骨桥蛋白在浸润性乳腺癌中的表达及临床意义

张晓娟 朱 燕 杨其昌 刘宏斌 沈 屹

乳腺癌是1种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见恶性肿瘤之一，发病率呈现上升及年轻化趋势，因此其早期诊断和各种治疗方法一直是人们研究的焦点。OPN蛋白是近年来发现的1种分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，不但参与恶性肿瘤的发生发展过程，而且可能在肿瘤淋巴结转移中发挥重要作用。有关OPN和c-erbB-2蛋白的表达与浸润性乳腺癌相关性研究尚少见报道。我们应用免疫组织化学方法，分别检测87例浸润性乳腺癌、癌旁组织及20例乳腺良性病变组织的0PN和c-erbB-2蛋白的表达，观察两者在浸润性乳腺癌中的临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

87例乳腺癌标本均来自南通大学第二附属医院2006年1月～2007年12月手术标本。所有患者均为女性，年龄37～83岁，平均年龄53.8岁，肿瘤平均直径3.58 cm。术前均未进行放疗或化疗，均经HE染色及本院2位主治以上病理医师诊断。87例中浸润性导管癌47例，其中Ⅰ级12例、Ⅱ级17例、Ⅲ级18例;浸润性小叶癌18例;髓样癌12例;其他类型包括黏液腺癌、神经内分泌癌、化生性癌等10例。同时选取20例乳腺良性病变组织标本对比。

1.2 方法

采用免疫组织化学EnVision法。OPN单克隆抗体及乳腺癌试剂盒均购自福州迈新公司。所有标本均在癌灶中央及正常组织交界处常规取材，10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋，行HE及免疫组织化学染色。并用已知阳性切片作阳性对照，用磷酸盐缓冲液代替一抗和二抗作为阴性对照。

1.3 结果判断

采用双盲法观察每张切片。OPN染色以癌细胞胞质中出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性着色。具体观察方法:高倍镜下(×200)随机选择5个视野，每个视野计数200个癌细胞，共1000个细胞。①按阳性细胞数占细胞总数的比例计分:无阳性细胞计0分，＜25%计1分，＞25%计2分。②按阳性细胞显色强度计分:无显色计0分，细胞质内浅黄色颗粒计1分，棕黄色颗粒计2分，棕褐色颗粒计3分。①+②≥3记为阳性，否则为阴性。

1.4 统计学分析

采用Stata10.0软件分析，各组间率采用χ2检验，P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 OPN在乳腺组织中的表达

OPN在乳腺良性病变及癌旁组织中几乎无表达，在浸润性乳腺癌中OPN阳性率51.7%(45/87)，两者比较，差异有统计学意义。

2.2 OPN表达在乳腺癌中的表达

在浸润性导管癌、浸润性小叶癌、髓样癌及其他类型癌中 OPN 阳性率分别为 61.7%(29/47)、38.9%(7/18)、41.7%(5/12)、40.0%(4/10)，不同类型癌组织中OPN阳性表达无统计学意义(P＞0.05)。浸润性导管癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级阳性率分别为33.3%(4/12)、58.8%(10/17)、83.3%(15/18)，表达差异有统计学意义(P＜0.05)。乳腺癌伴腋窝淋巴结转移者，OPN蛋白表达阳性率65.9%(27/41)，统计结果显示OPN表达在有无淋巴结转移者中差异有统计学意义(P＜0.05)。c-erbB-2蛋白过表达的乳腺癌OPN蛋白表达高于c-erbB-2蛋白阴性者，差异有统计学意义。癌组织中OPN表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学类型及ER、PR表达差异均无统计学意义，见表1。

表1 OPN表达与乳腺癌各临床病理特征的关系(例，%)

