超声提取法测定槐花中总黄酮含量

张学良，樊钰库，王霞英，王丽(.宁夏固原市药品检验所，宁夏固原756000;.宁夏固原市人民医院药剂科，宁夏固原756000)

超声提取法测定槐花中总黄酮含量

张学良1*，樊钰库2，王霞英1#，王丽1(1.宁夏固原市药品检验所，宁夏固原756000;2.宁夏固原市人民医院药剂科，宁夏固原756000)

目的:用超声提取法测定槐花中总黄酮含量。方法:采用60%的乙醇超声提取槐花中的总黄酮，采用紫外可见分光光度法，在500 nm波长处测吸光度，计算样品中总黄酮的含量。结果:芦丁对照品溶液在4.0～20.0 μg·mL－1范围内线性关系良好，平均回收率为99.7%，RSD=0.98%(n=5)。结论:本方法工艺简单，采用超声提取、纯化方法得到的黄酮类物质其纯度较高，并且测定总黄酮含量的方法可靠。

超声提取法;槐花;总黄酮;含量测定

槐花是豆科植物槐(Sophora japonica L.)的干燥花及花蕾，一般将开放的花朵习称“槐花”，将花蕾习称“槐米”，具有凉血止血、清肝泻火的功效，用于治疗便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕［1］。药理实验证明，槐花具有调节毛细血管渗透、抗炎、解痉、抗溃疡以及抗菌等作用［2］。槐花主要含有黄酮苷，槐花提取物可作为保健食品和营养食品等的原料，具有较高的药用、食用及保健价值［3］。超声技术应用于提取植物中的生物碱等研究近年来已有报道［4］，但超声技术应用于提取槐花中总黄酮的研究还少见报道，本研究用超声提取法测定槐花中的总黄酮含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

KQ3200型超声波清洗器(工作频率40 kHz，昆山市超声仪器有限公司生产);UV-1901紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂生产);SHB-3型循环水真空泵(郑州长城科工贸有限公司生产)。

1.2 试药

试剂均为分析纯;芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:100080-200707，供UV法测定纯度为92.5%);新鲜槐花(市售)。

2 方法与结果

2.1 总黄酮的提取

取新鲜槐花，烘干、粉碎，称取粉末约3 g，加80 mL 60%乙醇，温度在60℃左右超声提取2次，每次1 h，抽滤，合并2次滤液，放置于250 mL容量瓶中，用60%乙醇洗涤滤渣并稀释至刻度，得样品提取液。

2.2 测定方法

以芦丁为对照品测定槐花中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值［5］，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。

2.3 总黄酮含量的测定

2.3.1 波长的选择:取样品提取液适量，在0.30 mL 5%NaNO2溶液存在的碱性条件下，经Al(NO3)3显色后，以试剂为空白参比液在420～700 nm波长范围测定络合物的吸光度，在500 nm波长处有最大吸收，所以选用500 nm为测定波长。

2.3.2 对照品溶液的制备:精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品5 mg置50 mL的容量瓶中(0.10 mg·mL－1)，加入5%NaNO2溶液0.30 mL，摇匀，静置6 min后加10%的Al(NO3)3溶液0.30 mL，摇匀，静置6 min;再加4%NaOH溶液4.00 mL，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min后测定。

2.3.3 样品溶液的制备:精密吸取样品提取液2 mL置25 mL容量瓶中，按对照品溶液的制备方法自“加入5%亚硝酸钠溶液0.30 mL”起制备样品溶液。

2.3.4 线性关系考察:分别精密吸取芦丁对照品溶液1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL于25 mL容量瓶中，加60%的乙醇稀释至刻度后分别测定。以吸光度(A)，为纵坐标、浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:A=－0.825+11.538 1C，r=0.999 9，在4.0～20.0 μg·mL－1范围内线性关系良好。2.3.5精密度试验:取芦丁对照品溶液，重复测定吸光度5次，结果RSD=1.25%(n=5)，表明仪器精密度良好。

