PBEF在体外循环术后肺血管内皮通透性中的机制研究

杨威　董啸　周建良　龚艺　徐建军

【摘要】目的：探讨PBEF在体外循环术后肺血管内皮通透性增加中的机制，为提出更好的体外循环期间肺保护措施提供依据。方法：建立动物模型并进行分组，A组仅行病毒转染；B组仅行30min深低温停循环；C组行病毒转染后，再行30min深低温停循环。应用Western blot检测各组大鼠肺组织。结果：C组的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达明显高于A、B组和对照组。结论：PBEF通过P38MAPK、ERK等途径改变内皮细胞和平滑肌细胞中MLC的磷酸化状态，VE-cadherin和FAK也参与了肺血管内皮通透性增加的过程。

【关键词】前B细胞克隆增强因子；体外循环；肺血管内皮；通透性

【中图分类号】R654.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）19-0024-02

体外循环（cardiopulmonary bypass， CPB）技术是心脏外科手术的必备条件，但其带来的术后肺损伤等并发症一直威胁着行心脏手术的患者，重者发展为呼吸窘迫综合症，甚至死亡，严重威胁到患者的生存和预后。前B细胞克隆增强因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作为一种具有生长因子、细胞因子和烟酰胺磷酸核糖基转移酶作用的分子，认为PBEF在急性肺损伤中起到非常重要的作用。并参与调控炎症、氧化应激、细胞凋亡、内皮血管形成、心脏保护效应和免疫应答等多种作用。但具体机制仍不清楚，因此通过建立大鼠模型分析PBEF的作用机制，结果现报告如下。

1资料和方法

1.1一般资料选择体重在25～30g之间的成熟雄性昆明种小鼠进行动物实验（南昌大学心血管病研究所提供），按不同处理方法分4组，每组10只，所有小鼠均在室温（24±2）℃，湿度（55±5）%环境中饲养，自由饮水、摄食，如在实验过程中动物死亡，选取新小鼠进行补充。对照组动物在麻醉后建立体外循环，不行体外循环转流；A组动物行慢病毒AD-PBEFshRNA转染，在麻醉后建立体外循环，不行体外循环转流；B组动物在建立体外循环后进行30min深低温停循环；C组动物行同种病毒转染后，再进行30min深低温停循环。Western blot和免疫组化试剂盒购自美国Sigma公司。

1.2方法大鼠处死后取右肺前叶用于肺组织湿干重比的测定，右肺中后叶留待Western blot、ELISA和免疫组化检测。按试剂盒说明分别进行Western blot和ELISA检测，Western blot检测磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达。免疫组化检测PBEF，镜检以出现棕黄色颗粒为阳性反应[1]。

1.3统计学分析应用SPSS13.0统计分析软件进行处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1Western blot检测结果各组Western blot检测结果见表1，C组磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达与A组、B组和对照组的差异显著，具有统计学意义，P<0.05。见表1。

2.2免疫组化检测结果A、B、C组在肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞胞核及气管粘膜上皮细胞均有广泛的棕黄色颗粒，PBEF高表达。C组PBEF的表达明显高于A、B组和对照组，表达差异显著，具有统计学意义，（P<0.05）；C组的PBEF表达与对照组的差异显著，具有统计学意义，P<0.05。见表2。

【摘要】目的：探讨PBEF在体外循环术后肺血管内皮通透性增加中的机制，为提出更好的体外循环期间肺保护措施提供依据。方法：建立动物模型并进行分组，A组仅行病毒转染；B组仅行30min深低温停循环；C组行病毒转染后，再行30min深低温停循环。应用Western blot检测各组大鼠肺组织。结果：C组的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达明显高于A、B组和对照组。结论：PBEF通过P38MAPK、ERK等途径改变内皮细胞和平滑肌细胞中MLC的磷酸化状态，VE-cadherin和FAK也参与了肺血管内皮通透性增加的过程。

【关键词】前B细胞克隆增强因子；体外循环；肺血管内皮；通透性

【中图分类号】R654.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）19-0024-02

体外循环（cardiopulmonary bypass， CPB）技术是心脏外科手术的必备条件，但其带来的术后肺损伤等并发症一直威胁着行心脏手术的患者，重者发展为呼吸窘迫综合症，甚至死亡，严重威胁到患者的生存和预后。前B细胞克隆增强因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作为一种具有生长因子、细胞因子和烟酰胺磷酸核糖基转移酶作用的分子，认为PBEF在急性肺损伤中起到非常重要的作用。并参与调控炎症、氧化应激、细胞凋亡、内皮血管形成、心脏保护效应和免疫应答等多种作用。但具体机制仍不清楚，因此通过建立大鼠模型分析PBEF的作用机制，结果现报告如下。

