离子色谱法测定厄贝沙坦中叠氮化物

李美君 姚仙珍 汪秀林 王善斌

浙江天宇药业股份有限公司质量部，浙江台州 318020

离子色谱法测定厄贝沙坦中叠氮化物

李美君 姚仙珍 汪秀林 王善斌

浙江天宇药业股份有限公司质量部，浙江台州 318020

目的建立离子色谱法测定厄贝沙坦中叠氮化物的含量。方法采用IonPac AS18（250mm×4mm）离子交换色谱柱，淋洗液采用由淋洗液发生器自动产生的KOH溶液，流速为1.0mL/min。 结果叠氮根离子在0.003～0.240μg/mL范围内，线性关系良好（r=0.999 5），检测限为0.000 8μg/mL。在所建立的色谱条件下，叠氮根离子与各常见阴离子之间的分离度良好。 结论 该方法简单快速，专属性强，结果准确，可用作厄贝沙坦中叠氮化物含量的检测。

厄贝沙坦；叠氮化物；离子色谱

厄贝沙坦是一种血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂，主要用于高血压的治疗[1]，厄贝沙坦还具有重要的肾脏保护作用，能减缓糖尿病肾病的进展。对于2型糖尿病肾病患者，若同时患有高血压，厄贝沙坦可减缓肾病的进展[2-3]。厄贝沙坦的化学名为2-丁基-3-4-2-（1H-四唑-5-基）苯基苄基-1，3-二氮杂螺-4.4壬-1-烯-4-酮。在厄贝沙坦的合成中，通常需要使用叠氮化物，如三丁基叠氮化锡或叠氮化钠以形成四唑环[4-9]。叠氮化物属于剧毒物质，可引起中毒死亡。因此，必需严格控制厄贝沙坦中的叠氮化物的含量。《美国药典》和《欧洲药典》都对厄贝沙坦中叠氮化物的限度作了严格的规定，即不大于10mg/L[10-11]。本文采用无试剂离子色谱分析（RFIC）对厄贝沙坦中的叠氮化物含量进行测定，背景的电导低，基线漂移小，保留时间稳定性好，色谱分辨率高，重现性优异，检验灵敏度高，提高了叠氮化物痕量分析精度。同时叠氮根与其他常见的阴离子能很好的分离，方法专属性强，准确，方便，能够完全满足对厄贝沙坦中叠氮化物的控制需要。

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

DIONEX ICS900离子色谱仪（美国戴安公司），配DS5电导检测器；Chromeleon 6.8色谱工作站；IonPac AG18阴离子保护柱（50mm×4mm）；IonPac AS18阴离子分离柱（250mm×4 mm）；SPE-C18 预处理小柱；ASRS 300（4 mm）化学自再生抑制器；EG50 KOH淋洗液发生器。

1.2 试药

叠氮化钠（美国Aldrich）；实验用水为MilliQ超纯水；厄贝沙坦对照品和样品由浙江天宇药业股份有限公司生产。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

淋洗液采用淋洗液发生器产生的高纯KOH溶液；流速：1.0mL/min；进样量：200μL；淋洗的梯度条件见表1。

表1 梯度淋洗条件

2.2 对照溶液的配制

精密称取叠氮化纳对照品约31.0 mg于100 mL容量瓶中，用超纯水溶解并释稀到刻度，混匀。精密量取200μL至200mL的容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，混匀。本溶液的浓度为 0.20 μg/mL（以 N3－计）。

2.3 样品的处理

精密称取供试品约0.2 g于10 mL容量瓶中，用超纯水稀释至刻度，用超声波超声溶解10 min，再用高速离心机以1 000 r/min的转速离心15 min，取出，用0.22μm的一次性无菌样品过滤器过滤，再用C18预处理小柱吸附样品中的有机物，最后再用0.22μm的一次性无菌样品过滤器过滤。

2.4 方法学考察

2.4.1 专属性试验 将按“2.3”项配制厄贝沙坦对照品溶液和分别含有 N3－、Cl－、CN－、CO32－、NO3－、PO43－、SO42－的各阴离子对照溶液以及混合溶液按“2.1”项下色谱条件依次注入色谱仪中，记录色谱图。混合溶液的色谱见图1。在选定的色谱条件下，PO43－没有响应，N3－和其他几种常见阴离子Cl－、CN－、CO32－、NO3－、SO42－的分离度大于 2.0，分离度很好，不会对叠氮根的测定产生干扰。

