降香黄檀籽提取物体外抗氧化活性研究

黄 星，郑联合，王 莉，陈正行，*

（1.江南大学食品学院，江苏无锡214122；2.江南大学国家食品科学与技术重点实验室，江苏无锡214122）

降香黄檀籽提取物体外抗氧化活性研究

黄 星1，郑联合1，王 莉2，陈正行2，*

（1.江南大学食品学院，江苏无锡214122；2.江南大学国家食品科学与技术重点实验室，江苏无锡214122）

采用总酚、总黄酮、1，1-二苯基-2-苦基一肼（DPPH）自由基清除能力、还原能力及亚油酸过氧化抑制能力5种方法评价了降香黄檀籽70%乙醇粗提物的石油醚（PF）、乙酸乙酯（EF）、正丁醇（BF）及水（WF）4个部位的体外抗氧化活性，并对5种方法进行了相关性分析。结果表明：4个部位都具有一定的抗氧化活性，其中乙酸乙酯部位（EF）总酚、总黄酮含量及抗氧化能力最高（P＜0.05）。通过相关性分析得知，DPPH自由基清除能力、还原能力、亚油酸过氧化抑制能力与总酚、总黄酮具有良好的线性相关性；此外，还原能力与DPPH自由基清除能力、亚油酸过氧化抑制能力也存在良好的线性相关性。以上结果表明，降香黄檀籽可作为潜在天然抗氧化剂应用于食品或医药工业中。

降香黄檀籽，抗氧化，DPPH，还原力，亚油酸过氧化

降香黄檀（Dalbergia odorifera T.Chen），属于豆科蝶形花亚科黄檀属乔木，是我国特有的珍贵红木树种之一，原产于海南省，近年来广东、广西、福建及云南也有栽种。降香黄檀不仅是高档家具上等用材，其树干和根的干燥心材还是名贵中药——降香。《中国药典》中记载降香的功效为行气活血、止痛、止血，用于脘腹疼痛、肝郁胁痛、胸痹刺痛、跌扑损伤、外伤出血[1]。现代药理学研究表明，降香具有多种生理活性，如抗炎、抗凝血、抗高血脂、抗肿瘤、血管舒张、抑制白细胞三烯生物合成及中枢神经系统[2]。此外，降香的抗氧化活性也有报导，其粗提取物及多酚黄酮类物质对猪油、海鞘油的过氧化及由紫外线照射而引起的大鼠眼球晶状体中谷胱甘肽的减少有显著的抑制作用[3-5]。降香作为多种中药制剂的主要成分，常与其他活血化瘀药配伍用于治疗心血管疾病，如冠心二号煎剂、香丹注射液、芪参益气滴丸、通心络胶囊等。研究表明降香中主要活性成分为挥发油和黄酮类物质[2]。目前，大部分研究基本集中在降香黄檀的心材上，而对其种子的化学成分及生理活性的研究则未见报导。本研究旨在对降香黄檀籽提取物抗氧化活性进行评价，为降香黄檀籽的开发及降香黄檀的综合利用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

降香黄檀籽 产于海南省琼海市，属于豆科黄檀属植物降香黄檀的干燥种子，由海南省粮油科学研究所提供；1，1-二苯基-2-苦基一肼（DPPH）、亚油酸 美国Sigma公司；其余试剂 国产分析纯。

旋转蒸发仪 德国IKA公司；UV-2800型紫外可见分光光度计 上海尤尼柯公司。

1.2 降香黄檀籽提取物的制备

90g降香黄檀籽粉末，加入500mL70%乙醇，40℃水浴回流提取2h，收集上清液。将滤渣再提取2次，合并3次提取液，在40℃水浴上旋转蒸发除去溶剂，得到粗提物。将粗提物悬浮于200mL蒸馏水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，将各部位萃取液在40℃水浴上旋转蒸发蒸干，得到石油醚（PF）、乙酸乙酯（EF）、正丁醇（BF）和水（WF）部位提取物。

1.3 总酚含量的测定[6]

将各部位提取物溶于70%乙醇，配成1mg/mL溶液。分别取0.1mL溶液，加入0.5mL福林酚试剂及5mL蒸馏水，充分混合后，加入1.5mL15%Na2CO3，并用70%乙醇定容至10mL。将混合溶液于70℃反应10min，并测其在750nm处的吸光值。以没食子酸为标准品，测得没食子酸的标准曲线为：y=0.1004x+0.0365（R2=0.9993），该公式中y为吸光值，x为没食子酸的浓度（μg/mL）。

1.4 总黄酮含量测定[7]

将各部位提取物溶于70%乙醇，配成2mg/mL溶液。分别取2mL溶液，加入0.5mL 5%NaNO2，静置6min，加入0.5mL 10%Al（NO3）3，静置6min后加入4.0mL 1mol/L NaOH，充分混匀，静置15min后测其在510nm处的吸光值。以芦丁为标准品，测得芦丁的标准曲线为：y=0.0119x-0.0129（R2=0.9994），该公式中y为吸光值，x为芦丁的浓度（μg/mL）。

