木瓜不同炮制品中水溶性有机酸的含量比较

王光宁 杨银凤 陈秋兰

木瓜为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai干燥近成熟果实，习称“皱皮木瓜”，味酸、温，入肝、脾经，有舒筋活络、和胃化湿之功效，可用于湿痹拘挛、腰膝关节酸重疼痛、暑湿吐泻、脚气水肿等。化学成分有黄酮类、萜类、有机酸类、多糖、鞣质、果胶等［1］。有机酸主要包括苹果酸、柠檬酸、抗坏血酸等成分［2］，是木瓜镇痛的功效成分之一［3］。不同炮制方法对有机酸的影响尚未有研究报道，因此本文以苹果酸为对照品考察不同炮制方法对木瓜中水溶性有机酸含量的影响，为进一步探索木瓜炮制机理奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 十万分之一电子天平BP211D(德国赛多利斯公司)、HH-6恒温水浴锅、数显pH计、25 ml碱式滴定管。

1.2 试药 乙醇、邻苯二甲酸氢钾、酚酞、DL-苹果酸、NaOH固体均为分析纯、明胶(化学纯)；木瓜药材(购于广州柏盛堂中药有限公司，由广东药学院中药学院中药资源系马鸿雁博士鉴定为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai干燥近成熟果实)。

2 方法与结果

2.1 炮制品的制备 通过查阅相关文献［4］及各省市炮制规范整理出五种常用的木瓜饮片。①生品取木瓜片，置60℃烘箱中干燥1 h，取出，待凉后置干燥器中保存。②炒黄品取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加热，炒至表面微黄，取出放凉，筛去碎屑，待凉后置干燥器中保存。③炒焦品取干燥木瓜片20 g，置炒制容器中，文火加热，炒至表面微焦，取出放凉，筛去碎屑，待凉后置干燥器中保存。④盐炙品取干燥木瓜片20 g，照2010版《中国药典》附录炮制通则［5］，加盐水拌匀(食盐：2%)，闷透，置炒制容器内，文火加热，炒至规定程度，取出，放入60℃烘箱烘干，取出，待凉后置干燥器中保存。⑤酒炙品 取干燥木瓜片20 g，照2010版《中国药典》附录炮制通则［5］，加黄酒(10% ～20%)拌匀，闷透，置炒制容器内，文火加热，炒至规定程度，取出，放入60℃烘箱烘干，取出，待凉后置干燥器中保存。

2.2 试液配制 ①酚酞指示剂 精密称定0.2505 g酚酞，加25 ml 95%乙醇溶解，摇匀，即得。②标准氢氧化钠滴定液精密称取氢氧化钠固体4.005 g，加新沸冷水使成1000 ml，摇匀。精密称取基准邻苯二甲酸氢钾0.60142 g，加新沸冷水50 ml，加酚酞指示液2滴，用新配制的氢氧化钠滴定至溶液显粉红色，重复滴定3次，取消耗的氢氧化钠标准溶液得氢氧化钠浓度为0.0961 mol/L。

2.3 测定方法 取同一批木瓜药材粗粉1.0 g，精密称定，加水20 ml，回流提取3次，每次1 h，滤过，合并滤液。加入适量10%明胶溶液，边加边搅拌至溶液不再产生明显沉淀为止，静置，加乙醇使含醇量达75%以上，搅拌使明胶充分沉淀，密封置冰箱4℃冷藏过夜，抽滤，回收乙醇，置100 ml容量瓶中，加水定容，摇匀，即得。精密量取供试品溶液20 ml于具塞三角瓶中，再加1%酚酞指示剂2滴，摇匀，用氢氧化钠标准溶液滴定至微红且30秒内不褪色即为终点。每1 ml氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)相当于6.704 mg的苹果酸(C4H6O5)。根据氢氧化钠滴定液的消耗量，按下式计算样品中水溶性有机酸含量：