2.4.2 检测限和定量限 将叠氮化钠用超纯水配制成0.20μg/mL（以N3－计）的对照溶液，将此溶液按“2.1”项下色谱条件注入液相色谱仪中，记录色谱图。查看色谱图的信噪比，然后根据信噪比，将对照溶液逐步稀释到叠氮根的信噪比为3∶1的浓度作为最低检测浓度，并计算出叠氮根的检测限。叠氮根的最低检出浓度为0.000 8μg/mL，检测限为0.04mg/L。根据对照溶液色谱图的信噪比，将溶液逐步稀释到叠氮根的信噪比为10∶1时的浓度作为最低定量检测浓度，并计算出叠氮根的定量限。叠氮根的最低定量检测浓度为0.002 9μg/mL，定量限为0.14mg/L。结果显示，本方法的检测限和定量限小于《欧洲药典》和《美国药典》规定的10mg/L。

2.4.3 线性关系考察 将叠氮化钠用超纯水配制一系列浓度的叠氮化钠对照溶液，各对照溶液的浓度（以N3－计）分别为：0.003、0.020、0.080、0.140、0.201、0.241 μg/mL。将各叠氮化钠对照溶液按“2.1”项下色谱条进行测定。以峰面积Y对质量浓度X（μg/mL）进行线性回归。N3－在其质量浓度0.003～0.240μg/mL范围内，线性方程为：Y=1.175 7X-0.003 2，r=0.999 5，线性关系良好。

2.4.4 回收率试验 按“2.2”项下对照溶液配制方法配制叠氮化钠对照溶液，按“2.3”项下样品前处理方法配制厄贝沙坦样品溶液。按“2.1”项下色谱条件，将叠氮化钠对照溶液和厄贝沙坦样品溶液注入色谱仪中，对厄贝沙坦样品进行测定分析。采用外标法计算测定结果。采用标样加入法检验方法的回收率，测定结果见表2。

表2 叠氮化物回收率计算结果

2.4.5 精密度试验 平行配制6份叠氮化钠对照溶液，叠氮离子的浓度为0.20μg/ml。将这6份溶液按“2.1”项下色谱条件依次注入色谱仪中，测定精密度。叠氮根的峰面积RSD为1.20%，精密度良好。

2.4.6 重复性试验 取同一批厄贝沙坦样品6份，分别按“2.3”项下样品前处理方法配制厄贝沙坦样品溶液，按“2.2”项下对照溶液配制方法配制叠氮化钠对照溶液。按“2.1”项下色谱条件，将叠氮化钠对照溶液和厄贝沙坦样品溶液注入色谱仪中，对厄贝沙坦样品进行测定分析。采用外标法计算测定结果。6份厄贝沙坦样品中的叠氮化物都为未检出。表明该方法的重复性良好。

2.4.7 溶液稳定性试验 将一批厄贝沙坦的样品按“2.3”项下样品前处理方法配制厄贝沙坦样品溶液。将该样品溶液在自然条件下放置，分别于 0、1、2、4、8 h 取样测定。 结果显示，叠氮根都为未检出。表明样品溶液的稳定性良好。

2.4.8 耐用性试验 按“2.2”项下对照溶液配制方法配制叠氮化钠对照溶液。将厄贝沙坦的样品按“2.3”项下样品前处理方法配制厄贝沙坦样品溶液。分别改变淋洗液的流速为0.8mL/min和1.2mL/min，其他色谱条件不变，将叠氮化钠对照溶液和厄贝沙坦样品溶液注入色谱仪中，并记录色谱图。与正常条件下（1.0 mL/min）测定的结果相比，叠氮离子峰面积变化较大（RSD为23.8%），并且改变流速对叠氮离子的保留时间影响较大。分别改变氢氧化钾淋洗液的浓度±0.5mmol/L，其他色谱条件不变，将叠氮化钠对照溶液和厄贝沙坦样品溶液注入色谱仪中，并记录色谱图。与正常条件下测定的结果相比，氢氧化钾淋洗液的浓度改变+0.5 mmol/L，叠氮离子峰面积变化较大（RSD为10.61%）；氢氧化钾淋洗液的浓度改变-0.5 mmol/L，叠氮离子峰面积变化很小（RSD为2.17%）。改变氢氧化钾淋洗液的浓度±0.5 mmol/L，对叠氮离子的保留时间有一定的影响，但是影响不大。将色谱柱换成同规格不同批号的一根色谱柱，将叠氮化钠对照溶液和厄贝沙坦样品溶液按“2.1”项下色谱条件注入色谱仪中，并记录色谱图。两根色谱柱测定的结果相比，叠氮离子峰面积变化很小（RSD为2.37%），并且保留时间也一致。

