中药饮片对中成药非法添加检验的影响

北京市西城区药品检验所（100037）赵鸣舒 安莹 王静 张仕杰 宿威 王敏

伴随着药品制假水平的不断提高，近年来对于中成药非法添加的研究日趋深入[1][2][3][4][5][6][7][8][9][10]，但并没有关于中药饮片对非法添加检验方法影响的相关研究。为了能更深入地研究非法添加的检验方法，避免因中药饮片自身因素而影响检验结果的准确性，北京市西城区药品检验所的检验人员特地针对中药饮片进行了非法添加的检验，从而可以有效地避免假阳性现象的产生。

通过前期对辖区医院制剂非法添加的检验，检验人员发现激素类成分即可应用于止咳平喘类药品中，也可应用于祛风除湿类药品中，而且激素类成分的相关检验方法抗干扰能力较差，假阳性、假阴性率较高。此次，检验人员针对目前止咳平喘类药品和祛风除湿类药品中常用的中药饮片，应用醋酸泼尼松非法添加的检验方法进行全面检测，评估中药饮片对相关检验方法的影响程度。

1 仪器与试药

1.1仪器 LC-20A型高效液相色谱仪（日本岛津公司)；AE240型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

1.2试药 醋酸泼尼松对照品（中国药品生物制品检定所，100012-200706）。青黛、没药、鸡血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、连翘、当归、白芷、丹参（中国药品生物制品检定所，批号分别为1170-200001、120967-201104、121173-200902、121027-200403、120970-200904、120949-200504、120993-200403、120908-200613、120927-200613、120945-200406、120923-200509）。乙腈、四氢呋喃为色谱纯，其余为分析纯，水为纯化水。

附表2 色谱图结果举例

2 方法与结果

2.1色谱条件

2..1.1色谱柱 Agilent C18柱（150mm×4.6mm，5um）；流动相：乙腈-水（33∶67）；检测波长：240nm；流速：1.0mL/min。2.1.2梯度洗脱方法 色谱柱：Agilent C18柱（150mm×4.6mm，5um）；流动相：A（水-四氢呋喃=100∶1），B（乙腈-水-四氢呋喃=80∶20∶1）；梯度洗脱程序（见附表1）；检测波长：240nm；流速：1.0mL/min。

2.2 溶液制备

2.2.1对照品溶液制备 精密称取醋酸泼尼松对照品10mg，置100mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为醋酸泼尼松对照品溶液。

附表1 梯度洗脱程序表

2.2.2供试品溶液制备 精密称取青黛对照药材1g，置于100mL量瓶中，加入甲醇适量，超声处理（功率250W，频率35kHz）30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，取续滤液作为青黛供试品溶液。同样方法分别制成没药、鸡血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、连翘、当归、白芷、丹参供试品溶液。

2.2.3阳性对照液的制备 精密量取醋酸泼尼松对照品溶液1mL，置10mL量瓶中，加青黛供试品溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45um微孔滤膜滤过，即得。同法分别制成没药、鸡血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、连翘、当归、白芷、丹参阳性对照溶液。

2.3HPLC法测定

2.3.1精取醋酸泼尼松对照品溶液、供试品溶液和阳性对照液各20uL，分别注入液相色谱仪，按“2.1.1”项下色谱条件测定。试验结果显示：青黛、鸡血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、连翘、当归、白芷的供试品色谱中未出现与对照品保留时间相同的色谱峰；相应的阳性对照液色谱中出现与对照品保留时间相同的色谱峰。没药、丹参供试品色谱中出现与对照品保留时间相同的色谱峰；相应的阳性对照液色谱中，与对照品保留时间相同的色谱峰数值明显增大。（色谱图举例见附表2）。

2.3.2梯度洗脱法测定 精取醋酸泼尼松对照品溶液；没药、丹参供试品溶液和相应的阳性对照液各20uL，分别注入液相色谱仪，按照“2.1.2”项下色谱条件测定。结果显示：供试品色谱中未出现与对照品保留时间相同的色谱峰；相应的阳性对照液色谱中出现与对照品保留时间相同的色谱峰。

2.4样品分析 “2.1.1”项下色谱条件是《中国药典》2010年版二部[11]对醋酸泼尼松的检测方法，青黛、鸡血藤、穿山甲、乳香、郁金、夏枯草、连翘、当归、白芷等9味中药饮片对该方法无干扰，而没药、丹参只有在按照“2.1.2”项下梯度洗脱检测系统中，才对检测方法无干扰。但是梯度洗脱方法存在操作过程繁琐、检测时间长、色谱图影响因素多等缺点。因此，如果要对成药进行醋酸泼尼松的非法添加检测时，应考虑到上述的干扰因素，灵活利用各种方法排查药品的非法添加情况。

3 讨论

中药成分复杂，单味药中就可能含有多种成分。近年来，伴随着药品制假工艺的不断提高，中成药中非法添加西药成分的案例已经屡见不鲜。当前对于非法添加的检验，仅仅停留在非法添加成分是否可以检测到或某一品种成药可以测到非法添加成分，而未考虑中药材对相关检测方法的影响。此次，检验人员仅对部分药材进行了醋酸泼尼松非法添加的检验，就发现2种饮片对部分检验方法有明显影响。因此，检验人员在进行非法添加方法研发的时候，首先应考虑到中药自身的影响因素，需要进行全面地、系统地研究，明确各类干扰因素后，再进行相关研究，有效地降低相关方法假阳性、假阴性出现的概率，确保检测的准确性。

研究中药饮片对非法添加方法的影响，首先应考虑到相关非法添加成分的药效，有的放矢地排查相关饮片，并不需要对所有市面上的饮片进行排查。在发现仅有少数对相关方法有影响时，可以采取更为精密、先进的仪器进行检测。确定其影响因子以后，再重新引入相关方法中，确保非法添加检测方法的科学性和准确性，提高相关方法的抗干扰能力。