水溶性有机酸含量(%)=6.704VM/W

式中，V：滴定时所消耗氢氧化钠滴定液的体积 (ml)；M：滴定时所使用氢氧化钠滴定液的浓度(mol/L)；W：滴定时所取供试品溶液折合的样品重量(g)。

2.4 方法学考察

2.4.1 滴定曲线 ①样品 精密量取供试品溶液20 ml于100 ml烧杯中，浸入已校准电极，用氢氧化钠标准溶液进行滴定，记录消耗体积V及对应的pH值，以V(ml)为横坐标，pH值为纵坐标作图，绘制V～pH滴定曲线图(如图1)。②对照品精密称取0.01374 g苹果酸对照品，加水20 ml使完全溶解，浸入已校准电极，用氢氧化钠标准溶液进行滴定，记录消耗体积V及对应的pH值，以V(ml)为横坐标，pH值为纵坐标作图，绘制V～pH滴定曲线图(如图1)。

图1 滴定曲线

由图1可见木瓜药材水溶性有机酸的滴定曲线呈现明显的滴定突跃，且突跃范围在pH6～10，与苹果酸对照品的滴定曲线极其相似。

2.4.2 精密度实验 取同一份供试品溶液，连续测定6次，计算水溶性有机酸含量。结果RSD为0.66%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性实验 取生品药材1.0 g，精密称定，平行6份，按样品溶液方法提取精制，测定木瓜水溶性有机酸含量。结果平均含量6.72%，RSD2.07%，表明该方法重现性良好。

2.4.4 稳定性实验 取同一份样品溶液，间隔不同时间测定消耗体积，计算水溶性有机酸含量。结果，样品溶液在225 min内RSD为1.89%，表明稳定性良好。

2.4.5 回收率实验 称取木瓜生品0.5 g，按样品溶液方法提取精制。精密量取供试品液9份，每份20 ml，平行3份，分别精确加入苹果酸对照品，按2.3项下方法测定消耗体积，计算水溶性有机酸含量，求得加样回收率，结果如表1。

表1 回收率试验

2.5 样品含量测定 分别称取木瓜生品、炒黄品、炒焦品、酒炙品和盐炙品各1.0 g，平行3份，按照供试品溶液项下方法提取精制，加水定容至100 ml。按2.3项下方法测定消耗体积，计算水溶性有机酸含量，结果见表2。

表2 木瓜各炮制品中水溶性有机酸测定结果

3 讨论

实验结果表明，炮制后木瓜中水溶性有机酸含量均下降，其中炒黄品水溶性有机酸含量降低幅度最小，炒焦品、酒炙品和盐炙品中水溶性有机酸的含量相差不大，说明炮制时间和温度对水溶性有机酸的含量有一定影响。木瓜中水溶性有机酸的主要成分是苹果酸和柠檬酸，两者均属于羟基酸，受热不稳定，易发生脱羧反应和脱水反应，因此加热炮制会使水溶性有机酸受到破坏，含量降低。

本文采用改良明胶法除去鞣质和醇沉除去黄酮类成分，再进行滴定可防止干扰使结果更加准确。考察了药材与明胶质量比分别为1∶1、1∶1.5、1∶2.5，结果1∶1 纯化的溶液出现浑浊，1∶1.5和1∶2.5纯化的溶液均澄清。因此综合考虑选择加入明胶量与药材质量比为1∶1.5。

［1］ 宋亚玲，封智兵，程永现，等．木瓜化学成分的研究．西北植物学报，2007，27(4)：831-833．

［2］ 龚复俊，陈 玲，卢笑丛，等．皱皮木瓜果实中有机酸成分的GCMS 分析．植物资源与环境学报，2005，14(4)：55-56，58.

［3］ 李娜，金敬红，姜洪芳，等．宣木瓜总有机酸的纯化及镇痛抗炎作用．中国实验方剂学杂志，2011，17(1)：113-116.

［4］ 胡居杰，汪电雷．木瓜炮制历史沿革．安徽中医学院学报，2000，19(6)：42.

［5］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)．北京：化学工业出版社，2010：402-403.