不同根管消毒药物对粪肠球菌杀菌效果的体外研究

王雪梅，王戈，仇丽鸿，于静涛

（1.中国医科大学口腔医学院牙体牙髓科，中国医科大学口腔医学院中心实验室，辽宁省口腔医学研究所牙体牙髓病学研究室，沈阳110002；2.鞍山市中心医院口腔科，辽宁 鞍山11 4001）

粪肠球菌是根管治疗后疾病中可能分离到的最多的细菌［1］。有研究表明，粪肠球菌在无营养的根管环境中能够生存，能到达牙本质小管内部，是最难以清除的可能导致根管系统感染的微生物之一［1］。目前氢氧化钙是牙髓治疗中最常用且最有效的抗菌消毒剂，然而一些研究显示，粪肠球菌能在碱性环境中存活，耐受氢氧化钙的高碱性，在用氢氧化钙封药的根管中存活下来［2］。因此，一些学者质疑氢氧化钙是否可以减少粪肠球菌的数量。Basrani等［3］发现洗必泰不仅抗菌效果很好，并且可以对氢氧化钙的耐药菌株发挥作用。洗必泰还可以对根管中的牙本质发挥长期的抗菌作用。但是洗必泰溶液无法作为根管内的消毒药物，国内亦无成品洗必泰凝胶。本研究配制出2%洗必泰凝胶，并研究其对粪肠球菌的杀菌效果，验证其作为再治疗根管消毒药物的可行性。

1 材料与方法

1.1 离体牙准备

选择因正畸需要或牙周病拔除的单根管牙60颗。要求根尖孔已发育完全，没有近髓的龋坏或充填体，未进行过根管治疗，无根裂等其他缺陷。去净牙根周围的软组织和牙石，洗干净后浸泡在生理盐水中4℃保存备用。

1.2 实验菌株

标准粪肠球菌菌株（Enterococcus faecalis，ATCC29212）由广东省微生物菌种保藏中心提供。

1.3 感染根管模型的建立

截去牙冠，根管标准化长度为12 mm，去除牙髓组织，用15#K锉通畅根管。ProTaper镍钛锉预备至F3，用3M复合树脂封闭根尖孔。然后将牙根浸泡于盛有1 mL无菌BHI液体培养基的Eppendorf管中，在121℃、1.5 MPa高温高压条件下灭菌15 min，随机选取2个标本用以检测灭菌效果。将配制好的菌液按照每个根管100 μL在30 min内接种完毕。将所有标本放在CO2恒温培养箱内37℃条件下培养，隔日更新培养基至21 d。第2l天时用API20strep试剂盒进行生化鉴定，显示无杂菌污染，证明感染根管模型建立成功。

1.4 分组处理及样本采集

将已感染粪肠球菌的模型随机分为A、B、C、D 4组，每组15颗牙，分别用注射方法将生理盐水（A组）、Vitapex（B组）、2%洗必泰（C组）、2%洗必泰凝胶（D组）注满根管内，直至溢出为止，所有操作均在无菌条件下进行，Caviton暂封。将4组标本放在37℃下CO2孵育箱中培养7 d，然后去除暂封，5 mL无菌蒸馏水冲洗根管2次。

1.5 细菌菌落计数

用消毒好的30#纸尖分别在封药前、后进行取样，插入根管内停留1 min，吸出根管内液体，放入盛有1 mL无菌生理盐水的Eppendorf管中，震荡1 min，取Eppendorf管中0.5 mL液体，10倍系列稀释，分别接种在BHI琼脂平皿上，置37℃下CO2孵育箱中培养48 h，计数菌落形成单位（CFU/mL）。

1.6 统计学处理

将细菌计数结果按lg（菌落形成单位+1）做对数转换，选用SPSS13.0统计软件进行分析。通过单因素方差分析比较各组感染根管粪肠球菌菌落形成单位减少量的差异，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

48 h后观察见菌落生长良好、光滑，A组菌落数量明显多于B、C、D组，与B组相比C、D组菌落数量减少（图1）。

统计学结果显示，封药前4组根管内细菌量的差异无统计学意义（P>0.05）。A组封药前后根管内细菌量无统计学差异（P>0.05），B、C、D组封药后根管内细菌量明显减少，与封药前比较差异有统计学意义（P<0.05）。B、C、D组与A组比较，C、D 组与B组比较，封药后根管内细菌量明显减少（P<0.05），封药前后细菌量的差值明显升高（P<0.05），但C组与D组比较，封药后根管内细菌量及封药前后细菌量的差值无统计学差异（P>0.05）。结果提示，C组与D组的抗菌效果明显优于A组和B组。见表1。

3 讨论

根管治疗的目的是彻底地消毒根管，杜绝再感染，并进行严密的三维充填。在无菌条件下，按照标准操作原则进行的根管治疗其成功率可达到85%～90%，临床上有些X线显示根充完善的患者仍会出现疼痛、X线片显示根尖阴影未消甚至扩大的现象，这主要是由于充填后的根管内仍存有微生物。研究发现再感染的根管中，粪肠球菌是主要的致病菌，其主要以生物膜形式存在［4～6］。这可能是由于粪肠球菌能够渗透到根管的分叉区、不规则区，能够进入到牙本质小管内，常规的化学—机械预备方法对粪肠球菌作用不明显，甚至能定植于牙本质小管内部，使已充填的根管发生再次感染。有研究发现通过机械的方法预备后粪肠球菌的总量减少，但不能完全去除，而且不同的预备技术和不同器械消除细菌的能力没有显著性差异［7］。因此，我们试图用根管冲洗和根管内封药减少粪肠球菌的数量，提高再治疗根管和难治性根管的成功率。

为了在复诊期间减少根管内剩余微生物的数量，临床上多采用根管内封药的方法。目前，临床上常用的根管消毒药物是氢氧化钙，其对感染根管内的大部分细菌都有杀灭作用，其原理是通过缓慢释放OH－，提高组织的pH值，从而破坏细菌的细胞膜发挥杀菌作用，但对粪肠球菌的作用不明显，原因可能是氢氧化钙所释放的OH－不能到达牙本质小管的深处，粪肠球菌可以耐受强碱环境，导致根管持续感染［8］。本实验选用Vitapex糊剂作为阳性对照组，其主要成分为碘仿、氢氧化钙、硅酮油，其中氢氧化钙是发挥抗菌作用的主要成分，因其采用注射加压进行根管内封药，操作简单，避免氢氧化钙封药不完全的不足，在临床工作中应用较多。

氯已定是目前公认的有效抗厌氧菌感染的药物［9］，可以直接接触细菌，破坏细胞膜，使胞内容物外溢而发挥杀菌作用。研究认为2%洗必泰是粪肠球菌的有效杀菌剂，粪肠球菌感染的根管与2%洗必泰共同培养7 d后，根管内无法检测出活的细菌［10，11］。但是洗必泰溶液不宜进行根管内封药，无法发挥其效果，本研究将自己配制的2%洗必泰凝胶用于根管消毒，结果发现封药后2%洗必泰组细菌量为0.69±0.46，2%洗必泰凝胶组为0.71±0.52，两者相比无统计学差异，但均明显低于Vitapex组（2.87±0.42）和生理盐水组（4.87±0.32），表明两者能够有效的杀灭粪肠球菌。

本研究发现2%洗必泰与2%洗必泰凝胶抑制粪肠球菌的作用无统计学差异（P>0.05），且抗菌效果明显优于Vitapex糊剂和生理盐水，是再治疗根管理想的消毒药物，在氢氧化钙效果不佳的难治性根管治疗中可以发挥重要作用。

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