辐照对盐酸异丙肾上腺素注射液含量变化的影响

向明凤，卢 华，管海燕，谢 红，卢来春

(1.中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所药剂科，重庆 400042;2.山东省即墨市中医院妇产科，山东 青岛 266000)

盐酸异丙肾上腺素注射液为无色澄明液体，为β受体激动剂[1]。其注射剂需在遮光、密闭、阴凉处进行保存[2]。近几年全球频繁出现核泄漏事件，促使一些地区的自然环境发生了剧烈变化，让暴露于60Co-γ射线辐照下的生物体受到不可恢复的损失和破坏的威胁增多，同时影响常用药品中有效物质的物理性能和化学组分等稳定性因素相应增加。因此，考察核辐射环境下药品的稳定性非常有价值，特别是针对一些常备急救药品的稳定性研究[2]。由于目前尚未见考察药品在核辐射下稳定性的相关报道。本试验中设计以盐酸异丙肾上腺素注射剂为模型药物，初步考察其吸收不同辐照剂量后含量变化，为辐照下药品的存贮提供参考。

1 仪器与试药

辐照设备(Allanace型γ辐照装置，60Co-γ射线，第三军医大学辐照研究中心提供);Agilent Technologies 1200 series高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Sartorius BT 124S电子分析天平(德国赛多利斯公司)。盐酸异丙肾上腺素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100341-200702，含量99.2%);盐酸异丙肾上腺素注射剂(上海禾丰制药有限公司，规格为5 mL∶0.1 g，批号为100807);甲醇(色谱纯);庚烷磺酸钠为离子对试剂;其他均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法

2.1.1 色谱条件[2]与系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil Technology C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:0.22%庚烷磺酸钠溶液(用磷酸调pH至3.0)-甲醇(55∶45);检测波长:280 nm;柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;进样量:20μL。该色谱条件下，色谱图如图1。可见，阴性对照品溶液对测定无影响，主药盐酸异丙肾上腺素能与注射剂中的辅料较好分离。

图1 高效液相色谱图

2.1.2 溶液制备

精密称取盐酸异丙肾上腺素对照品0.010 0 mg，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，即得质量浓度约为100μg/mL对照品溶液。精密量取盐酸异丙肾上腺素注射液1 mL，置100 mL容量瓶中，流动相定容，移取1 mL，置100 mL容量瓶中，流动相定容，摇匀，即得10μg/mL的注射液溶液。精密量取辐照后的盐酸异丙肾上腺素注射液1 mL，按上述注射液溶液配制方法配制，即得10μg/mL的供试品溶液。以流动相为阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

线性关系考察:取对照品溶液，配成质量浓度为2.5，5.0，7.5，10.0，12.5 μg/mL 的溶液，分别进样 20 μL。记录色谱图，以质量浓度(C)为横坐标、峰面积(A)为纵坐标作图，得回归方程A=12.412 3C+0.774 6，r=0.999 9(n=5)。结果表明，盐酸异丙肾上腺素质量浓度在2.5～12.5μg/mL的范围内与峰面积线性关系良好。

日内精密度考察:取对照品溶液，配成质量浓度为 4，5，6μg/mL的溶液各3份。依法进样测定，记录色谱峰面积。结果3个质量浓度的溶液的 RSD分别为0.46%，0.06%，0.19%(n=3)，均小于2%，表明方法日内精密度较好。

日间精密度与稳定性考察:取对照品溶液，配制成质量浓度为4，5，6μg/mL的溶液，密封避光于4℃保存。按2.1项下色谱条件，同一溶液进样测定5 d，记录色谱峰面积。结果3个质量浓度的溶液的 RSD分别为1.02%，0.74%，0.70%(n=3)，均小于2%，表明日间精密度较好，密封避光于4℃保存5 d内盐酸异丙肾上腺素稳定性较好。

回收率试验:精密移取线性关系考察项下对照品溶液(10μg/mL)，移取1，2，3 mL各3份，分别加入2.2项下肾上腺素注射液溶液3 mL，用流动相定容至 10 mL，配制成质量浓度为 4，5，6μg/mL的溶液，每个质量浓度平行配制3份，依法进样测定，记录色谱峰面积。结果3个质量浓度的溶液的回收率分别为99.21%，95.13%，95.66%，总体平均回收率为96.67%，RSD为2.29%，表明方法准确度较好。

