钙囊素及基质金属蛋白酶-9与肝癌患者预后的相关性

邱 丽 丁祥武 (襄阳市中心医院消化科，湖北 襄阳 441021)

全球每年新发原发性肝癌约26万例，是目前全球肿瘤相关死亡的第三位原因，其女性标准化死亡率为5.61/10万，男性标准化死亡率达14.52/10万〔1〕。目前认为外科手术仍是治疗肝癌的首选方法和最有效措施。但是手术后的远期疗效差，肝癌复发率高，转移和侵袭是影响预后的两大因素〔2〕。本文主要研究钙囊素(S100 A11)及基质金属蛋白酶(MMP)-9与肝癌患者预后相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010年3月至2011年12月我院肝癌患者50例。均经过临床病理检查、CT、B超及肿瘤标志物实验室检查证实。其中男性28例，女性22例;年龄36～73〔平均(52.3±2.5)〕岁;临床分期：Ⅰ期14例，Ⅱ期30例，Ⅲ期6例。

1.2 方法 应用免疫组化染色试剂盒PV-9000检测S100 A11的表达，特异性一抗为兔抗人S100 A11多克隆抗体，阴性对照采用PBS替代第一抗体。以光镜下半定量结果综合考虑染色强度和阳性细胞数。得分0～2分为阴性表达(－);3分为(+);4分为(⧺);5分以上为(⧻)。阳性表达为+～⧻。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫组织化学方法检测MMP-9，根据细胞质染色程度和染色百分率进行评分，得分0分为(－)，1～4分为(+)，5～8分为(⧺)，9～12分为(⧻)。阴性表达为－～+，阳性表达为⧺～⧻。

1.3 随访 所有患者于手术后定期回门诊随访，检查恢复情况，随访时间为42个月。

1.4 统计学处理 应用SPSS13.0统计软件，对预后因素进行Cox回归分析。

2 结果

2.1 S100 A11及MMP-9的表达 行根治性切除手术后的肝癌患者S100 A11表达总阳性数明显小于手术前(P＜0.05)行根治性切除手术后的肝癌患者MMP-9表达总阳性数明显小于手术前(P＜0.05)。见表1。

2.2 复发因素分析 将临床病理因素、S100 A11水平和MMP-9水平纳入Cox模型进行多因素分析，结果S100 A11水平、MMP-9水平、术前播散结节、微转移灶是影响肝癌患者术后复发的危险因素。见表2。

表1 S100 A11及MMP-9的表达与患者特征的关系〔n(%)〕

表2 影响肝癌术后复发因素的多因素分析

3 讨论

肿瘤分为良性肿瘤和恶性肿瘤，两者的主要区别就是恶性肿瘤有转移和复发的倾向〔3〕。有各种属于不同家族的蛋白酶参与肿瘤的转移，包括MMP、半胱氨酸蛋白酶、丝氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和苏氨酸蛋白酶。肿瘤细胞把这些酶作为降解细胞外基质(ECM)、清除转移障碍的工具〔4〕。MMP-9与肿瘤关系最为密切，在肿瘤组织中有高活性及高表达，甚至与肿瘤的复发及预后密切相关。MMP-9具有降解ECM和基底膜、抑制肿瘤细胞凋亡、激活生长因子、促进血管生成因子的释放等多种生物学功能〔5〕。MMP-9在多种恶性肿瘤中都呈高表达，参与肿瘤的新生血管形成，与恶性肿瘤的侵袭与转移能力密切相关。

S100钙连接蛋白家族包括20多个不同的成员蛋白，含有1个EF手型钙离子结合区，能够与钙离子结合发生构象改变，之后与相应的靶蛋白结合发挥生物学效应〔6〕。S100 A11蛋白表达主要位于细胞质和细胞核中，着色后根据表达强度不同被染色为淡黄、棕黄至棕褐色不等。S100基因簇在肿瘤细胞中经常存在缺失、重排、重叠、易位等改变，预测可能与肿瘤的发生发展有关，在肿瘤中会出现表达增高的现象〔7〕。

本研究可见S100 A11和MMP-9的总阳性表达情况与肝癌病情有明显的相关性。S100 A11和MMP-9可作为预示肝癌治疗手术后复发及长期生存的风险分子指标。癌细胞表达MMP-9水平伴随肿瘤包膜侵犯而增高，与肝癌的癌栓形成密切相关。肿瘤细胞可能通过增加MMP-9的表达，增强侵袭性而易于突破肿瘤包膜，形成播散结节，肝内的播散与转移得到加速〔8〕。手术后S100 A11和MMP-9在肝细胞癌组织中表达明显减少，说明可以依据其表达水平评判治疗效果，预估复发的可能性。肝癌属于富血管肿瘤，具有易侵犯门脉系统、早期发生播散和转移的特点。S100 A11和MMP-9在肝细胞癌组织中的高表达说明在肝癌侵袭转移中具有协同作用。

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2 唐光华，倪润洲，肖明兵，等.钙囊素及半乳凝素-3在胰腺癌中的表达及临床意义〔J〕. 江苏医药，2010;36(2)：136-9.

3 钟 崇，苏小康，韦 玮，等.肝癌患者血清及肿瘤组织MMP-2/9的表达及意义〔J〕. 临床医学工程，2010;17(10)：4-5.

4 彭颖琼，胡 斌，肖 伟，等.肝细胞癌中NF-kBp65，VEGF和MMP-9蛋白的表达及其相关性研究〔J〕.现代生物医学进展，2010;10(3)：443-6.

5 陈 浩，李建生，王 伟，等.肝细胞癌患者血清ECMI、MMP-9和VEGF水平的变化及其意义〔J〕.实用肝脏病杂志，2010;13(6)：424-7.

6 于志坚.我国肝癌早诊早治研究现状〔J〕.南通大学学报(医学版)，2008;28(2)：79-83.

7 孙 珂，刘 纯.苯丁酸钠对甲状腺滤泡癌细胞侵袭能力及MMP-9和TIMP-1表达的影响〔J〕.中国肿瘤生物治疗杂志，2009;16(1)：67-70.

8 李明意，姚金科，杨永光.MMP-9、TIMP1基因在原发性肝癌中的表达〔J〕. 中华普通外科学文献，2007;1(1)：33-5.