消银胶囊水提工艺研究

2012-09-18宁艳洁张贵华符润娥杨双瑞王利杰李彬彬

云南中医中药杂志 2012年11期

宁艳洁，孙虹，张贵华，符润娥，杨双瑞，王利杰，李彬彬，

（1.云南中医学院，云南昆明 650011；2.云南省中医医院，云南昆明 650021）

银屑病（Psoriasis）是一种常见并易复发的慢性炎症性皮肤病[1]。典型皮损为鳞屑性红斑，是一种以角质形成细胞过度增生、炎症细胞浸润和新生血管形成为主要组织病理改变的慢性炎症性皮肤病。我国人群发病率达到0.72%[2]，男性多于女性，北方多于南方，城市高于农村[3]，春冬季易发或加重，夏秋季多缓解。银屑病按临床表现的不同可分为寻常型、脓疱型、红皮病型、关节炎型4种，临床上又以寻常型最多见。消银胶囊是在孙虹教授多年临证治疗寻常型银屑病血热证汤剂的基础上，根据方中各种药物的理化性质等进行的胶囊工艺研究，方便患者长期服用，提高疗效。

1 处方组成

原方由水牛角、生地、丹皮、紫草、白花蛇舌草、重楼、生地榆、生槐花、小红参、红花、丹参组成。

2 仪器与试药

2.1 仪器美国Agilent 1100高效液相色谱系统，包括：真空脱气机，四元梯度泵，自动进样器，二级管阵列检测器，色谱工作站；Diamonsil Cl8柱（5μ250×4.6 mm）；KQ－500DV 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；奥豪斯AR124CN型电子分析天平 Max＝120 g d＝0.1 mg（上海天平仪器技术有限公司）；永光明DZF－3型真空干燥箱（北京永光明医疗仪器厂）。

2.2 试剂甲醇、蒸馏水；甲醇（Fisher）为色谱纯，其余试剂为分析纯。丹酚酸B标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号111562－200605）。

2.3 水提药材生地（批号：25456）、丹皮（批号：25664）、白花蛇舌草（批号：25745）、生地榆（批号：25325）、丹参（批号：25471），均购于昆明市兴佳中药材经营部，并通过云南中医学院药剂实验室鉴定。

3 制剂工艺研究

3.1 水蒸气蒸馏法提取丹皮挥发油取5倍处方量丹皮，即75 g。粉碎，过2号筛（850±29μm 24目），制成粗粉。均分为3组，即每组25 g，进行平行实验。取3只500 mL圆底蒸馏烧瓶，将3组丹皮粗粉放入，分别加入10倍量纯净水，即250 mL，室温浸泡2 h。2 h后对3份样品进行水蒸气蒸馏，观察馏出液体积，至210 min后，馏出液体积均不再增加。将馏出液放冷，冰箱冷藏静置过夜，可见白色针状结晶析出，真空抽滤，滤取结晶，40℃干燥30 min，称重，算得平均提取率为2.2002%。将丹皮提取后剩余药渣均分为15份，取其中3份做药材吸水率实验，取其中9份做水提正交实验，另外3份备用。

3.2 水提工艺正交实验

3.2.1 药材吸水率考察按处方1／3量取干燥的药材：生地10 g，生地榆10 g，白花蛇舌草10 g，丹皮渣5 g（共35 g）、1／2丹参5 g，共称3份。加10倍水浸泡24 h，药材全部透心，滤出全部未被吸收的水，湿药材称重，按公式计算出药材吸水率。

吸水率＝（药材湿重－药材干重）／药材干重×100%。

计算出药材平均吸水率为189.9%，因而考虑在第1次提取时，比第2次多加入2倍水。

3.2.2 正交实验设计按处方1／3量取干燥的药材，生地10 g，生地榆10 g，蛇舌草10 g，丹皮渣10 g，1／2丹参5 g，（共45 g）。共称9份，按表1设计方案进行提取。选择提取溶剂用量（A）、提取时间（B）和提取次数（C）3个因素进行考察，每个因素选择3个水平。根据所制定的因素水平选用L9（34）正交表设计方案进行提取，将各组所得药液合并，定容至100 m L，精密量取20 m L药液置于已干燥至恒重的蒸发皿中，100℃水浴挥干，置于75℃真空干燥箱中4h，置干燥箱中冷却30 min，称重，按以下公式计算干膏得率。

干膏得率＝（W1×V总）／（W总V1）×100%

公式中：W1为干膏重量；W总为药材重量；V1为精密吸取体积；V总为定容体积

根据水提工艺自身的特点和方中药物主要水溶性有效成分，选择干膏量和丹酚酸B作为指标进行综合评价，将干膏量和丹酚酸B含量的权重系数分别设为0.4和0.6筛选最佳提取工艺。

3.2.3 丹酚酸B含量测定

3.2.3.1 对照品溶液的制备精密称定丹酚酸B对照品适量，加入75%甲醇制成每1 mL含丹酚酸B 0.14 mg的溶液，即得。

3.2.3.2 样品溶液的制备于各样品干膏中加入适量甲醇，超声处理至样品完全溶解，滤过，加入甲醇定容至100 mL容量瓶中，样品测定前，用0.45μm微孔滤膜，取续滤液1 mL，加入4 mL甲醇，摇匀，即得。按照样品制备方法制备空白样品一份。

3.2.3.3 丹酚酸B含量测定方法建立色谱柱：Diamonsil Cl8柱（5μm 250×4.6 mm）；流动相：甲酸－1%乙酸（40：60）；流速：1 m L／min；检测波长：261 nm；柱温：30℃；进样量10μL。

在该色谱条件下，所用中药中的其他成分对丹酚酸B的测定几乎无干扰，分离良好，保留时间t＝16.9 min。分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液1、2、5、10、15、20、25μg注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积积分值，以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y＝476.47x－55.52（r＝0.99925），结果表明：丹酚酸 B在0.14～3.5μg范围内具有良好的线性关系。精密度实验，丹酚酸B的RSD为0.995%；（n＝6）；重复性实验，丹酚酸B的RSD为1.45%；（n＝6）；稳定性实验，丹酚酸B的的RSD为1.82%；（n＝7）。按丹酚酸B样品制备方法，分别制备9组样品与空白组样品。分别精密量取10μL进样测定含量。

3.2.4 数据分析结果见表1～3。