汉黄芩素的小鼠急性毒性作用研究

陈永顺，杜士明，董永成

(湖北医药学院附属太和医院药学部，湖北 十堰 442000)

汉黄芩素(wogonin)为唇形科植物黄芩的主要活性成分之一，是一种黄酮类化合物，具有广泛的生物活性，尤其是其抗炎和抗肿瘤活性受到了人们的广泛关注。汉黄芩素可广泛作用于肿瘤细胞生成的各个通路，体内外研究证实其对肿瘤细胞具有较好的选择性，并能增强耐药肿瘤细胞对传统药物的敏感性具有较强的药理活性，特别对肝癌细胞有较强抑制作用，对四氯化碳、β-半乳糖胺和酒精引起的肝损伤具有保护作用[1-2]，有较大深入研究价值。鉴于目前尚未见有关其确切安全剂量的文献报道，本试验对汉黄芩素的急性毒性做了研究，采用口服灌胃和腹腔注射两种给药途径来对其急性毒性进行评价，为安全使用汉黄芩素提供安全依据。

1 材料

汉黄芩素(上海同田生物技术有限公司，纯度不小于98.5%，批号为20101208);丙二醇(广州凌飞化工有限公司，批号为20100325)。动物SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，体重(20±2.0)g(湖北医药学院实验动物中心)，动物合格证号为SCYY(鄂)2002-0016。

2 方法与结果

2.1 口服急性毒性试验[3－4]

小鼠灌胃给予汉黄芩素，经预试验找其最大致死剂量为13.56 g/(kg·d)，最小致死剂量为4.29 g/(kg·d)。将小鼠50只，按体重随机分5组，每组10只，雌雄各半。以13.56 g/kg为最高剂量，按1∶0.75比例，分别给5组小鼠一次性口服汉黄芩素，给药量分别为 13.56，10.17，7.63，5.72 ，4.29 g/(kg·d)，供试液以40%丙二醇水溶液配置成不同浓度，给药容量为20 mL/kg。给药前禁食不禁水12 h，给药后3 h内禁食，饲养观察14 d，密切观察各小鼠的进食、饮水情况及14 d内可能出现的异常肌肉运动、对外反应、瞳孔改变、大小便异常、眼球凸出、呼吸异常、皮肤颜色改变等毒性反应和死亡情况。若有小鼠死亡，则将死亡小鼠解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、脑、胃、小肠等脏器的改变，14 d观察期结束后，将每组存活的小鼠处死进行解剖，按照上述同样方法对主要脏器大体病理变化进行肉眼观察。记录小鼠毒性反应及死亡情况，用Bliss法计算半数致死量(LD50)[5]。

汉黄芩素灌胃后不同时间累积死亡小鼠数见表1，灌胃不同剂量汉黄芩素小鼠死亡率见表2。小鼠灌胃给药后自发活动减少，随着时间的增加，小鼠出现行动迟缓，异步态、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐等;小鼠死亡多发生于24 h之内，存活小鼠多于24 h后上述症状减轻，24～72 h逐渐恢复正常;活动、摄食饮水等多在给药2～3 d后基本恢复正常。死亡小鼠解剖，肉眼下观察心、肝、脾、肺、肾等重大脏器的变化，发现胃底表面黏膜颜色苍白，肝脏有病变，其余重要脏器未见明显异常。剂量越高出现越早，症状越明显。

2.2 腹腔注射急性毒性试验

小鼠腹腔给予汉黄芩素，经预试验其最大致死剂量为9.86 g/(kg·d)，最小致死剂量为 4.46 g/(kg·d)。以 9.86 g/(kg·d)为最高剂量，按1∶0.82比例依次设置5组，给药量分别为9.86，8.09，6.63，5.44，4.46 g/(kg·d)，分别给小鼠一次腹腔注射，同2.1项下方法连续观察14 d，每日记录小鼠毒性反应及死亡数，用Bliss法计算 LD50。

小鼠腹腔注射汉黄芩素后不同时间累积死亡小鼠数见表3，注射不同剂量小鼠死亡率见表2。小鼠腹腔注射汉黄芩素后，其中毒症状与口服给药相似，均出现行动迟缓，异步态、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐等，但其中毒发生时间比灌胃给药发生得更早。对死亡小鼠进行解剖，肉眼下观察心、肝、脾、肺、肾等重大脏器的变化，肝脏有病变并肿大，其余重要脏器未见明显异常。比较灌胃与腹腔注射两种给药途径的 LD50，可见灌胃的 LD50比腹腔注射时的 LD50大，表明汉黄芩素的不同给药途径毒性大小不一样。

表1 汉黄芩素小鼠灌胃后不同时间的累积死亡数(只)

表2 灌胃不同剂量汉黄芩素的小鼠死亡率

表3 汉黄芩素小鼠腹腔注射后不同时间的累积死亡数(只)

表4 腹腔注射不同剂量汉黄芩素的小鼠死亡率

3 讨论

汉黄芩素为临床常用中药之一，应用广泛，疗效确切。目前对汉黄芩素的研究较少，本试验提取了汉黄芩素，通过灌胃及腹腔注射给药两种途径对其急性毒性进行了观察和评价。结果发现，汉黄芩素小鼠灌胃的 LD50值为7.62 g/(kg·d)，腹腔注射的LD50为6.08 g/(kg·d)，与其常用剂量相比其安全性比较高。

急性毒性试验不等于 LD50测定，急性毒性试验结果仅提供LD50值是不够的，试验期间应详细记录动物的毒性反应情况和死亡动物分布，尤其是中毒和死亡的发生时间、毒性反应的持续时间和恢复时间。本试验通过灌胃及腹腔注射给药两种途径观察了汉黄芩素的毒性反应及死亡动物分布情况，发现其急性毒性主要表现为行动迟缓、异步态、心率加快、呼吸急促、连续性抽搐等，死亡小鼠解剖后可见胃底表面黏膜颜色苍白，肝脏有病变，其余重要脏器未见明显异常。剂量越高出现越早，症状越明显。此外，通过其死亡分布可见死亡多发生于24 h之内，存活小鼠多于24 h后上述症状减轻，24～72 h逐渐恢复正常。

[1]杨 莉，尤启冬，杨 勇，等.汉黄芩素抗肿瘤作用研究进展[J].中国药科大学学报，2009，40(6):576-579.

[2]任晓东，符 伟，张晓芸，等.天然产物汉黄芩素的研究进展[J].中国新药杂志，2011，20(9):777-783.

[3]赵晓风，吴友良，彭 尧，等.展舒胶囊急性毒性试验[J].中国药师，2010(1):65-66.

[4]韦桂宁，周 军，何 飞.抗复感颗粒对脾虚小鼠抗应急和急性毒性实验研究[J].中国药师，2010，13(8):1 098-1 100.

[5]陈 奇.中药药理研究方法学[M].北京:人民卫生出版社，1993:112-114.