丹参素冰片酯乳剂中丹参素冰片酯和冰片的含量测定＊

左正龙，惠民权，申旭霁，孙宇宏，杨凌鉴，郑晓晖

(1.西北大学生命科学学院，陕西 西安 710069; 2.西安力邦制药有限公司，陕西 西安 710075)

丹参素冰片酯[β－(3，4－二羟基苯基)－α－羟基丙酸冰片酯，DBZ]是根据拼合原理及中药方剂理论中君使对药的传统观念，选取中药药对丹参、冰片中活性药效结构单元拼合而成的全新先导化合物[1]。该化合物已获国家发明专利(ZL200610042787.3)[2]，并提交PCT国际专利申请资料(公开号为PCT/CN2007/0011550)。药理研究表明[2]，丹参素冰片酯具有明显的抗脑缺血作用，可作为治疗脑血管疾病的化学新药来进一步研发。该药的脂肪乳乳剂具有药物稳定性好、生物利用度高、血管刺激性小的优点[3]。丹参素冰片酯包括两个光学异构体，丹参素冰片酯乳剂处方为丹参素冰片酯(1%)、大豆油(10%)、油酸(0.06%)、卵磷脂(1.2%)、甘油(2.25%)、乙二胺四乙酸(0.005%)。冰片是丹参素冰片酯分解后的残留物，且具有一定的毒副作用[4]，故其检测作为一项重要指标，对于保证丹参素冰片酯乳剂的稳定性和安全性具有重要意义。

1 仪器和试药

Agilent 1100型系列高效液相色谱系统，包括四元梯度泵，自动进样器，柱温箱和DAD二极管阵列检测器(美国Agilent公司);Agilent 6890 N气相色谱仪(FID检测器，美国Agilent公司);Sartorius BP 221s型电子天平(美国Sartorius公司);KQ5200DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。丹参素冰片酯乳剂样品(西安力邦制药公司，批号为20100901);丹参素冰片酯对照品(西北大学中草药现代化研究及工程中心，色谱检测纯度为98%);天然冰片对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111688－200501);色谱纯甲醇(美国Fisher公司)，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

2.1.1 丹参素冰片酯(高效液相色谱法)

色谱柱:Agilent TC －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－0.2%甲酸水(65∶35);检测波长:280 nm;流速:0.7 mL/min;柱温:25 ℃ ;进样量:20 μL。在拟订色谱条件下，丹参素冰片酯与其他组分色谱峰均可基线分离，且分离度大于1.5;丹参素冰片酯的理论板数为9 342。色谱图见图1。

2.1.2 冰片(气相色谱法)

色谱柱:HP －1 毛细管柱(30.0 m ×0.32 mm ×0.25 μm);检测器:FID;载气:氦气;进样口温度:260℃;检测器温度:260℃;进样量:1 μL;程序升温:80℃保持22 min后，以3.0℃ /min速率升温至130℃，保持16 min。在拟订色谱条件下，冰片与其他组分色谱峰均可基线分离，且分离度大于1.5;冰片的理论板数为110754。色谱图见图2。

2.2 溶液制备

精密称取丹参素冰片酯对照品0.010 3 g，天然冰片对照品0.010 2 g，分别置10 mL容量瓶中，用甲醇超声溶解，稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液(丹参素冰片酯1.03 g/L，冰片1.02 g/L)，4℃储存备用。精密量取样品1 mL，加甲醇定容至10 mL，超声破乳5 min，配置成母液;精密吸取母液0.5 mL，加甲醇定容至10 mL，超声1 min，使溶液澄清，配制成供试品溶液。精密量取空白乳剂1 mL，同法配制成阴性供对照品溶液。

2.3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

图2 气相色谱图

线性关系考察:精密吸取2.2项下对照品溶液适量，将其配成丹参素冰片酯质量浓度为 0.01，0.025，0.05，0.10，0.25，0.50，1.00 g/L，冰片质量浓度为 0.001，0.002，0.005，0.010，0.020，0.050 g/L的系列对照品溶液。按拟订的色谱条件测定，以质量浓度 C对峰面积 A作线性回归，绘制标准曲线，线性回归方程丹参素冰片酯为 A=9 595 C+10.5，R2=0.999(n=7);冰片为 A=6 909 C －0.217，R2=0.999(n=7)。结果表明，丹参素冰片酯和冰片的质量浓度线性范围是0.01～1.00 g/L和0.001～0.050 g/L。

精密度试验:分别取丹参素冰片酯对照品溶液(0.10 g/L)和冰片对照品溶液(0.010 g/L)，按上述色谱条件重复进样6次。结果丹参素冰片酯和冰片峰面积的 RSD分别为0.96%和4.3%(n=6)，表明仪器进样精密度良好。

稳定性试验:取丹参素冰片酯对照品溶液(0.10 g/L)和冰片对照品溶液 (0.010 g/L)，室温放置 0，2，4，7，10，14，24 h，分别按拟订的色谱条件进样测定。结果丹参素冰片酯和冰片峰面积的RSD分别为1.4%和5.4%(n=7)，表明对照品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验:取丹参素冰片酯样品5份，依法制备供试品溶液并进行测定。结果丹参素冰片酯峰面积的 RSD为0.9%(n=5)，冰片始终未检出，表明方法重复性良好。

加样回收试验:取空白乳剂1 mL，分别加入丹参素冰片酯对照品溶液(10 g/L)和冰片对照品溶液(1.00 g/L)1 mL，按供试品溶液制备方法处理，分别在拟订的色谱条件下，连续进样5次，计算回收率。结果见表1。

表1 丹参素冰片酯和冰片加样回收试验结果(n=5)

2.4 样品含量测定

在拟订的色谱条件下，取3批样品，依法制备供试品溶液，连续进样3次，记录其峰面积，根据丹素冰片酯和冰片的标准曲线计算其含量。结果3批样品中丹素冰片酯含量为4.75 g/L，冰片未检出。

3 讨论

本方法简便，精密度、重复性均好，回收率亦符合要求，可作为检测丹素冰片酯乳剂中丹素冰片酯和冰片含量的方法使用。

对高效液相色谱条件的分析中，在245，280，310 nm波长下，分别以不同比例的甲醇－0.2%甲酸水为流动相测定，根据丹素冰片酯峰的保留时间和响应值，最后确定检测波长为280 nm，流动相为甲醇－0.2%甲酸水(65∶35)。

[1]张群正，董 岩，南叶飞，等.β－(3，4－二羟基苯基)－α－羟基丙酸异丙酯/冰片酯合成研究[J].有机化学，2009，29(9):1 466－1 469.

[2]郑晓晖，张群正，王世祥，等.β－(3，4－二羟基苯基)－α－羟基丙酸冰片酯、其合成方法和用途:CN:1868998[P].2006－11－29.

[3]高 洁.丙泊酚脂肪乳的制备工艺及质量控制研究[D].武汉:华中科技大学，2008.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:40.