铁皮石斛镇痛与抗炎作用研究

侯少贞，李焕彬，郭建茹，黄 松，赖小平

（广州中医药大学，广东广州510405）

铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）为兰科多年生草本气生植物，是我国特有的名贵中药［1］。其滋补功效卓著，素有“千金草”之称，更被国际植物界称为“植物界大熊猫”。李时珍在《本草纲目》中评价铁皮石斛“除痹，下气，补五脏虚劳羸瘦，强阴益精，久服，厚肠胃，补内绝不足，平胃气，长肌肉，益智除惊，轻身延年。”《道藏》更把铁皮石斛列为“中华九大仙草”之一。铁皮石斛的生长环境要求严格，而近年来以铁皮石斛为原料开发的保健产品日益走俏，使野生资源日趋稀少。铁皮石斛化学成分多样，主要含有生物碱、多糖、氨基酸等。许多药理研究表明，铁皮石斛具有明显的抗氧化、抗肿瘤、降低血糖以及提高免疫力等药理作用，在治疗恶性肿瘤、胃肠道疾病、糖尿病、白内障、关节炎、血栓闭塞性脉管炎及慢性咽炎等疾病有很好的疗效［2］。目前，铁皮石斛通过原球茎诱导、增殖、分化苗形成与生长、试管苗移栽等培养技术实现了人工栽培［3］。

临床上，铁皮石斛的服用方式主要为干品枫斗煎煮取汁服用，亦有医家推荐采用鲜品榨汁取服。为进一步评价新鲜（人工种植）铁皮石斛汁的药理作用，本试验采用镇痛、抗炎、免疫调节等试验对其进行考察。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药品 铁皮石斛（鲜品），广东永生源生物科技有限公司提供，批号：20101115；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制药股份有限公司产品，批号110733，规格：0.75 mg／片，剂量：0.75 mg／kg；吲哚美辛肠溶片，又名消炎痛，广东华南药业有限公司产品，批号：080701，规格：25 mg／片。

1.1.2 主要试剂 二甲苯，天津市大茂化学试剂厂产品，批号：110501，分析纯；冰乙酸，天津市大茂化学试剂厂产品，批号：20111101，分析纯；沃凯牌伊文思蓝，国药集团化学试剂有限公司产品，批号：WC20110209，规格10 g／瓶。

1.1.3 主要仪器 秒表，试管架，热板测痛仪，500 mL玻璃钟罩，橡皮管，超声雾化器，XZC－4型小动物自主活动测定仪，721型分光光度计，打孔器。

1.1.4 实验动物 SPF级昆明小鼠及SD大鼠，均由广州中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK （粤 ）2008－0020。 凭 证 号：0043393、0062553、0062559。

1.2 方法

参照文献［4］进行。

1.2.1 镇痛试验

1.2.1.1 扭体镇痛试验 将小鼠随机分为4组：空白对照组，消炎痛阳性药组（5 mg／kg），石斛榨汁高剂量组（2 g生药／kg），石斛榨汁低剂量组（0.5 g生药／kg）；每组12只。小鼠按0.1 mL／10 g体重等容量灌胃，空白对照组以蒸馏水灌胃，消炎痛阳性组以消炎痛溶液灌胃，铁皮石斛给药组分别给予高、低浓度的榨汁液。1次／d，连续5 d。末次给药后2 h，各组小鼠腹腔注射6 mL／L醋酸液0.2 mL／只，记录15 min内各组小鼠扭体反应次数。计算药物镇痛百分率。药物镇痛百分率＝（对照组平均扭体反应次数－给药组平均扭体反应次数）／对照组平均扭体反应次数×100%。

1.2.1.2 热板镇痛试验 实验动物的分组及给药方法同1.2.1.1。分别于给药前及末次给药后30、45 min测定各组小鼠的热板痛阈值。将各组小鼠置于55℃恒温热板上，立即开始计时，以小鼠舔后足足底视为出现疼痛反应并立即停止计时。所计时间为痛阈值。比较给组间不同时间点的痛阈值大小。

