙文娟，刘 芬，等.追风舒经活血片的药效学研究[J].白求恩医科大学学报，2001.27（2）：135.

[5]付长春.杯碟法影响抗生素效价测定的因素分析[J].西北药学杂志，2008，23（5）：310.