氧化苏木素诱导人乳癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

王 利

咸宁学院基础医学院，湖北咸宁 437100

氧化苏木素诱导人乳癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制

王 利

咸宁学院基础医学院，湖北咸宁 437100

目的 对氧化苏木素诱导人乳癌MCF-7细胞凋亡及其作用机制进行研究。方法 培养人乳癌细胞株MCF-7与正常乳腺上皮细胞MCF 10A，MCF-7细胞采用不同浓度的氧化苏木素处理48h后，采集细胞。结果 氧化苏木素对MCF-7细胞有高效的细胞毒作用，对MCF 10A细胞细胞毒作用较弱。MCF-7细胞凋亡率随着氧化苏木素含量增加而升高。细胞内DiOC6荧光强度随着氧化苏木素含量增加而降低。氧化苏木素能剂量依赖性的使survivin蛋白的表达降低。 结论 氧化苏木素能诱导MCF-7细胞凋亡，其作用机制可能是survivin蛋白的表达降低。

氧化苏木素；人乳癌MCF-7；细胞凋亡

乳腺癌是女性常见肿瘤疾病，严重危害女性的身体健康，目前，治疗乳癌有很大改观，但仍有一定局限性，所以寻找新的治疗方法是当今研究目标。笔者采用具有缩血管、中枢神经细胞的缺血保护及抗炎功效的氧化苏木素，观察人乳癌MCF-7细胞，研究其是否有抗肿瘤活性及其作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

四氮唑蓝MTT、DiOC、链霉素及青霉素（上海化学试剂厂），DMEM培养基、超级新生小牛血清（天津灏洋生物技术有限公司），DMSO （Gibeo公司），AnnexinV/PI凋亡检测试剂盒、细胞色素C、caspase-9、survivin及GAPDH抗体(南京凯基生物公司)。3550自动酶联免疫检测仪、FC500流式细胞仪均为美国Beckman公司产品。

1.2 方法

在37℃体积分数5%CO2下将人乳癌细胞株 MCF-7与正常乳腺上皮细胞MCF 10A在10%小牛牛血清与青链霉素（100U/mL和100μg/mL）的DMEM培养液中进行培养。MCF-7细胞采用不同浓度的氧化苏木素处理48h后，采集细胞，按照试剂盒说明于PBS缓冲液中对每个样品10000个细胞进行检测，凋亡细胞为AnnexinV与PI双阳性、AnnexinV阳性的细胞。检测线粒体膜电位高低。1×SDS上样缓冲液裂解细胞提取总蛋白，内参照显示相同的上样量为GAPDH蛋白。对细胞浆中细胞色素C进行采集，将GAPDH蛋白作为细胞浆蛋白的内参照。

1.3 统计学处理

采用SPSS 13.0软件对数据进行统计学处理，计数资料采t检验，计量型数据采用均数±标准差（±s）检验，计量资料采用χ2检验，以P＜0.05，为有显著差异性，提示有统计学意义。

2 结果

①MTT结果显示，氧化苏木素对MCF-7细胞有高效的细胞毒作用，对MCF 10A细胞细胞毒作用较弱，两组比较，P＜0.05，差别有统计学意义，详情见表1。采用AnnexinV/PI双染法检测不同含量氧化苏木素对MCF-7细胞的影响，MCF-7细胞处理48h后，细胞凋亡率见表2。MCF-7细胞凋亡率随着氧化苏木素含量增加而升高。

表1 氧化苏木素对两种细胞作用结果（±s）

表1 氧化苏木素对两种细胞作用结果（±s）

组别 IC50（μmol/L）MCF-7细胞MCF 10A细胞7.23±0.65 33.86±2.97

表2 不同含量氧化苏木素对MCF-7细胞影响（±s）

表2 不同含量氧化苏木素对MCF-7细胞影响（±s）

氧化苏木素（μmol/L） MCF-7细胞凋亡率（%）0 7.5 15 30 3.42±0.68 17.23±1.33 31.58±4.45 51.56±5.79

②采用DiOC6检测氧化苏木素检测对线粒体膜电位的影响，0、7.5、15、30μmol/L 氧化苏木素处理细胞 48h 后，细胞内DiOC6 荧光强度分别为（11.62±0.61）、（9.86±0.70）、（8.53±0.65）、（8.05±0.45）。

③氧化苏木素对细胞处理48h后，细胞浆内细胞色素C有剂量依赖性提高趋势，caspase-9裂解带出现在蛋白免疫印迹检测中，说明释放进细胞浆内的细胞色素C剪切下游的caspase-9，激活的caspase-9可造成线粒体通路凋亡。

④氧化苏木素能剂量依赖性的使survivin蛋白的表达降低。

3 讨论

目前，抗乳腺癌药物有很多种，但是肿瘤多药、耐药的产生对治疗产生很大影响，大多数药物还有较严重的副作用，所以新的抗癌药物研发是治疗乳腺癌的有效途径[2]。本研究是对苏木提取物中分离的一个单体成分氧化苏木素进行研究，结果显示，氧化苏木素有较高效的抗肿瘤活性。氧化苏木素对MCF-7细胞的细胞毒作用明显高于其对MCF 10A细胞细胞毒作用，两组比较，差别有统计学意义（P＜0.05），所以需对氧化苏木素抗人乳癌细胞作用机制进行更深一步探讨。AnnexinV/PI双染法凋亡检测是一种具有高特异性及强敏感性的检测方法，细胞凋亡初期细胞膜内的磷脂酰丝氨酸可外翻到细胞外与对其有高度亲和力的蛋白AnnexinV结合，AnnexinV单阳性的细胞出现，在细胞膜严重破损的细胞凋亡晚期，PI可进入细胞里，AnnexinV与PI双阳性细胞出现。线粒体途径与死亡受体途径是细胞凋亡的主要通路。

综上所诉，氧化苏木素能通过线粒体通路诱导MCF-7细胞凋亡，氧化苏木素可剂量依赖性下调survivin蛋白的表达，下调survivin可能是其诱发线粒体凋亡通路的主要机制。

[1]佟俊杰,张广耘,袁晓.胞凋亡检测方法的研究进展[J].口腔医学,2010(7)：59-61.

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1672-5654（2012）07（b）-0163-01

2012-06-19)