1.2.2 抗炎试验

1.2.2.1 小鼠耳肿胀试验 实验动物的分组及给药方法同1.2.1.1。末次给药后2 h，将二甲苯0.02 mL均匀涂于小鼠右耳，左耳不涂二甲苯作为对照。30 min后将小鼠颈部脱臼处死，用直径为6 mm的打孔器分别在左、右两耳同一部位打下圆耳片，称重，求左、右耳片重量之差作为肿胀度。

1.2.2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性试验 实验动物的分组及给药方法同1.2.1.1。末次给药后2 h，各组小鼠尾静脉注射伊文思蓝溶液0.1 mL／10 g，立即腹腔注射6 mL／L醋酸0.2 mL／只。30 min后，颈椎脱臼处死小鼠，小心剪开腹腔，用5 mL生理盐水冲洗腹腔数次，收集洗涤液，1 000 r／min离心5 min，取上清液于590 nm处测吸光度（OD值）。比较各组吸光度的大小。

1.2.2.3 肉芽肿试验 将40只大鼠随机分为4组，每组10只，分别为空白对照组、醋酸地塞米松阳性对照组（0.75 mg／kg），石斛榨汁高剂量组（2 g生药／kg），石斛榨汁低剂量组（0.5 g生药／kg）。将大鼠用乙醚浅表麻醉后，腹部去毛消毒。腹部切口，将两个灭菌棉球（每个棉球重50 mg±1 mg，高压灭菌），分别植入大鼠两侧腋窝皮下。手术后各组动物连续3 d天肌肉注射青霉素160单位／只以防感染。手术后第2天各组开始给药，空白对照组、模型组以蒸馏水灌胃（10 mL／kg），给药组分别给予相应的药物。每天给药1次，连续7 d。第8天将大鼠颈椎脱臼处死，取出棉球（连同周围结缔组织一起取出，剔出脂肪组织），在60℃烤箱放置12 h后称重，减去棉球重量，即为肉芽肿净重。比较各组肉芽肿重量的差别。

1.2.3 碳粒廓清试验 将48只小鼠随机分为4组，即空白对照组，参维灵阳性药组（0.4 g／kg），石斛榨汁高剂量组（2 g生药／kg），石斛榨汁低剂量组（0.5 g生药／kg），每组12只。除正常组每天蒸馏水灌胃外，其余各组给予不同的药液。连续给药15 d，末次给药30 min后，尾静脉注射中华墨汁0.1 mL／10 g，注射不同时间（2 min、12 min）用吸管（预先用肝素溶液湿润）分别从眶后静脉丛取血20 μL，溶于2 mL的1 g／L Na2CO3溶液中摇匀，置721型分光光度计在波长650 nm下测吸光度（OD）；将小鼠处死，分别称取脾脏，肝脏，胸腺和体重。计算胸腺指数，脾脏指数，廓清指数K。胸腺（脾脏）指数＝胸腺重量或脾脏重量（mg）／体重（10 g）×1 000，即 K＝（log OD1－logOD2）／（t2－t1）。

1.2.4 统计学处理 采用SPSS 16.0软件分析系统对所得数据进行统计分析，数据采用¯X±SD表示。所有定量资料均经过正态性检验，定量数据的组间差异性检验采用单因素方差分析 （One－Way ANOVA），以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 镇痛试验

2.1.1 扭体镇痛试验 由表1可知，各给药组均能减少小鼠扭体次数，给药组与对照组比较有显著性差异（P＜0.01或P＜0.05），表明铁皮石斛榨汁液能起到明显的镇痛作用。

表1 药物对小鼠扭体次数的影响Table1 Effects of drugs on mouse writhing times

2.1.2 热板镇痛试验 由表2可知，给药前，各组小鼠的热板痛阈值无显著差异；给药后，各给药组的小鼠痛阈值均有提高，与对照组比较差异有显著性（P＜0.01或P＜0.05），表明石斛榨汁液能起到明显的镇痛作用。

