几种石斛粗提物抗凝抗血栓作用的对比研究

李婵娟

（保山中医药高等专科学校，云南 保山675000）

石斛属（Dendrobiu mSw.）是兰科植物中的第二大属，全球共有大约1000种，我国有74种2变种，主要分布在华南及西南地区，尤其以云南南部为多［1］。石斛是业内外人士都熟知的常备药品的必需原料，应用于脉络宁注射液、石斛夜光丸、通塞脉片、石斛散等数十种中成药。脉络宁制剂具有活血化瘀的功能，是利用石斛的“除痹”功效，笔者选择简单、经济、快捷的小鼠凝血时间测定，胶原－肾上腺素致体内血栓形成，观察与比较几种石斛粗提物的抗凝、抗血栓作用，初步评价其对心血管活性。

1 实验材料

1.1 样品

1.1.1 受试物 鼓槌石斛SHch（Dendrobiu m chr ysotoxu m），棕色浸膏，提取率3.15%；金钗石斛SHn（D.nobile），棕色浸膏，提取率5.42%；翅梗石斛SHtr（D.trigonopus），棕色浸膏，提取率4.34%；长距石斛SHl（D.longicornum），棕色浸膏，提取率4.16%；报春石斛SHp（D.pri mulinu m），棕色浸膏，提取率13.81%；球花石斛SHth（D.thysif lor u m），棕色浸膏，提取率11.80%；玫瑰石斛SHcr（D.crepidatum），棕色浸膏，提取率121.11%；叠鞘石斛SHd（D.denneanum），棕色浸膏，提取率13.24%；黑毛石斛SHw（D.williamsonii），棕色浸膏，提取率11.39%；流苏石斛SHf（D.f i mbriatu m），棕色浸膏，提取率14.27%；由中科院昆明植物研究所提供。所有样品均为60%乙醇提取物，易吸湿，常温密闭保存。

1.1.2 对照药品 阿斯匹林肠溶片（拜阿斯匹灵，进口药品注册证号 H20050059，100 mg／片，Bayer Healt h Care AG 生产，批号BTA6ZB7）。

1.1.3 配制方法 各种石斛粗提物按提取率折算成6.0 g／kg的生药剂量为实验的给药剂量，临用前称取适量样品于乳钵中，用1%CMC－Na研磨后配制成相当于生药0.30 g／mL浓度的混悬液供小鼠灌胃用；阳性对照阿斯匹林的配制方法同石斛粗提物。为保证受试物的稳定性，所有样品均为临用前新鲜配制。

1.2 动物 SPF级昆明种小鼠，全雄，体重18～24 g，购自于昆明医学院实验动物中心。合格证号：SCXK（滇）2005－0008。

1.3 主要仪器 AL104电子分析天平（称量试剂、药品、脏器），梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；JJ2000型电子天平（称量动物体重），常熟双杰测试仪器厂；Millipore超纯水处理系统，美国 Millipore公司；BCD－225E冰箱，青岛海尔冰箱厂。

1.4 主要试剂 胶原蛋白，美国Worthington生化集团，批号35E8048－B；盐酸肾上腺素注射液，国药准字 H41021054，1 mg／mL，天津药业集团新郑股份有限公司，批号0909102；溴代苯，分析纯，中国青浦合成试剂厂出品，批号20000405；橄揽油，化学纯，中国医药集团上海化学试剂公司出品，批号20090801。

1.5 统计学处理 实验结果以均值±标准差（－x±s）表示，用DAS ver1.0统计软件进行数据处理。方差齐用t检验，方差不齐用t′检验；偏态分布资料用秩和检验；计数资料用χ2检验。

2 方法与结果

2.1 对小鼠全血凝血时间的影响 选用18～20 g雄性昆明种小鼠132只，按体重随机分为12组：空白对照组；阳性对照阿司匹林40 mg／kg组；10种石斛样品粗提物6.0 g／kg组；每组11只。各组动物每日分别按6.0 g／kg干燥药材剂量灌胃给药1次，连续3 d，空白对照组灌服等容量1%CMC－Na 20 mL／kg.bw。末次给药后1 h，用20 u L采血管于每鼠眼后静脉丛取血，以毛细管法测定凝血时间［2］。结果见表1。结果显示：除翅梗石斛外，所有给药组均能不同程度延长小鼠全血的凝血时间；其中，阳性对照阿斯匹林、鼓槌石斛、金钗石斛、长距石斛、球花石斛、玫瑰石斛、叠鞘石斛、黑毛石斛、流苏石斛分别延长30.58、79.45、33.52、54.44、86.56、59.92、49.70、66.62、39.73%，与空白对照组相比差异显著，报春石斛有一定延长趋势。