1.5 DPPH自由基清除能力[6]

分别取1mL各部位提取物的乙醇溶液，加入2mL 0.1mmol/L DPPH乙醇溶液，充分混匀，室温下避光反应30min，测其在510nm处的吸光值。以1mL乙醇代替样品做空白。DPPH自由基清除能力（%）=（A0-A1）/A0× 100%，式中：A0为空白吸光值，A1为样品吸光值。

1.6 还原能力[8]

取1mL各部位提取物的乙醇溶液，加入2.5mL 0.2mol/L pH6.6的磷酸盐缓冲液和2.5mL 1%的铁氰化钾。将混合液于50℃水浴反应20min后加入2.5mL 10%三氯乙酸，3000r/min离心10min。取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水和0.5mL 0.1%的三氯化铁，测其在700nm处的吸光值。

1.7 亚油酸过氧化抑制能力[9]

取0.2804g亚油酸，加入0.2804g吐温-20和50mL 0.2mol/L pH7.0的磷酸盐缓冲液，充分混匀，配成0.02mol/L的亚油酸乳浊液。取1mL各部位提取物的乙醇溶液（均为1mg/mL），加入2mL亚油酸乳浊液及2mL磷酸盐缓冲液，并将此溶液置暗处37℃反应60h。反应完毕，取0.1mL反应液，加入75%乙醇9.7mL、30%硫氰酸铵0.1mL及20mmol/L硫酸亚铁（溶解于3.5%的盐酸）0.1mL。精确反应3min，测其在500nm处的吸光值。以1mL乙醇代替样品做空白。亚油酸过氧化抑制能力（%）=（A0-A1）/A0×100%，式中：A0为空白吸光值，A1为样品吸光值。

2 结果与讨论

2.1 降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位的得率及总酚、总黄酮含量

从表1中可知，降香黄檀籽提取物EF具有很高的总酚及总黄酮含量，其含量分别为（563.2±11.3）mg没食子酸当量/g提取物、（350.3±3.1）mg芦丁当量/g提取物，但是其提取率则远小于BF及WF。造成以上差异的原因可能是萃取剂的极性不同，研究表明乙酸乙酯对中药降香中的多酚黄酮类物质具有更好的选择性，因此其乙酸乙酯部位具有很强的抗氧化性[3-5]。另外，PF及WF中总黄酮含量分别占总酚含量的83%及92%。通过相关性分析，发现总酚与总黄酮具有良好的线性相关性（R2=0.967），这说明总黄酮在各部位中起着重要作用。以上结论说明降香黄檀籽是多酚黄酮类活性成分的良好来源。

表1 降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位的得率及总酚、总黄酮含量Table 1 The yields and total phenolics，total flavonoids contents of 70%ethanolic extract from Dalbergia odorifera T.Chen seeds

2.2 降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位的抗氧化能力

降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位的DPPH自由基清除能力见图1（a）。当浓度增大到0.4mg/mL以后，EF及WF的自由基清除能力增长缓慢呈水平趋势，而在PF及BF中则未出现这种趋势。研究表明一些化合物如香豆酸及香草醛也呈现出这种趋势，它们即使在很高的浓度下与DPPH自由基反应7h，其自由基清除能力也不会超过75%[10]。因此在0.1mg/mL时EF的自由基清除能力远大于相同浓度的其它部位，而在0.8mg/mL时四个部位的自由基清除能力较相近。

还原能力是化合物提供电子的能力，可用来评价化合物潜在的抗氧化能力。降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位的还原能力见图1（b）。结果表明，随着样品浓度增大其还原能力也在不断增大，其中EF的还原能力最强，四个部位的还原能力大小顺序为：EF＞WF＞BF＞PF。

IC50是指样品清除50%的DPPH自由基或还原能力达到0.5时的浓度，其值越小表明其抗氧化性越强。因此，IC50常用来表示及比较样品的抗氧化能力大小。通过线性规划，并采用内插法及外插法，求得降香黄檀籽提取物各个部位的IC50，见表2。

图1 降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位DPPH自由基清除能力（a）及还原能力（b）Fig.1 The DPPH radical scavenging activity（a），reducing power（b）of70%ethanolicextractfrom Dalbergiaodorifera T.Chenseeds

表2 降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位DPPH自由基清除能力、还原能力的IC50及亚油酸过氧化抑制率Table 2 The activity in preventing the peroxidation of linoleic acid and IC50of DPPH radical scavenging activity，reducing power of 70%ethanolic extract from Dalbergia odorifera T.Chen seeds

降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位对亚油酸过氧化的抑制能力见表2。在1mg/mL浓度下，EF的抑制能力最强，达到了64.4%±2.1%。四个部位对亚油酸过氧化的抑制能力大小依次为：EFgt;WFgt;BFgt;PF。该顺序与还原能力大小顺序一致，表明两种抗氧化活性评价方法具有一定的相关性。