2.2 辐照处理

以2010年版《中华人民共和国药典(二部)》药品常用辐射灭菌吸收剂量25 kGy为最大辐射吸收剂量[3]。取同一批号盐酸异丙肾上腺素注射液，分为6组，每组3支，分别在60Co-γ射线放射源中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 的辐照剂量后取出，待含量测定用。

2.3 辐照处理后样品外观、澄明度考察

吸收不同强度辐照剂量与未接受辐照处理的盐酸异丙肾上腺素注射液外观如图2。吸收不同辐照剂量后盐酸异丙肾上腺素注射液经灯检，其注射液澄明度没有变化，无沉淀产生;由图2可知，注射液颜色随吸收剂量增加而加深，但4 kGy以下时注射液颜色变化不明显。

图2 不同强度辐照后盐酸异丙肾上腺素注射液

2.4 不同强度辐照后样品含量测定

取辐照前及辐照后的样品，以流动相配制理论质量浓度约为10μg/mL的待测溶液。分别按2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱峰面积，计算含量。结果见表1。可见，随着辐照强度的增加，含量有逐渐降低的趋势，一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 辐照剂量后含量下降为未辐照前的98.64%，95.59%，95.40%，92.80%，86.03%，79.52%;8 kGy辐照后放置4个月，含量未见下降。

表1 辐照后盐酸异丙肾上腺素含量(μg/mL，n=3)

将表 1 中一次性吸收 1，2，4，8，16，25 kGy 的辐照剂量的数据，以辐照强度(X)为横坐标、质量浓度(Y)为纵坐标拟合回归方程，得回归方程 Y=-0.078X+9.89，r=0.991 0(n=6)。结果表明，样品辐照后质量浓度变化呈一定的线性关系。

3 讨论

与2010年版《中国药典(二部)》盐酸异丙肾上腺素含量测定方法中使用0.22%庚烷磺酸钠溶液-甲醇=55∶45(用磷酸调pH至3.0)为流动相比较，本试验含量测定方法中，仅在流动相pH调整顺序上进行了改进，将药典中调整流动相pH改为调整缓冲液pH，经方法学验证，此方法能使盐酸异丙肾上腺素与注射剂中其余辅料成分较好分离，方法精密度、准确度均较好，且减少检测步骤及节省试剂，可有效提高效率、降低检测成本。

本试验结果显示，盐酸异丙肾上腺素注射液吸收不同强度的辐照剂量后，主药含量随吸收辐照剂量的增加而下降，且下降趋势具有一定的线性特征;SPSS统计可知，辐照1 kGy对含量具有显著影响，2，4，8，16，25 kGy 对含量影响极显著，但吸收 8 kGy 辐照剂量以下的药物含量下降幅度未至10%，在标示量的85%～110%之内[3]。试验结果虽然在统计学上有显著性差异，但注射剂质量在合格范围之内，因此初步认为，吸收小于8 kGy的辐照剂量对盐酸异丙肾上腺素注射液含量没有显著影响。盐酸异丙肾上腺素注射液在吸收8 kGy辐照剂量后外观变化不明显，但含量下降至近标示量的85%，吸收大于8 kGy的辐照剂量后含量变化更显著。因此，在吸收大于或等于8 kGy辐照剂量盐酸异丙肾上腺素极度不稳定，应注意累积吸收在此辐照剂量之上对盐酸异丙肾上腺素注射液进行防辐射贮存。

8 kGy辐照处理后放置4个月，与8 kGy辐照处理后立即测定含量比较，虽然统计结果显示含量变化具有显著性差异，但放置后含量没有下降趋势，反而为放置前含量的100.99%。因此，初步认为一次性吸收一定辐照剂量后，盐酸异丙肾上腺素注射液放置过程中的含量没有变化，但还需进一步考察长期放置影响，以进一步探究一次性吸收一定辐照剂量后其放置过程中的含量变化情况。

盐酸异丙肾上腺素注射液经辐照后颜色发生了变化，根据图1C中以及测定辐照1～25 kGy后药物含量数据可知，自2 kGy辐照处理后主药含量下降，注射剂颜色加深，说明因射线的能量使盐酸异丙肾上腺素分解、组合成了某种物质，而导致了注射液颜色的变化，对此的研究还有待进一步深入。

[1]段 霖，王峰伟，黄海生.微量泵静脉注射异丙肾上腺素抢救阿-斯综合征临床观察[J].临床误诊误治，2007，20(5):18.

[2]徐 靖，卢 华，管海燕，等.辐照对呋塞米注射液含量的影响考察[J]. 中国药房，2012，2(5):440-442.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:701-702，附录191.