精子形态与体外受精妊娠结局的关系①

陈鹏勋 康运凯 姚红霞 李红娟 杨国强

(郑州人民医院检验科 郑州 450000)

随着社会经济的发展、环境污染加剧、生活和工作压力增大,育龄夫妇中不孕不育的发病率逐年增加,其全球发病率约为10%～15%。不育不孕的夫妇往往需要临床治疗来建立妊娠,但常规的手术、药物或激素治疗对部分患者的疗效不明显。近年来,辅助生殖技术在治疗不育不孕症方面发展迅速,其中体外受精胚胎移植技术(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)的治疗效率高,但在受精过程中有20%～30%的患者会出现受精率低下(受精率<30%)或不受精[1],影响IVF-ET受精结局。目前,仍没有一项检查可以准确预测IVF受精结局,精子形态学分析与IVF受精结局的关系已有少量文献报道[2],但仍有争议。本文通过分析正常形态精子比率与IVF受精率的关系,来探讨精子形态与IVF妊娠结局的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年1月至2010年10月来我院检验科做精液分析检查的IVF助孕的42例新鲜移植周期。女方年龄25～34岁,平均(30.4±1.5)岁,男方年龄26～35岁,平均(31.0±1.4)岁。不孕原因包括盆腔输卵管因素、男性因素、不明原因不孕以及多次人工授精不孕;男方取卵日精液正常或轻度少弱精,排除有染色体的异常、先天性或遗传性疾病的患者。

1.2 方法

1.2.1 精液的采集和分析 禁欲3～7d,手淫法采集精液,置于干净的取精杯中,在37℃恒温箱中静置,完全液化后取液化精液0.5mL,加入生理盐水1mL,5000r/min、3min离心2次去除精浆。用生理盐水调整精子密度至(40～60)×106/mL,取20uL于清洁的载玻片上,均匀涂片后待其自然干燥,改良巴氏染色方法进行染色,油镜下计数200个或以上精子的形态。精液常规分析参数根据世界卫生组织(WHO)的标准[3]判定,按WHO编写的精液分析手册规定的精子形态分析方法观察每条精子的头部、颈部、中部、尾部和胞浆小滴,如全部正常记为正常精子。

1.2.2 辅助生殖方法 根据患者年龄、基础内分泌和基础卵泡数的不同,分别采用:(1)长方案:从人促性腺激素(Gonadotropin,Gn)治疗周期的前一月经周期的黄体中期皮下注射短效GnRHa(Decapeptyl,0.1mg/支,德国Ferring公司)0.05mg/d,月经周期d3-d5,开始肌注Gn(Gonal-F,75IU/支,瑞士Serono公司)至注射hCG日。②短方案:于月经周期第2天开始注射短效GnRHa,0.1mg/d,第3天起加用Gn至注射hCG日。取卵日精液常规分析均使用Makler板计数并观察活率,精液处理采用Percoll梯度离心法。

1.2.3 参数比较和分组 记录女方年龄、男方年龄、不孕年限、不孕原因和获卵数;取卵日精液常规分析结果,精子形态分析结果和IVF的受精率。按照IVF受精率,将42例移植周期分为2组(<30%组和≥30%组),比较2组患者相关参数差异。

1.3 统计方法

应用SPSS 13.0软件进行统计学分析,数据以(±s)表示;采用的统计学方法有两随机样本t检验和卡方检验,以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

受精率<30%组和受精率≥30%组相关参数比较见表1受精率<30%组正常形态精子比率显著低于受精率≥30%组(P<0.05),精子头部畸形、颈部畸形和尾部畸形比率均显著高于受精率≥30%组(P<0.05);2组在患者一般情况、取卵日精液常规分析结果方面无显著性差异(P>0.05)。

表1 受精率＜30%组和受精率≥30%组相关参数比较(±s)

表1 受精率＜30%组和受精率≥30%组相关参数比较(±s)

