瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定

2012-09-20鄢海燕邹纯才

皖南医学院学报 2012年5期

鄢海燕，邹纯才

(皖南医学院 1．药剂学与生药学教研室;2．药物分析与药物化学教研室，安徽芜湖 241002)

瓜蒌薤白颗粒是采用瓜蒌、薤白两味药经提取有效成分制成的冲剂。瓜蒌开胸涤痰，可扩张冠状动脉，提高抗缺氧能力，还可抑制血小板聚集;薤白通阳宣痹，有舒张冠状动脉作用［1］。多糖是瓜蒌和薤白中的活性成分之一［2－3］，其含量在一定程度上反映了瓜蒌薤白颗粒的质量，为此采用硫酸-苯酚显色法［4－7］建立瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定方法。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 仪器紫外-可见分光光度计(UV-2550，日本岛津公司)，台式高速冷冻离心机(3K30，德国sigma公司)，电子分析天平(AUW120D，日本岛津公司)。

1．1．2 试药葡萄糖对照品(天津一方科技有限公司，含量＞99%)，瓜蒌薤白颗粒(自制，批号:20111001，20111002，20111003，20111004，20111 005)，6%苯酚溶液，其他所用试剂均为分析纯。

1．2 方法

1．2．1 溶液的制备

1．2．1．1 对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷干燥48 h的葡萄糖对照品10 mg，置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0．1 mg/ml对照品溶液。

1．2．1．2 供试品溶液的制备取瓜蒌薤白颗粒1．5 g，精密称定，乙醚超声2次，每次5 min，滤过，残渣加适量水溶解，离心，取上清液于250 ml容量瓶中，加水至刻度。精密量取4 ml，用Sevag法 (三氯甲烷∶正丁醇=4∶1)脱蛋白，样品液与三氯甲烷-正丁醇的体积比为4∶1，分取上清液，精密量取1．0 ml，加 95% 乙醇 3 ml，冷藏，5 000 r/min 离心 30 min，倾去上清液，沉淀依次加乙醚、无水乙醇洗涤3次，挥干，沉淀加水溶解，定容至100 ml，即得。

1．2．2 检测波长的确定分别吸取一定量的葡萄糖对照品溶液和已处理好的供试品溶液，显色后在305～600 nm波长范围内扫描。结果表明，葡萄糖对照品和供试品的最大吸收峰位一致，均位于490 nm波长处，故本试验选用490 nm作为检测波长。吸收光谱见图1。

1．2．3 标准曲线的制备精密量取葡萄糖对照品溶液 2、4、6、8、10 ml，分别置 10 ml容量瓶中，加水至刻度。精密吸取1 ml，加6%苯酚水溶液1．0 ml，浓硫酸6 ml，静止10 min，旋涡混合5 min，室温放置20 min，照分光光度法，于波长490 nm处测定吸收度，以蒸馏水按同样显色操作为空白，以测得的吸收度与其对应的浓度计算回归方程为:A=7．16C－0．0124，r=0．9998。结果表明:葡萄糖溶液 0．02 ～0．1 mg/ml

图1 瓜蒌薤白颗粒中多糖与葡萄糖显色后的紫外-可见光谱图1．葡萄糖对照品;2．瓜蒌薤白颗粒中多糖Fig 1 UV-VIS of polysaccharides in Gualou-Xiebai granulesand glucose after color development1． Reference substance of glucose; 2． Polysaccharides in Gualou-Xiebai granules

1．2．4 换算因子的测定精密称取60℃干燥至恒重的瓜蒌薤白颗粒多糖29．1mg，置100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。精密吸取2ml置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，取1ml，按测定标准曲线同样的方法测得吸收度A为0．255，从回归方程中求出多糖稀释液中葡萄糖浓度为0．0378mg/ml，按下式计算换算因子f，测得f=1．54。

f=w/(C×D)

式中w为多糖的质量(mg);C为多糖稀释液中葡萄糖浓度(mg/ml);D为多糖的稀释倍数。多糖含量测定:按下试计算多糖含量:

多糖含量(%)=CDf/w×100%式中:C为样品溶液的中葡萄糖含量(mg)，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因子，w为样品的重量(mg)。

1．2．5 测定法精密吸取供试品2．0ml，照标准曲线制备项下自“加6%苯酚水溶液1．0ml起”依法操作，由回归方程计算样品溶液中葡萄糖含量，按多糖含量计算公式计算多糖含量。

1．2．6 精密度试验精密吸取葡萄糖对照品溶液6ml，置10ml容量瓶中，加水至刻度。精密吸取1ml，加 6% 苯酚水溶液 1．0ml，浓硫酸 6ml，静止10min，旋涡混合5min，室温放置20min，照分光光度法，于波长490nm处测定吸收度。平行5份，以1ml蒸馏水按同样显色操作为空白，计算其RSD为1．21%，表明仪器的精密度良好。

1．2．7 稳定性试验取样品(批号:20111001)新制得的供试品溶液 2．0ml，照“1．2．5”项下方法，在0、2、4、8、16、24h 时测定吸光度。计算其 RSD 为1．93%，表明供试品溶液在24h内稳定。

1．2．8 重复性试验取同一批号的样品(批号:20111001)5 份，每份各2．5g，精密称定，按“1．2．1．2”项下方法制备溶液，照“1．2．5”项下方法测定其吸收度。计算RSD为1．90%，表明重复性良好。

1．2．9 回收率试验精密吸取1ml已知含量的供试品溶液 6 份，每 2 份分别精密加入 0．2、0．4、0．6 ml的葡萄糖对照品溶液(0．1mg/ml)，照“1．2．5”项下方法测定其吸收度，并计算含量，结果见表1。

表1 加样回收率测定结果Tab1 Resultsoftheaveragerecovery

2 结果

取5批样品，按“1．2．1．2”项下方法制备供试品溶液，照“1．2．5”项下方法测定吸收度，并计算其多糖含量，结果见表2。

表2 含量测定结果Tab2 Resultsofthecontentdetermination

3 讨论

3．1 在多糖的精制过程中采用了Sevag法脱蛋白，再用乙醚、无水乙醇洗涤以除去脂溶性成分。由于有效去除了多种杂质的干扰，使结果更加准确、可靠。葡萄糖对照品和瓜蒌薤白颗粒中多糖的IR图，如图2。

3．2 影响比色法的因素较多，因此在操作过程中要保证一致性，如混合速度、显色温度和显色时间等，以保证实验数据的准确、可靠。

3．3 本实验曾尝试使用硫酸-蒽酮法［8］对瓜蒌薤白颗粒中的多糖进行含量测定，结果也较为理想，但蒽酮试剂不够稳定，在较多样品的测定或稳定性考察的过程中，需要临用前配制，应用较为不便。为此，本实验最终采用硫酸-苯酚法。在用硫酸-苯酚法进行瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定中，为避免苯酚的氧化，需对其进行蒸馏纯化处理，否则测定结果将会收到影响，在使用的过程中应避光保存。

3．4 本方法所需设备简单、试剂易得，在测定的过程中，避免了单糖、低聚糖及其他还原性物质对多糖含量测定的干扰。加样平均回收率为98．04%，RSD=2．80%，方法较为可靠，可用于瓜蒌薤白颗粒中多糖的含量测定。