2.4.9 厄贝沙坦的样品测定 按“2.2”项下对照溶液配制方法配制叠氮化钠对照溶液。将三批厄贝沙坦的样品按“2.3”项下样品前处理方法配制厄贝沙坦样品溶液。按“2.1”项下色谱条件，将叠氮化钠对照溶液和厄贝沙坦样品溶液注入色谱仪中，对厄贝沙坦样品进行测定，并用外标法计算结果。叠氮化钠对照品溶液5次重复进样，叠氮根峰面积的RSD为0.75%，小于2.0%；叠氮根的信噪比为414:1，超过10；系统适用性符合要求。三批厄贝沙坦样品的叠氮化物检测结果为未检出。厄贝沙坦中的叠氮化物的残留得到了很好的控制，符合《美国药典》和《欧洲药典》不得大于10mg/L的要求。

3 讨论

按《美国药典》的方法进行试验，由于氢氧化钠的浓度高，导致抑制电流大，背景高。这样不但易损坏抑制器，由于基线噪音大，也降低了检测灵敏度，同时由于高浓度的氢氧化钠淋洗液易吸收二氧化碳，导致淋洗液的浓度会发生变化，保留时间的重复性差。而采用药典所用的高容量强酸型AS10阴离子色谱柱，不但柱压高，色谱峰形差，同时色谱柱的寿命低，分析成本高，不利于对厄贝沙坦中叠氮根离子的检验。

本文采用Dionex IonPac AS18分析柱，使用EG50淋洗液发生器，能够在线配制任意精确浓度的氢氧化钾淋洗液，与《美国药典》采用的氢氧化钠淋洗液比较，浓度低，梯度洗脱，这样可得到更低的背景电导和更低的噪音基线，提高了检测的灵敏度，通过梯度洗脱，使叠氮根与日常阴离子能有效分离，专属性强。

本文建立了抗高血压药厄贝沙坦中叠氮化物的测定方法，并对该分析方法进行了验证，验证项目包括专属性、检测限度、定量限度、线性试验、回收率、精密度、重复性、溶液稳定性和耐用性。验证结果表明，在此实验条件下，在0.003～0.240μg/mL浓度范围内，叠氮根的线性良好，专属性强，噪音低，灵敏度高，并且操作简单，该方法能准确测定厄贝沙坦中痕量的叠氮化物。

[1]张红颖，蔡亚军，李春燕，等.厄贝沙坦治疗老年射血分数正常心力衰竭 24 例效果观察[J].解放军医药杂志，2012，24（3）：37-39.

[2]Lewis E，Hunsicker LG，Clarke WR.Renoprotective effect of the angiotensin-receptor antagonist irbesartan in patients with nephropathy due to type 2 diabetes[J].N Engl JMed，2001，345（12）：851-860.

[3]曲红玉，郭丽.厄贝沙坦治疗老年原发性高血压的疗效及对肾功能的影响[J].中国药学杂志，2006，41（13）：1034-1035.

[4] 岑均达，马霞.厄贝沙坦的合成[J].中国医药工业杂志，2007，38（3）：239-240.

[5]Reddy RB，Sudhakar S，Sridhar C，et al.Process for preparing of irbesartan[P].WO Patent 2005113518，2005-12-01.

[6]Murali K，Prasad D.Process for the preparation of irbesartan [P].US Patent 0275828，2011-11-10.

[7]Udhaya K.Process for preparing irbesartan[P].USPatent0063299，2010-03-11.

[8]Bernhart C，Breliere JC.N-Substituted heterocyclic derivatives，their preparation and the pharmaceutical compositions in which they are present[P].USPatent 5270317，1993-12-14.

[9]Venkata K.Process for the preparation of irbesartan[P].USPatent 0056 797，2010-03-04.

[10]The United States Pharmacopeial Convention.US Pharmacopoeia[S].35th revision.US：United Book Press，2011：3556-3557.

[11]The European Pharmacopoeia Commission.European Pharmacopoeia[S].7.0th edition.Strasbourg：EDQM，2009：2278-2279.

Determ ination of azide in Irbesartan by ion chromatography

LIMeijun YAO Xianzhen WANG Xiulin WANG Shanbin
Department of Quality,Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co.,Ltd.,Zhejiang Province,Taizhou 318020,China

Objective To establish an ion chromatographymethod for determination of azide in Irbesartan.MethodsIonPac AS18(250mm×4mm)ion exchange column was used to separate anions,an eluentgeneratorwas used to obtain KOH solu tions,the flow ratewas1.0mL/min.ResultsThe calibration graphsofazidewas linearwithin the range of 0.003-0.240μg/mL(r=0.999 5).The detection limit of azide was 0.000 8μg/mL.Azide and other common anions could be well isolated.ConclusionThemethod is simple,rapid,accurate and suitable for determination of azide in Irbesartan.

Irbesartan;Azide;Ion chromatography

TQ028.33

A

1673-7210（2012）11（b）-0118-03

李美君（1964.2-），女，湖南岳阳人，执业药师，主要从事药品分析工作。

汪秀林（1972.4-），男，安徽池州人，工程师，主要从事药品分析工作。

2012-07-17 本文编辑：卫 轲）