3 讨论

骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)是1种带负电荷、具有亲水性的酸性多功能分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，可表达于人类不同组织中，如骨、肾、肺、肝、膀胱、胰腺、乳腺、睾丸、脑和骨髓等，可由骨细胞、神经细胞、腔上皮细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、活化的T细胞及巨噬细胞等分泌。OPN在许多人类肿瘤如肝癌、胃癌、宫颈癌［1～3］组织中表达增高。OPN通过与其主要受体整合素和CD44的相互作用，在肿瘤细胞的移行、浸润、促进肿瘤血管的形成、抑制凋亡等多个环节中发挥着重要的作用［4］。姜斌等［5］用免疫组织化学方法检测人非小细胞肺癌的OPN的表达，结果表明非小细胞肺癌中OPN的表达水平较正常肺组织及其他良性肺肿瘤表达明显升高，且OPN的表达与淋巴结转移和临床分期密切相关。余洋等［6］研究50例膀胱尿路上皮癌中OPN表达，显示OPN随肿瘤病理分级、临床分期的增高而明显增加，并且在初发组和复发组中、单发组与多发组中的比较，都具有显著差异。本组研究结果中，浸润性乳腺癌OPN阳性率51.7%，而正常乳腺及良性病变组织中几乎无表达，提示OPN可能通过同样的作用途径促进乳腺细胞异常增生和恶性转化。

本组实验中，OPN表达与浸润性乳腺癌组织学类型无相关性，而与浸润性导管癌的组织学分级密切相关，Ⅲ级导管癌OPN表达明显高于Ⅰ、Ⅱ级导管癌，但在Ⅰ级、Ⅱ级之间无显著差异。表明OPN的表达不仅反映了乳腺癌细胞的增殖活性，还与肿瘤的进展密切相关。OPN在淋巴结有、无转移组阳性表达率分别是65.9%和39.1%，显示OPN阳性表达的乳腺癌细胞具有更强的侵袭、转移能力，OPN的表达对判断乳腺癌的预后具有重要的临床意义。与陈军等［7］研究结果相近。c-erbB-2过表达者中70%癌组织同时表达OPN蛋白，且淋巴结转移率远高于二者同时阴性者。cerbB-2及OPN都是与肿瘤侵袭和转移密切相关的基因，其作用机制各不相同但又存在着复杂的联系。

正常人循环血液中也存在一定水平的OPN。Singhal等［8］比较了转移性乳腺癌患者、处于无病生存期的原发性乳腺癌患者及健康志愿者血浆OPN水平，发现OPN表达上调提示预后不良。Bramwell等［9］连续测定158例转移性乳腺癌患者血浆OPN水平，前瞻性分析显示OPN浓度越高，患者无瘤生存期及总生存期越短，且易发生体内脏器转移。因此，对乳腺癌患者定期复查血液OPN水平非常必要。

骨桥蛋白OPN在乳腺癌的发生、发展及转归中具有重要作用，对OPN及其抑制剂的研究可能为肿瘤治疗带来新的前景。但是，目前对于OPN自身及其作用机制仍有许多问题尚不明了，有待进一步证实。

［1］Xie H，Song J，Du R，et al.Prognostic significance of osteopontin in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma〔J〕.Dig Liver Dis，2007，39(2):167.

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［4］Meerwitch K，Bergeon F，Leblond L，et al.A nove lRGD antagonist that targets both vB3 and a5131 induces apeptosis of angiogenic endothelial cells on type Ⅰ collagen〔J〕.Vascu Pharm，2003，40(1):77.

［5］姜 斌，刘 峰，龚圣济，等.骨桥蛋白在小细胞肺癌中的表达〔J〕.上海交通大学学报(医学版)，2007，26(11):1287.

［6］余 洋，李明明，师宏斌，等.骨桥蛋白和环氧化酶-2在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义〔J〕.宁夏医学杂志，2010，32(5):430.

［7］陈 军，覃思繁.骨桥蛋白与MMP-9在乳腺癌组织中的表达及意义〔J〕.实用癌症杂志，2008，23(4):339.

［8］Singhal H，Bautista D S，Tonkin K S，et al.Elevated plasma osteopontin in me tastatic breast cancer associated with increased tumor burden and decreased survival〔J〕.Clin Cancer Res，1997，3(4):605.

［9］Bramwell V H，Doig G S，Tuck A B，et al.Serial plasma osteopontin levels have prognostic value in metastatic breast cancer〔J〕.Clin Cance Res，2006，12(11):3337.