凋亡抑制因子Livin在膀胱移行细胞癌组织中的表达及意义

郑佐柱 郑雯雯 贺磊磊 郑国有 (吉林大学第一医院二部泌尿外科，吉林 长春 3003)

Livin 是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)的新成员〔1～4〕，是一种重要的抗细胞凋亡因子，有抑制细胞凋亡的作用，在多种肿瘤细胞中呈高表达，与肿瘤的发生有密切的关系。本实验探讨Livin与膀胱癌的关系及Livin与膀胱癌病理分级、临床分期、肿瘤数目、复发的相关性。

1 资料与方法

1.1 资料 选取2005年1月至2006年6月我院泌尿外科52例膀胱移行细胞癌患者。选取标准:无其他系统恶性肿瘤病史，经病理初次确诊且成功随访，术后使用丝裂霉素膀胱内灌注辅助治疗的患者。其中男37例，女15例，平均年龄60.4岁;病理分级采用3级法:G1级11例，G2级23例，G3级18例;临床分期按TNM分期法:TiS～T123例，T2～T429例;单发28例，多发24例;随访5年，复发30例，未复发22例。对照组10例膀胱黏膜组织均采用活检钳取自行前列腺电切术患者的膀胱组织，且病理证实均为正常膀胱黏膜组织。

1.2 免疫组化 一抗为兔抗人多克隆抗体，步骤按试剂盒要求进行，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照。Livin蛋白表达阳性定位于胞质，在高倍镜视野下胞质呈现淡黄色至棕褐色为着色阳性。首先根据细胞着色强度进行评分:无着色得0分，浅黄色得1分，棕黄色得2分，棕褐色得3分;然后随机计数3个高倍镜视野中染色阳性细胞的百分比(取平均数)，并根据阳性百分比进行评分:0不得分，1% ～10%得1分，11% ～40%得2分，41% ～70%得3分，＞70%得4分;免疫反应阳性评判标准:着色强度得分与染色阳性细胞百分比得分乘积≥1分者为免疫反应阳性。

1.3 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件行χ2检验。

2 结果

2.1 正常及膀胱移行细胞癌组织中Livin的表达 10例正常膀胱黏膜组织均无Livin的表达;膀胱移行细胞癌组织中Livin表达阳性者32例(61.5%);两组差异有统计学意义(P＜0.01)。见图1。

2.2 Livin在不同病理分级、临床分期、不同肿瘤数目中的表达情况 G1级组织中Livin阳性表达6例，阳性率54.6%;G2级组织中Livin阳性表达14例，阳性率60.9%，G3级组织中Livin阳性表达12例，阳性率66.7%，Livin在不同病理分级组间的表达差异无统计学意义(P＞0.05)。

TiS～T1期膀胱移行细胞癌组织中Livin阳性表达13例，阳性率56.5%;T2～T4期膀胱移行细胞癌组织中Livin阳性表达19例，阳性率65.5%，Livin在不同临床分期组间表达差异无统计学意义(P＞0.05)。

单发肿瘤患者中Livin阳性表达17例，阳性率60.7%;多发肿瘤患者中Livin阳性表达15例，阳性率62.5%，Livin表达与膀胱移行细胞癌数目无相关性(P＞0.05)。

2.3 Livin表达与肿瘤复发的关系 52例患者中，有30例复发，复发率57.7%;其中Livin阳性表达的32例患者中有24例复发，复发率75.0%，平均复发时间15.3个月;阴性表达的20例患者中有6例复发，复发率30.0%，平均复发时间30.7个月;两组之间差异显著(P＜0.05)，说明Livin与膀胱移行细胞癌复发密切相关。

3 讨论

肿瘤的发生是一个渐进式的涉及多级反应和突变的过程，涉及多种基因和基因以外的变化，尤其与癌基因的激活、抑癌基因失活、细胞凋亡抑制等密切相关。细胞凋亡是多基因严格控制的过程，而凋亡过程的紊乱与许多疾病的发生有直接或间接的关系，如肿瘤、自身免疫性疾病等。Livin是近年来发现的人类IAPs的新成员，存在同基因不同剪切的两个异构体，即Livinα和Livinβ，两种异构体差异微小，仅后者外显子6缺失54 bp，但两者的抗凋亡功能及组织表达谱均不同。Livin作为一种重要的抗细胞凋亡因子，能够抑制细胞的凋亡，在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达，且在多数肿瘤细胞中呈高表达，与肿瘤的发生有密切的关系，如消化系肿瘤、血液系肿瘤、呼吸系统肿瘤、泌尿系肿瘤、黑色素瘤、乳腺癌等。