2.3.6 重现性试验:取同一槐花样品，平行制备5份样品溶液，依法测定5次，结果RSD=0.96%(n=5)。

2.3.7 稳定性试验:将样品液放置30、60、90、120 min后复测吸光度，结果基本稳定，RSD=0.2%。

2.3.8 加样回收率试验:精密称取已知含量的同批样品适量，平行操作5份，分别精密加入一定量的对照品依法操作，并计算加样回收率，测得样品中芦丁对照品的平均回收率为99.7%，RSD=0.98%(n=5)，见表1 。

表1 加样回收率试验结果(n=5)Tab 1Results of recovery test(n=5)

2.3.9 样品含量测定:取样品溶液以空白试剂作参比液，于500 nm波长处测吸光度，按照上述回归方程:A=－0.825+11.538 1C，计算总黄酮的含量，见表2 。

表2 样品含量测定结果(n=3)Tab 2Results of content determination of total flavonoids in samples(n=3)

2.4 浓度、时间、料液比等因素对提取的影响

2.4.1 浓度对提取的影响:分别用20%、40%、60%、80%、95%的乙醇，以80 mL对3 g槐花进行提取2 h，提取结果表明，乙醇浓度对样品中黄酮类化合物提取影响较大，以60%的乙醇为最佳提取浓度。

2.4.2 时间对提取的影响:用60%乙醇分别对3 g槐花提取0.5、1、2、3、4 h，以每次1 h、合并提取2次共2 h的提取效果为最好。

2.4.3 溶剂量对提取的影响:对3 g槐花分别用40、60、80、100、120 mL的溶剂提取，实验表明以80 mL的溶剂量提取效果最好。

3 讨论

研究表明，本方法操作简单，比《中华人民共和国药典》(2010年版)规定的用索氏提取器加乙醚回流的方法简单易行，方法采用全物理过程，无污染，应用前景较好。采用本方法提取得到的总黄酮含量较高，建立总黄酮含量测定的方法准确可靠。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［S］．2010年版．北京:中国医药科技出版社，2010:677-679．

［2］夏杏洲，张辉，魏传晚．榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］．食品研究与开发，2002，23(5):35-37．

［3］张芳．HPLC法同时测定复方利血平片中苯磺酸氨氯地平和缬沙坦含量［J］．中国医院用药评价与分析，2011，11(8):721-724．

［4］刘祥义．超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究［J］．云南化工，2003，30(1):27-28．

［5］舒晓宏，冯梅，陈华，等．槐花米中芦丁提取最佳pH值的实验研究［J］．大连医科大学学报，2005，27(2):91-92．

Determination of The Total Flavonoids Extracted Ultrasonically from Sophora Japonica L.:A Methodological Study

ZHANG Xue-liang1*，FAN Yu-ku2，WANG Xia-ying1#，WANG Li1(1.Ningxia Guyuan Institute for Drug Control，Ningxia Guyuan 756000，China;2.Ningxia Guyuan Municipal People’s Hospital，Ningxia Guyuan 756000，China)

OBJECTIVE:To determine the content of total flavonoids extracted ultrasonically from Sophora japonica L.METHODS:60%ethanol was used for ultrasonic extraction of total flavonoids from Sophora japonica L.，and the content of total flavonoids was determined by ultraviolet spectrophotometry in which the absorbance was measured at a wavelength of 500 nm，then the content of total flavonoids in the sample was figured out.RESULTS:Good linear relationship was achieved when rutoside control solution was at a concentration range of 4.0-20.0 μg·mL－1;the average recovery rate was 99.7%with RSD of 0.98%(n=5).CONCLUSION:The experimental method is simple;ultrasonic extraction and purification method results in high purity of flavonoids and the determination method for total flavonoids content is reliable.

Ultrosonic extraction;Sophora japonica L.;Total flavonoids;Content determination

R932

B

1672－2124(2012)09－0816－02

2012-01-08

2012-03-27)