土圞儿石油醚萃取物的GC－MS分析

胡轶娟 程 林 浦锦宝 梁卫青 郑军献 魏克民

土圞儿为豆科植物土圞儿Apios fortunei Maxim．的干燥块根，浙江省民间用药。其性凉，味甘、微苦，性平，无毒，具有清热解毒、活血止痛、祛风化痰、消肿等功效。土圞儿中的化学成分有生物碱、淀粉等，其中生物碱是一类重要的生理活性物质。《贵州民间草药》:“散积，理气，解毒，补脾”。《全国中草药汇编》:“清热解毒，化痰止咳”。《贵州药植调查》:“治蛇咬伤，并治疗癀，去毒”［1］。可用于感冒咳嗽，百日咳，咽喉肿痛，疝气，痈肿，瘰疬。由于其为地方药材，到目前为止，对它进行的研究并不多。在已见的报道中，主要对土圞儿的原植物形态、药材性状、显微特征等进行了初步研究。本研究采用系统溶剂萃取法，从土圞儿植物块根中得到石油醚萃取物，并用气相色谱－质谱联用仪对土圞儿块根石油醚萃取物化学组分进行定性研究。分析鉴定了11个化学成分，为其药效评价和应用提供科学依据。

材料与方法

1．仪器和试药:美国Varian公司450GC－240MS气相色谱－质谱联用仪，Varian CP Sil 24CB气相色谱柱(30m×0.25mm，0.25μm)，土圞儿采自浙江磐安，经鉴定为豆科植物土圞儿Apios fortunei Maxim的干燥块根。石油醚(60～90℃)为国产分析纯试剂，BSTFA∶TMCS(99∶1)购于美国REGIS公司(批号:CFCQ－270121)。

2．方法［2～11］:(1)石油醚萃取物的制备:取土圞儿药材6kg，粉碎成粗粉，加8倍量95%乙醇加热回流提取3次，每次2h，提取液减压回收乙醇至无醇味，加热水至2L成混悬液，用石油醚(60～90℃)萃取3次，每次2L，回收石油醚，得石油醚萃取物86．86g。收率为1．45%。(2)供试品溶液的制备:取石油醚萃取物适量，加环己烷溶解成6mg/ml溶液，取5ml置具塞试管中，氮吹至干，加入 BSTFA∶TMCS(99∶1)试剂0.5ml，加盖密封后，振摇 30s，于 80℃烘箱反应 1h，取出，放冷，即得。(3)GC－MS条件:毛细管色谱柱(30m×0．25mm，0．25μm)。汽化温度250℃;程序升温，初始温度 50℃，保持2min，以4℃/min的速度升温至200℃，保持10min，再以5℃/min的速度升温至250℃，保持20min;载气为高纯氦气，流量1m l/min;进样量1μl;分流比 1∶20。EI电离源，70eV;离子源温度220℃;扫描质量范围(m/z)50～1000。(4)石油醚萃取物的化学成分分析:对总离子流图中的各峰经质谱扫描后得到质谱图，通过工作站N IST标准质谱图库进行检索，并结合有关文献进行人工检索和解析，确认各化合物。通过工作站数据处理系统，按峰面积归一化法计算各化合物在挥发油中的相对百分含量。

结 果

本实验对未衍生化前的石油醚萃取物进行GC分析，结果检测到的色谱峰较少，且强度低，表明石油醚萃取物中的各化学成分主要为非挥发性成分，运用BSTFA∶TMCS(99∶1)衍生化后，挥发性增强，检测到较多的色谱峰，且强度增大，见图1。

图1 衍生化前(上图)后(下图)土圞儿石油醚萃取物的GC色谱图

比较 了 Varian CP Sil 5CB(30m ×0．25mm，0.25μm)、8CB(30m ×0．25mm，0．25μm)、24CB(30m ×0．25mm，0．25μm)和 HP － INnowax Polyethylene Glycol色谱柱(30m ×0．32mm，0．25μm)4 种色谱柱，结果Varian CP Sil 24CB的分离效果最佳。对气相色谱程序升温条件进行了考察，最终确定上述程序升温条件下分离度较好，峰数较多。通过GC－MS联用技术分析了土圞儿石油醚萃取物中的成分，通过计算机质谱库检索，共鉴定出11个化合物，采用峰面积归一定量法，求得各化合物的相对百分含量。土圞儿石油醚萃取物中主要成分及相对含量见表1，总离子图见图2。

表1 土圞儿石油醚提取物中的化学成分及相对含量

图2 土圞儿石油醚萃取物的总离子图

讨 论

从石油醚萃取物中检出16个色谱峰，鉴定出11个化合物，占石油醚萃取物总量的68．75%。其中，有机酸类成分6个(54．54%)，肌醇的3种同分异构体(27．27%)，另外还有 α －D － 葡萄糖苷(9．09%)、色氨酸(0．29%)。在鉴定的成分中，α－D－葡萄糖苷的相对含量最高，占57．18%。可能是土圞儿中淀粉和多糖类成分含量较高，萃取过程中有部分淀粉和多糖带入萃取物中。在鉴定出的11个成分中，6个为有机酸类成分，其中2个为不饱和脂肪酸，9，12－十八碳二烯酸的相对含量较高，为14．81%。从石油醚萃取物中检测出肌醇的3种同分异构体，广泛分布在动物和植物体内。肌醇(MYO)是环已六醇中9种立体异构体的一种，属于维生素B族。MYO在细胞形态发生和生成、脂质合成、细胞膜的结构以及细胞生长方面起着极其重要的作用［12］。从石油醚萃取物中检出16个色谱峰，鉴定出11个化合物，另外5个色谱峰在10～40min之间，在N IST标准质谱图库未能找到相应的化合物，有待于进一步的研究。通过与空白图谱对照，表明在50～70min之间未鉴别的色谱峰为BSTFA∶TMCS(99∶1)衍生剂的络合物。本实验对土圞儿石油醚萃取物进行了体外抗肿瘤实验，发现浓度为 50μg/ml、100μg/ml时对 HepG2细胞株的抑制率分别为31．8%、52．4%，有一定的抑制作用。其他的生物活性还有待于进一步研究。

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