本研究显示Livin在膀胱移行细胞癌组织中表达的阳性率为61.5%，而在正常组织中无表达，说明Livin与膀胱移行细胞癌的发生发展有密切的关系，可能成为膀胱移行细胞癌早期诊断的一项指标。研究结果还显示Livin的表达与膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期、肿瘤数目及是否多发无相关性，但从结果中可以看出TiS～T1期组织中及G1级组织中Livin表达的阳性率均很高，这也说明Livin作为早期诊断膀胱移行细胞癌的一项指标的可行性，这与近年来国内外大部分研究结果一致〔5～7〕。膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤，而且术后复发率高，凡采用膀胱部分切除术的患者，术后50%以上会在2年内复发〔8〕。本研究表明Livin的表达与膀胱移行细胞癌的复发密切相关。这与Liu等〔5〕、祝兴旺等〔6〕的研究结果基本相同。本研究采用随访的方法，所得的结果更能直接地反映出Livin的表达与膀胱移行细胞癌复发的关系;同时提示Livin可以作为一个预测膀胱移行细胞癌复发的敏感指标。高江原等〔9〕的研究发现检测泌尿系恶性肿瘤患者外周血Livin的表达，其敏感性和特异性较高，可作为检测泌尿系恶性肿瘤转移的靶基因，指导其治疗和预后。易正金等〔10〕的研究发现检测膀胱癌患者尿液脱落细胞Livin的表达，可作为临床筛选膀胱癌的理想指标;提示行尿脱落细胞学与外周血Livin的检测，可以作为膀胱癌早期诊断、转移的辅助手段，这必将会有很大的发展前景。

鉴于Livin与膀胱癌的密切关系，可以将Livin基因作为膀胱癌的分子治疗靶点，这必将会把膀胱癌的治疗带入一个全新时期。

1 Kasof GM，Gomes BC.Livin，a novel inhibitor of apoptosis protein family member〔J〕.J Biol Chem，2001;276(5):3238-46.

2 Lin JH，Deng G，Huang Q，et al.KIAP，a Novel Member of the Inhibitor of Apoptosis Protein Family〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2000;279(3):820-31.

3 Ashhab Y，Alian A，Polliack A，et al.Two splicing variants of a new inhibitor of apoptosis gene with different biological properties and tissue distribution pattern〔J〕.FEBS Lett，2001;495(1):56-60.

4 Vucic D，Stennicke HR，Pisabarro MT，et al.ML-IAP，a novel inhibitor of apoptosis that is preferentially expressed in human melanomas〔J〕.Current Biology，2000;10(21):1359-66.

5 Liu H B，Kong C Z，Zeng Y.Livin may serve as a marker for prognosis of bladder cancer relapse and a target of bladder cancer treatmen〔tJ〕.Urol Oncol，2009;27(3):277-83.

6 祝兴旺，张明明，宋永胜.凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行细胞癌中表达及临床意义〔J〕.中华实用诊断与治疗杂志，2009;23(2):121-3.

7 王晓庆，卢 绩，陈岐辉，等.Livin基因在浅表性膀胱癌中的表达及其与肿瘤复发的关系〔J〕.中华腔镜泌尿外科杂志:电子版，2010;4(2):148-51.

8 Wang L，Zhang Q，Liu B，et al.Challenge and promise:roles for Livin in progression and therapy of cancer〔J〕.Mol Cancer Ther，2008;7(12):3661-9.

9 高江原，杨 林，郑祥奇.Livin mRNA在泌尿系恶性肿瘤外周血中的表达及意义〔J〕.现代医药卫生，2007;23(19):2849-50.

10 易正金，杨 林，吴小候，等.膀胱癌患者尿液脱落细胞Livin检测的临床意义〔J〕.现代泌尿外科杂志，2007;12(3):179-81.