论钩藤的带钩率与质量控制

黄惠莲

钩藤为多源中药材，药典收载的品种有:茜草科植物钩藤 Uncaria rhynch0phylla(Miq.)Jacks.、大叶钩藤 Uncariamacrophylla Wall.、毛钩藤 Uncaria hirsuta Havil.、华钩藤 Uncaria sinensis(Oliv.)Havil.或无柄果钩藤 Uncaria sessilifructus Roxb.的干燥带钩茎枝。秋、冬二季采收，去叶，切段，晒干［1，2］。钩藤药材是我公司产品小儿七星茶颗粒的主要原料，它具有清热平肝，息风定惊的作用;主要用于头晕目眩、风热头痛、小儿烦热惊厥等症。是中医的儿科要药。药用部分是钩藤植物花序柄变成的钩状物以及相连的一小部分枝条。茎枝呈圆柱形或类方柱形，长2～3 cm，直径0.2～0.5 cm。表面红棕色至紫红色者具细纵纹，光滑无毛，黄绿色至灰褐色者有时可见白色点状皮孔，被黄褐色柔毛。多数枝节上对生两个向下弯曲的钩(不育花序梗)，或仅一侧有钩，另一侧为凸起的疤痕;钩略扁或稍圆，先端细尖，基部较阔;钩基部的枝上可见叶柄脱落后的窝点状痕迹和环状的托叶痕。质坚韧，断面黄棕色，皮部纤维性，髓部黄白色或中空。无臭，味淡［3］。李时珍称“古方多用皮，后世多用钩，取其力锐耳”。可见枝皮的效力不及钩，钩多枝少则效强，钩少枝多则效弱。现时售的钩藤，多为钩与枝混杂，未见出售纯钩，只是带钩率的差异。又据中国药学大辞典载，纯用嫩钩，效力要大十倍。而钩藤一般多以药材粉末或煎煮法提取物入药。故本实验以药材粉末显微鉴别和煎煮法提取物中异钩藤碱的含量来判断钩藤的带钩率，从而可根据不同的处方用药需求来控制钩藤的质量。该方法的样品提取简单、实验结果准确。

1 仪器、试药与药品

显微镜:系统生物显微镜;型号:OLYMPUS BX-41;放大倍数:10×40;高效液相色谱仪:Agilent1100;检测器:DAD;HPLC色谱柱:迪马 ODS-C18(250 mm×4.6 mm，5 m);电子天平:Sartorius-CPA225D;甲醇:色谱纯，Merck KGaA;水为超纯水;其余试剂均为分析纯;异钩藤碱(批号:111927-201001中国药品生物制品检定所);不同带钩率的钩藤药材及提取物(广州王老吉药业股份有限公司提供)。

2 实验方法与结果

2.1 钩藤药材粉末显微鉴别 样品均为不同带钩率的药材样品，显微特征为:本品粉末淡红棕色至浅黄棕色。韧皮纤维:很多，大多成束，也有单个散离，淡黄色或无色，较长，壁厚，也有较薄的，非木化或微木化，孔沟不明显，胞腔线性，少数较宽，有的含黄绿色物。韧型纤维:较多，大多成束，少数单个散离。甚长，壁稍厚，木化，斜纹孔明显。表皮细胞:棕黄色。表面观呈类多角形或稍延长，含有油滴状物，断面观可见较厚的角质层。木化薄壁细胞:成片，包括木射线、髓部及木薄壁细胞。呈类方形、类圆形、类多角形或细长方形，纹孔较多，孔沟大多明显［4］。(药材显微特征图示:1～4)

图1 韧皮纤维

图2 韧型纤维

图3 皮部薄壁细胞

图4 木化薄壁细胞

2.2 钩藤提取物中异钩藤碱含量测定

2.2.1 波长选择 采用Agilent高效液相色谱仪，DAD检测器，对异钩藤碱对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描，在254 nm波长处有较强吸收，选定254 nm为检测波长［5］。见图 5。