2.3 相关性分析

表3 降香黄檀籽提取物体外抗氧化活性评价方法的相关性分析Table 3 The linear correlations of different methods of in vitro antioxidantactivityofextractfromDalbergiaodoriferaT.Chenseeds

从表3中可以看出，总酚与DPPH自由基清除能力、还原能力、亚油酸过氧化抑制能力有良好的的线性相关性，其R2分别为0.872、0.784、0.579。与总酚相似，总黄酮与DPPH自由基清除能力、还原能力、亚油酸过氧化抑制能力的线性相关性R2分别为0.967、0.851、0.618。因此降香黄檀籽提取物各部位中的总酚及总黄酮对抗氧化能力起着较大作用。

与此同时，DPPH自由基清除能力、还原能力、亚油酸过氧化抑制能力三者之间也存在着良好的线性相关性。还原能力与DPPH自由基清除能力、亚油酸过氧化抑制能力的线性相关性较高，其R2分别为0.836和0.920；而DPPH自由基清除能力与亚油酸过氧化抑制能力的线性相关性较低，其R2为0.583。因此，还原能力是评价降香黄檀籽提取物抗氧化能力的一个较好的方法。

3 结论

降香黄檀籽70%乙醇粗提取物各部位都具有一定的抗氧化能力，其中乙酸乙酯部位（EF）活性最强、总酚和总黄酮含量最高。该部位具有良好的还原能力，同时还能有效地清除DPPH自由基、抑制亚油酸过氧化。因此，降香黄檀籽有潜力成为抗氧化剂应用于食品或药品工业上。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：158-159.

[2]Zhao Q，Guo J，Zhang Y.Chemical and pharmacological research progress of Chinese drug “JiangXiang”（Lignum Dalbergiae Odoriferae）[J].Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences，2000，9（1）：1-5.

[3]姜爱莉，孙利芹.降香抗氧化成分的提取及活性研究[J].精细化工，2004，21（7）：525-528.

[4]Wang W，Weng X C，Cheng D L.Antioxidant activities of natural phenolic components from Dalbergia odorifera T.Chen[J]. Food Chem，2000，71：45-49.

[5]Yu X L，Wang W，Yang M.Antioxidant activities of compounds isolated from Dalbergia odorifera T.Chen and their inhibition effects on the decrease of glutathione level of rat lens induced by UV irradiation[J].Food Chem，2007，104：715-720.

[6]Liu Q，Yao H Y.Antioxidant activities of barley seeds extacts [J].Food Chem，2007，102：732-737.

[7]Jia Z，Tang M，Wu J.The determination of flavonoid contents in mulberry and their scavenging effects on superoxides radicals [J].Food Chem，1998，64：555-559.

[8]Oyaizu M.Studies on products of browning reactions：antioxidative activities of products of browning reaction prepared from glucosamine[J].Jpn J Nutrit，1986，44：307-315.

[9]Yen G C，Chang Y C，Su S W.Antioxidant activity and active compounds of rice koji fermented with Aspergillus candidus[J]. Food Chem，2003，83：49-54.

[10]Brand-Williams W，Cuvelier M E，Berset C.Use of a free radical method to evaluate antioxidant activity[J].LWT-Food Sci Technol，1995，28：25-30.

Study on in vitro antioxidant activity of Dalbergia odorifera T.Chen seed extract

HUANG Xing1，ZHENG Lian-he1，WANG Li2，CHEN Zheng-xing2，*
（1.School of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China；2.State Key Laboratory of Food Science and Technology，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

In vitro antioxidant activity of petroleum ether（PF），ethyl acetate（EF），n-BuOH（BF）and water（WF）fractions of 70%ethanolic extract from Dalbergia odorifera T.Chen seeds was evaluated by five methods，including total phenolics，total flavonoids，1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl（DPPH）radical scavenging activity，reducing power and activity in preventing the peroxidation of linoleic acid.Results showed that all fractions had certain antioxidant activity and the ethyl acetate fraction（EF）had the highest total phenolics，total flavonoids and antioxidant activity（P＜0.05）.Positive linear correlations of total phenolics and total flavonoids with DPPH radical scavenging activity，reducing power，activity in preventing the peroxidation of linoleic acid were observed. Similarly，high positive linear correlations were observed between reducing power and DPPH radical scavenging activity，activity in preventing the peroxidation of linoleic acid.Above results suggest that seeds of Dalbergia

odorifera T.Chen have the potential to be used as natural antioxidants in food or pharmaceutical industry.

Dalbergia odorifera T.Chen seed；antioxidant activity；DPPH；reducing power；peroxidantion of linoleic acid

TS201.2

A

1002-0306（2012）05-0049-03

2011－04－01 *通讯联系人

黄星（1987-），男，在读硕士，研究方向：粮食油脂及植物蛋白。

现代农业产业技术体系建设专项资金；教育部创新团队计划（IRT0627）；国家外专局创新引智计划（B07029）。