参数受精率＜30%组 受精率≥30%组 t/χ2 P例数 15 27女方年龄(岁) 31.2±1.6 30.6±1.4 1.265 0.2133男方年龄(岁) 32.0±1.5 31.3±1.3 1.583 0.1213不孕年限(年) 7.0±1.0 6.6±0.8 1.419 0.1636不孕原因(输卵管/男方/不明原因) 8/1/6 13/0/14 2.136 0.3436获卵数(个) 13.8±1.7 13.1±1.0 1.686 0.0995精液量(mL) 2.6±0.2 2.7±0.3 1.153 0.2556精子密度(×106) 111.3±16.0 107.8±12.6 0.783 0.4384 A级 23.0±2.2 22.1±1.7 1.479 0.1471 B级 27.6±2.0 28.6±1.9 1.604 0.1165直线运动精子数 274263.3±78917.7 254537.9±68785.1 0.845 0.4032正常形态比率(%) 13.5±2.2 19.2±2.7 6.979 ＜0.001头部畸形比率(%) 73.6±4.6 68.7±4.2 3.503 0.0011颈部畸形比率(%) 6.9±1.1 5.7±1.0 3.495 0.0012尾部畸形比率(%) 7.5±1.7 5.8±1.3 3.758 0.0005

3 讨论

精液常规分析是临床上评价男性生育能力的主要检查项目,但精液常规分析受各种因素的影响,变化较大。目前,尚无一种可以确切评价男性生育能力的方法,临床上往往采用一组精液检测结果综合分析而作出判断。精子形态学分析是近年来才在我国逐渐被重视的用于评价男性生育力的检测指标之一,但精子形态在预测IVF妊娠结局中所起的作用尚存争议。

Macleod等于1951年首先提出了对精子形态的分类,此后较多的研究开始关注精子形态与受精能力的关系,形态异常可使精子丧失受精能力导致不育。王瑞雪[4]等研究显示,精子形态与其功能密切相关,任何精子形态上的缺陷都将导致其功能下降,影响男性生育力。Guzick等[5]报道称,精子头部缺陷,精子运动速度慢,不能到达输卵管,无法与卵子结合,位于精子头部的顶体异常可使精子丧失受精能力,导致不育。高洋等[6]的研究结果显示,精子形态与IVF受精率呈显著正相关性,正常形态≥12%和正常形态<12%组问IVF受精率显著性差异,但妊娠率和流产率无显著性差异。罗开玲等[7]研究显示,在常规IVF中,精子的形态对卵子的受精率有着明显的影响,在精液精子密度≥20×106/mI,活动率≥5%,a+b级精子≥5%;或精子密度>5×106～<20×106/mI,同时a+b级运动精子>20%条件下,正常形态精子≥5%,可选择常规IVF治疗;正常形态精子百分率高,卵子受精率亦较高。这些研究说明精子形态与受精率关系密切。

本研究得出与上述研究相似的结果,发现精率<30%组正常形态精子比率显著低于受精率≥30%组,精子头部畸形、颈部畸形和尾部畸形比率均显著高于受精率≥30%组;2组在患者一般情况、取卵日精液常规分析结果方面无显著性差异。提示精子形态与IVF妊娠结局关系密切,且当其<15%时,IVF部分受精率显著下降。

综上所述,精液常规分析正常或是轻度少弱精时,正常形态精子比率与IVF的受精结局关系密切;当精子的形态异常时,易引起精子与透明带的结合异常或穿透异常,导致IVF部分受精率显著降低;所以正常形态精子比率<15%时,可以考虑全部或大部分卵子行ICSI受精,避免卵子浪费。

[1] 崔险峰.应用严格精子形态学测定法评估精子形态对体外受精率的影响[J].中华男科学,2006,12(9):842～843.

[2] 李 晓 晔 ,白 晓 红,宋 学 茹,等 .精 子形态对体外受精-胚胎移植妊娠结局的影响[J].国际妇产科学杂志,2011,38(1):72～75.

[3] 黄茜,刘锋,邹彦,等.计算机辅助分析与人工计数分析精子形态结果比较[J].山东医药,2010,50(15):72～73.

[4] 王瑞雪,刘睿智.精子形态与精子功能关系研究进展[J].中华男科学杂志,2007,13(4):348～351.

[5] Guzick D S,Overstreet J W,Factor-Litrak P,et a1.Sperm morphology, motility and concentration in fertile and infertile men[J]. N Engl J Med,2001,345(19):1388～1393.

[6] 高洋,刘东云,张孝东,等.原发不育精子形态对常规体外受精(IVF)结局的影响[J].重庆医科大学学报,2010,35(9):1427～1429.

[7] 罗开玲,丘映,邓志华,等.严格精子形态分析正常形态精子百分率对常规IVF受精率的影响研究[J].广西医科大学学报,2010,27(1):92～93.