图5 异钩藤碱对照品光谱图

2.2.2 色谱条件及系统适用性 以十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂;甲醇-水(含0.01 mol/三乙胺，冰醋酸调 pH7.5)(53∶47)为流动相;检测波长:254 nm;理论板数按异钩藤碱峰计算应不低于2000。

2.2.3 不同带钩率的供试品溶液的配制 取样品2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 ml，称定重量，超声提取30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

图6 异钩藤碱对照品溶液色谱图

图7 钩藤提取物溶液色谱图

2.2.4 对照品溶液的配制 取异钩藤碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含8 μg的溶液，摇匀，即得。

2.2.5 专属性考察 将异钩藤碱对照品溶液、供试品溶液，在按制定的色谱条件下，注入液相色谱仪中，得高效液相色谱图。结果见图6～7。

2.2.6 标准曲线绘制 配制异钩藤碱对照品溶液，分别为每毫升各含 1.0943 μg，2.1886 μg，4.3772 μg，8.7744 μg，17.5088 μg，35.0175 μg，70.0350 μg，进样量为 10 μl，按制定的色谱条件测定各峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，各对照品的浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程:异钩藤碱:y=19.916x-2.2777，R2=0.9997;说明异钩藤碱在1.0943～70.0350 μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验 取异钩藤碱对照品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积，并计算得异钩藤碱RSD=0.58%。说明该方法的精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 取带钩率为100%的钩藤提取物供试品溶液，精密吸取10 l，注入高效液相色谱仪中，分别在0、2、4、8、12、24 h 测定，计算，得异钩藤碱:RSD=0.56% 。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.9 重复性试验 分别钩率为100%的钩藤提取物供试品溶液6份，依法测定，计算，异钩藤碱RSD为1.83%。说明该方法重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 分别精密称取6份已知含量的钩藤提取物各2.0 g，置具塞锥形瓶中，再分别精密加入一定量的异钩藤碱对照品溶液，按制定的方法及色谱条件进行测定，计算回收率，结果表1。样品测定:分别精密称定不同带钩率的钩藤提取物，按制定的提取方法及色谱条件进行计算与分析，结果见表2。

表1 钩藤提取物加样回收率试验测定结果

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 从不同显微特征，可区分不同带钩率的钩藤药材:药材中带钩越多韧皮纤维与韧型纤维越多，随着钩的减少韧皮纤维与韧型纤维也减少。

3.2 钩藤主要含吲哚类生物碱、三萜类成分和糖苷类物质，其中生物碱是主要有效成分，主要有异钩藤碱、钩藤碱、柯诺辛碱、柯诺辛碱B等，以异钩藤碱的清热平肝，息风定惊的作用最为显著。本实验以不同带钩率的钩藤提取物中异钩藤碱为主要成分测定其含量，其提取方法为水煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.3～1.4(62℃ ～72℃)的稠膏作为样品检验。

3.3 本品曾用浓氨溶液1 ml，湿润再加二氯甲烷10 ml超声20 min，与甲醇10 ml、超声提取30 min，作为对比测定含量，结果用甲醇10 ml、超声提取所得的异钩藤碱含量最高。而且带钩率越高含量也越高，特别是新鲜钩藤含量最高。

3.4 显微鉴别法可对药材粉末中的不同带钩率进行区分，高效液相色谱法可对提取物中的不同带钩率进行区分，而且它们的特征性较强，专属性及重现性好，结果准确可靠，该方法可用于钩藤的带钩率与质量的关系的分析。

［1］叶华谷，彭少麟.广东植物多样性编目.广东世界图书出版公司，2006:394-395.

［2］刘佳，富志军.钩藤的研究概况;海峡药学，2006，18(5):90-93.

［3］国家药典委员会.中国药典(2010年版，一部).北京:化学工业出版社，2010.240附录ⅥD

［4］徐国均.中药材粉末显微鉴定.人民卫生出版社，1986:678-679.

［5］刘明，汤建林，胡岚岚，等.中药钩藤中钩藤碱含量的测定，第三军医大学学报，2010，32(14):1539-1541.