2.2 抗炎试验

2.2.1 小鼠耳肿胀试验 由表3可知，各给药组有明显抑制二甲苯致小鼠耳廓急性炎症肿胀，与空白组比较差异有显著性（P＜0.01或P＜0.05），表明铁皮石斛具有明显的抗炎作用。

表2 药物对热板法小鼠痛阈值的影响Table2 Effects of drugs on the mouse pain threshold of hot plate method in mice

表3 药物对小鼠耳肿胀度的影响Table3 Effects of drugs on mouse ear swelling

2.2.2 小鼠腹腔毛细血管通透性试验 由表4可知，与空白组比较，阳性药组与石斛榨汁高剂量组的腹腔渗出物OD值较小，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示铁皮石斛具有抗炎作用，能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的增大。

2.2.3 大鼠肉芽肿试验 由表5可知，阳性药、石斛高剂量的肉芽肿重量显著低于空白组，差异有统计学意义（P＜0.05）。提示铁皮石斛能够抑制棉球肉芽肿亚急性炎症的作用。

2.3 碳粒廓清试验

由表6可见，与空白组比较，各给药组的胸腺指数均显著提高，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）；各给药组的吞噬指数K值亦有升高，差异均有显著性（P＜0.05）。结果提示铁皮石斛能够提高动物的免疫器官重量及提高吞噬细胞的吞噬功能。

表4 药物对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响Table4 Effects of drugs on mouse peritoneal capillary permeability

表5 药物对大鼠肉芽肿的影响Table5 Effects of drugs to rat granuloma

表6 药物对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响Table6 Effects of drugs to the thymus index and spleen index of mice

3 讨论

铁皮石斛具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗炎、降血糖和养阴生津等多种生物活性［5］，这主要与其含有多糖、芪类、生物碱、氨基酸和微量元素等多种成分有关。石斛生物总碱能够颉颃脂多糖所引起的炎症反应［6］。石斛免疫调节剂则主要是多糖成分发挥［7］。

基于石斛具有延年益寿的作用，衰老是免疫系统逐渐衰退的过程，也是慢性炎症的发生发展过程［8］。因此，本研究中主要通过镇痛、抗炎、免疫调节等指标首先考察铁皮石斛的药效特点。结果显示，铁皮石斛榨汁液对醋酸、热板诱导的疼痛模型均有显著的镇痛作用；对二甲苯、醋酸诱导的急性炎症模型及棉球肉芽肿亚急性炎症模型均有明显的抗炎作用；能够显著提高动物免疫功能，表现为对免疫器官——胸腺的重量及提高吞噬细胞对血中异物的清除速率。本研究结果为人工种植铁皮石斛在保健方面的应用提供试验依据。

［1］高 正，杨兵勋，陈立钻.铁皮石斛的应用进展［J］.中国现代应用药学杂志，2008，25（8）：693－695.

［2］徐 琼，陈素红，吕圭源.3种不同石斛的化学成分及相关药理学研究进展［J］.亚太传统医药，2010，6（4）：115－118.

［3］李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培［J］.福建热作科技，1999，24（1）：29－31.

［4］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.2版.上海：上海科技出版社，2006.

［5］李 玲，邓晓兰，赵兴兵，等.铁皮石斛化学成分及药理作用研究进展［J］.肿瘤药学，2011，1（2）：90－93.

［6］张俊青，吴 芹，龚其海，等.石京山金钗石斛生物总碱对脂多糖激活星形胶质细胞产生炎症因子的影响［J］.中国药理学通报，2011，27（6）：824－827.

［7］张红玉，戴关海，马 翠，等.铁皮石斛多糖对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响［J］.浙江中医杂志，2009（5）：380－381.

［8］周暄宣，鲍沈平，杨 倩，等.衰老本质和其研究进展［J］.当代医学，2010，16（25）：20－21.