五味子总黄酮体外抗氧化活性及与构效的关系

2012-11-20滕海峰马洪波吉林医药学院吉林吉林132013

中国老年学杂志 2012年22期

滕海峰马洪波 (吉林医药学院，吉林吉林 132013)

滕海峰马洪波 (吉林医药学院，吉林吉林 132013)

目的探讨五味子总黄酮体外抗氧化活性及其功效和结构间的关系。方法采用羟基自由基和连苯三酚自氧化法测定五味子总黄酮含量及其抗氧化活性。结果五味子总黄酮具有一定的抗氧化活性，清除羟基自由基效果较好，并且清除效果随五味子浓度增大而增强。结论食品中加入五味子总黄酮，可增加食品的抗氧化能力。

五味子;总黄酮;抗氧化;构效

五味子(Schisandarchiennsis Bail)为木兰科植物五味子的果实，多年生落叶藤本，植株可供观赏，具有多种有效成分和多项药理作用〔1～3〕。本研究采用两种不同方法测定其抗氧化活性，并分析其功效和五味子结构间的关系。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器厂);芦丁标准品(F 20050930，国药集团化学试剂有限公司);所用试剂均为分析纯。

1.2 五味子中总黄酮含量测定

准确称取五味子(购于吉林市吉林大药房，产地：宁夏)10.0 g于索氏提取器中，70%乙醇提取10 h，过滤，减压浓缩至20 ml左右，等体积石油醚萃取，用70%乙醇定容至100 ml，在200～400 nm波长范围内紫外扫描，最大吸收波长为280.5 nm。准确量取提取液0.50 ml于25 ml锥形瓶中，加30%乙醇至12.5 ml，加入0.8 ml 5%NaNO2溶液，放置5 min;加0.8 ml 5%Al(NO3)3溶液，放置6 min;加5 ml 4%NaOH溶液，30%乙醇稀释至刻线，放置10 min;于510 nm处测定吸收度A=0.323，代入回归方程计算出总黄酮含量为7.929 mg/L。

1.3 自氧化最大吸收波长的确定

取5.00 ml、50 mmol/L tris-HCl缓冲溶液与4.70 ml去离子水混合后在37℃水浴中保温15 min;取出混合液，立即加入在37℃水浴中预热的3 mmol/L连苯三酚0.3 ml，迅速摇匀倒入比色皿中在50～450 nm波长下，分不同时间(3、5、7和9 min)扫描，找到邻苯三酚自氧化积累的初始中间产物的最大吸收峰所对应波长(λmax)。经扫描确定测定波长为320 nm。

1.4 超氧阴离子自由基清除率测定

容量瓶中加入5 ml Tris-HCl缓冲溶液，0.2 mmol/L样品液4 ml，37℃恒温预热15 min;迅速加入预热的连苯三酚1 ml，反应4 min后加入0.5 ml浓盐酸终止反应;在320 nm波长下测定吸收度，并计算总黄酮对氧自由基的清除率E%。E%=1－(A1－A2)/A0×100%;A0：未加样品的溶液吸收度;A1：未加连苯三酚的溶液吸收度;A2：加

UV-1200紫外可见分光光度计(北京光学入样品和连苯三酚的溶液吸收度。

1.5 五味子总黄酮清除羟基自由基测定

取1 ml 0.75 mmol/L邻二氮菲溶液于试管中依次加入2 ml 0.2 mmol/L磷酸盐缓冲溶液(pH6)和1 ml蒸馏水;充分混合均匀后，加入1 ml 0.75 mmol/L硫酸亚铁溶液(FeSO4);混合均匀后，加入1 ml 0.01%过氧化氢(H2O2)于37℃水中1 h后，520 nm处测其吸光值，所测的数据为损伤管的吸光值A(损)。未损伤管以1 ml蒸馏水代替损伤管中1 ml 0.01%的H2O2操作方法同损伤管，测得未损伤管的吸光度值A(未)。样品管以1 ml样品代替损伤管中的1 ml蒸馏水，可测得样品管的吸光值A(样)。数据处理：d%=(A样－A损)/(A未－A损)×100%。

2 结果

五味子中总黄酮具有一定的清除自由基能力，清除羟基自由基效果强于超氧自由基，且随着浓度的增大而增强，浓度达100 μg/ml时，对超氧自由基的抑制率不再变化。见图1。五味子总黄酮对超氧自由基和羟基自由基都具有明显的清除作用，并且其清除率随着总黄酮浓度的升高而增加。

图1 五味子总黄酮超氧自由基及羟基自由基清除率

3 讨论

五味子具有较强的抗氧化作用，能清除自由基，抑制过氧化脂质形成，使心脏活动增强。此外，五味子能降低血清胆固醇，增加脑和肝中蛋白质含量，具有抗衰老作用〔4〕。自由基及其诱导的氧化反应可引起组织的氧化损伤。其机制是自由基使组织的基本成分核酸、蛋白质、氨基酸及多糖氧化而使组织的正常功能发生变化，造成组织的一系列病变。黄酮类化合物具有抗氧化活性主要是通过酚羟基与自由基反应形成稳定的半醌式自由基结构，其抗氧化活性的强弱与羟基是否能形成稳定的自由基结构有关。黄酮类属于多酚羟基化合物，因此在相连的羟基或羰基上的氧原子可以作为配位原子同金属离子配合形成五元或六元的螯合物〔5〕。黄酮对金属离子的螯合作用是其抗油脂氧化的反应机制。B环上连二酚羟基的存在是决定其抗氧化活性的主要因素。B环上连位羟基的存在使一个羟基供氢氧化形成，并与连位的羟基形成分子氢键，使氧化后的物质更稳定，从而中断自由基引起的链锁反应。

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2 高雁，李廷.五味子有效成分的药理作用研究进展〔J〕.中医药学报，2011;39(6)：104-6.

3 刘仁俊.五味子化学成分及药理作用研究〔J〕.中医中药，2011;9(32)：169.

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5 孟庆华，于晓霞，张海凤，等.天然黄酮类化合物清除自由基机理及其应用进展〔J〕.云南民族大学学报(自然科学版)，2012;21(2)：79-83.

TQ461

〕 A

〕 1005-9202(2012)22-4955-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.22.047

吉林省教育厅科研资助项目(No.2010527)

马洪波(1969-)，男，硕士，副教授，主要从事慢性病的营养防治研究。

滕海峰(1975-)，男，讲师，主要从事慢性病的营养防治研究。