表1 石斛样品粗提物对小鼠全血凝血时间的影响

2.2 对胶原－肾上腺素诱导小鼠体内血栓形成的影响［3］选20～22 g雄性昆明种小鼠132只，按体重随机分为12组：空白对照组；阳性对照阿司匹林40 mg／kg组；10种石斛样品粗提物6.0 g／kg组；每组11只。各组动物每日分别按剂量灌胃给药1次，连续灌胃5 d，空白对照组灌服等容量1%CMCNa 20 mL／kg.bw。末次给药后30 min，每鼠尾静脉注射由胶原蛋白－肾上腺素组成的混合诱导剂溶液0.1 mL／10 g.bw，观察15 min内小鼠的偏瘫、恢复及死亡情况。球花石斛和黑毛石斛组各有1只动物因注射诱导剂失误（未进入血管），从实验中剔除。结果见表2。结果显示：除报春石斛和翅梗石斛外，所有给药组和阳性对照阿斯匹林组，均能显著对抗胶原－肾上腺素诱导小鼠的体内血栓形成，使动物死亡率明显降低；报春石斛和翅梗石斛仅有一定作用趋势。

表2 石斛样品粗提物对小鼠体内血栓形成的影响

3 讨论

血栓形成是一个复杂的生理、生化及病理过程，是心脑血管病发病的重要因素，它能引起动脉粥样硬化性心脏病、缺血性脑病等。目前，对于血栓形成机制的认识仍是以德国病理学家Virchow提出的三联制为基础，即血管壁损伤、血液成分改变、血流异常及其相互作用［4］。当血管壁损伤，凝血活性增高，血小板粘附、聚集性增高，血流缓慢、血液粘度增高时，就容易形成血栓。

凝血过程是一个多因子参与的复杂过程，既可由血管内膜损伤激活的“内源途径”引发，也可由血管外的凝血因子与血液接触而启动的“外源途径”引发。在正常情况下，体内凝血系统和纤维蛋白溶解系统保持动态平衡，从而保证了血液有潜在的可凝固性和持续的流动性。缺血性心脑血管病的病理生理过程中存在着凝血—纤溶的异常变化。本研究结果表明，6 g／kg干燥药材的鼓槌石斛、金钗石斛、长距石斛、球花石斛、玫瑰石斛、叠鞘石斛、黑毛石斛、流苏石斛粗提物经口连续给药3 d，均能明显延长小鼠全血的凝血时间，提示抗凝血作用显著；报春石斛仅有一定延长趋势。

胶原－肾上腺素致血瘀模型是中医学上常用的致血小板聚集血栓栓塞模型。胶原可以激活血小板膜上磷脂酶A2，加速磷脂水解释放花生四烯酸；花生四烯酸在环氧酶以及进一步血栓烷A2合成酶的作用下转化为血栓素A2（TXA2），促进循环血流中的血小板发生聚集。肾上腺素兼有α和β受体的激动作用，对α受体的激动可引起皮肤、黏膜、内脏血管收缩，尤其是对肺部血管的收缩，加重了呼吸障碍，利于肺与脑血栓的形成；对β受体的激动可引起骨骼肌和心肌兴奋、心率加快等作用，故胶原和肾上腺素合用具有增强致血小板聚集的协同作用。给小鼠尾静脉注射胶原－肾上腺素可诱发血栓性偏瘫和死亡，6 g／kg干燥药材的鼓槌石斛、金钗石斛、长距石斛、球花石斛、玫瑰石斛、叠鞘石斛、黑毛石斛、流苏石斛粗提物经口连续给药5 d，均能显著对抗胶原－肾上腺素诱导小鼠的体内血栓形成，使动物死亡率明显降低，提示抗血栓作用显著。

［1］李旻，刘友平，张玲，等 .石斛属药用植物研究进展［J］.现代中药研究与实践，2009，23（5）：73.

［2］陈奇.中药药理研究方法学［M］.第一版 .北京：人民卫生出版社，1994：484～485.

［3］陈奇.中药药理研究方法学［M］.第一版 .北京：人民卫生出版社，1993：579～580.

［4］王莉莉.2，6－二甲基－4－（3－硝基苯基）－1，4－二氢－3，5－吡啶二羧酸－3－甲酯－5－正戊酯（MN9202）抗实验性血栓形成作用［J］.中国药学杂志，1998，33（5）：284.