1资料和方法

1.1一般资料选择体重在25～30g之间的成熟雄性昆明种小鼠进行动物实验（南昌大学心血管病研究所提供），按不同处理方法分4组，每组10只，所有小鼠均在室温（24±2）℃，湿度（55±5）%环境中饲养，自由饮水、摄食，如在实验过程中动物死亡，选取新小鼠进行补充。对照组动物在麻醉后建立体外循环，不行体外循环转流；A组动物行慢病毒AD-PBEFshRNA转染，在麻醉后建立体外循环，不行体外循环转流；B组动物在建立体外循环后进行30min深低温停循环；C组动物行同种病毒转染后，再进行30min深低温停循环。Western blot和免疫组化试剂盒购自美国Sigma公司。

1.2方法大鼠处死后取右肺前叶用于肺组织湿干重比的测定，右肺中后叶留待Western blot、ELISA和免疫组化检测。按试剂盒说明分别进行Western blot和ELISA检测，Western blot检测磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达。免疫组化检测PBEF，镜检以出现棕黄色颗粒为阳性反应[1]。

1.3统计学分析应用SPSS13.0统计分析软件进行处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1Western blot检测结果各组Western blot检测结果见表1，C组磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达与A组、B组和对照组的差异显著，具有统计学意义，P<0.05。见表1。

2.2免疫组化检测结果A、B、C组在肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞胞核及气管粘膜上皮细胞均有广泛的棕黄色颗粒，PBEF高表达。C组PBEF的表达明显高于A、B组和对照组，表达差异显著，具有统计学意义，（P<0.05）；C组的PBEF表达与对照组的差异显著，具有统计学意义，P<0.05。见表2。

【摘要】目的：探讨PBEF在体外循环术后肺血管内皮通透性增加中的机制，为提出更好的体外循环期间肺保护措施提供依据。方法：建立动物模型并进行分组，A组仅行病毒转染；B组仅行30min深低温停循环；C组行病毒转染后，再行30min深低温停循环。应用Western blot检测各组大鼠肺组织。结果：C组的PBEF、磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达明显高于A、B组和对照组。结论：PBEF通过P38MAPK、ERK等途径改变内皮细胞和平滑肌细胞中MLC的磷酸化状态，VE-cadherin和FAK也参与了肺血管内皮通透性增加的过程。

【关键词】前B细胞克隆增强因子；体外循环；肺血管内皮；通透性

【中图分类号】R654.1【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2014）19-0024-02

体外循环（cardiopulmonary bypass， CPB）技术是心脏外科手术的必备条件，但其带来的术后肺损伤等并发症一直威胁着行心脏手术的患者，重者发展为呼吸窘迫综合症，甚至死亡，严重威胁到患者的生存和预后。前B细胞克隆增强因子（pre-B-cell colony enhancing factor， PBEF）作为一种具有生长因子、细胞因子和烟酰胺磷酸核糖基转移酶作用的分子，认为PBEF在急性肺损伤中起到非常重要的作用。并参与调控炎症、氧化应激、细胞凋亡、内皮血管形成、心脏保护效应和免疫应答等多种作用。但具体机制仍不清楚，因此通过建立大鼠模型分析PBEF的作用机制，结果现报告如下。

1资料和方法

1.1一般资料选择体重在25～30g之间的成熟雄性昆明种小鼠进行动物实验（南昌大学心血管病研究所提供），按不同处理方法分4组，每组10只，所有小鼠均在室温（24±2）℃，湿度（55±5）%环境中饲养，自由饮水、摄食，如在实验过程中动物死亡，选取新小鼠进行补充。对照组动物在麻醉后建立体外循环，不行体外循环转流；A组动物行慢病毒AD-PBEFshRNA转染，在麻醉后建立体外循环，不行体外循环转流；B组动物在建立体外循环后进行30min深低温停循环；C组动物行同种病毒转染后，再进行30min深低温停循环。Western blot和免疫组化试剂盒购自美国Sigma公司。

1.2方法大鼠处死后取右肺前叶用于肺组织湿干重比的测定，右肺中后叶留待Western blot、ELISA和免疫组化检测。按试剂盒说明分别进行Western blot和ELISA检测，Western blot检测磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达。免疫组化检测PBEF，镜检以出现棕黄色颗粒为阳性反应[1]。

1.3统计学分析应用SPSS13.0统计分析软件进行处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1Western blot检测结果各组Western blot检测结果见表1，C组磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE-cadherin、磷酸化FAK表达与A组、B组和对照组的差异显著，具有统计学意义，P<0.05。见表1。

2.2免疫组化检测结果A、B、C组在肺泡上皮细胞、肺血管内皮细胞胞核及气管粘膜上皮细胞均有广泛的棕黄色颗粒，PBEF高表达。C组PBEF的表达明显高于A、B组和对照组，表达差异显著，具有统计学意义，（P<0.05）；C组的PBEF表达与对照组的差异显著，具有统计学意义，P<0.05。见表2。