蒙药复方特润舒都乐中抗菌化合物大黄酚的分离鉴定

纳仁高娃，王纯洁，敖日格乐

(1.内蒙古农业大学兽医学院，内蒙古呼和浩特010010；2.内蒙古医学院生理教研室，内蒙古呼和浩特010059)

蒙医药是我国4大民族医药体系之一，是具有完整理论体系和丰富临床实践经验的传统医药学，是我国乃至世界传统医药学的重要组成部分[1]。在蒙药典中记载着丰富的药物，其中包含有多种天然、绿色的抑菌、杀菌的蒙药以及多种含有抗炎免疫等生物活性的药物。蒙药复方特润舒都乐作为传统复方，由大黄、栀子等7味药构成，已经经过长期的临床应用，明确了其具有很强的抑菌、抗菌抗炎的作用。本研究室对其进行了系统的体内外抑菌、抗菌试验研究结果显示其抑菌效果与环丙沙星相当[2]。本研究利用天然药物化学法，对其抗菌有效成分进行分离鉴定，为药物的二次开发奠定基础。

1 材料和方法

1.1 主要实验材料 蒙药复方特润舒都乐由大黄、栀子等7味药构成，均购自内蒙古九合永龄堂药店，符合《内蒙古蒙药材标准》。

1.2 主要试剂和仪器 薄层层析用正相硅胶板、拌样用硅胶(80目～100目)和柱层析用硅胶(200目～300目)均为青岛海洋化工厂生产；凝胶Sephadex LH-20为瑞典Amershan公司产品；显色剂为10%H2SO4乙醇溶液；无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚均为分析纯(天津市化学试剂三厂，批号：20090202)；Bruker AM-400和 Bruker Avance III 600型核磁共振仪为Bruker公司产品；分析和半制备型高效液相色谱仪Agilent 1100HPLC为Agilent公司产品，色谱柱为Zorbax SB-C18(Agilent，4.6mm×250mm，1m L/min；9.4mm×250mm，3m L/min)，检测器为二极管阵列检测器(DAD)。

1.3 药物成分提取与分离 称取蒙药复方，70%乙醇提取后，分别用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯、水溶液萃取，获得不同溶剂萃取浸膏[3]。前期研究表明石油醚部分为体内抗菌最有效部位[2]。每次取石油醚浸膏1g，加10m L(乙酸乙酯：正己烷=1∶9)稀释，经硅胶柱多次洗脱，获得约20mg橙黄色固体夹杂白色粉末，先用0.5m L CDCl3溶解样品，在400M Hz核磁共振波谱仪上做氢谱，表明样品为混合物，在低场区有类似黄酮信号，高场区有脂肪酸和其它杂质信号。需对样品进行分离纯化后再鉴定其结构。采用葡聚糖凝胶色谱对其进行分离，用氯仿-甲醇(1∶1)进行洗脱，收集不同的流份，用硅胶薄层色谱进行检测，合并相同的流份；对合并后的不同流份根据薄层色谱检验情况，采用硅胶柱色谱进一步分离，用石油醚-丙酮(8∶1～6∶1)进行梯度洗脱，薄层色谱检测，最后用反相高效液相色谱进行纯化(流动相为50%乙腈)。

1.4 药物提取成份的结构鉴定 对得到的橙黄色化合物，用400M Hz核磁共振波谱仪(NMR)测定氢谱、碳谱、无畸变极化转移增强谱(DEPT)、异核单量子相关谱(HSQC)，用600M Hz核磁共振波谱仪(NMR)测定异核多键相关谱(HMBC)[3]，确定该物质结构。

2 结果与讨论

2.1 药物成分提取与分离结果 治疗奶牛乳房炎蒙药复方特润舒都乐是沿用至今的传统复方，具有抑菌抗菌抗炎免疫等药理作用[2]。为初步探索蒙药复方的活性部位，对两种蒙药复方做了乙醇回流提取，依次用石油醚、正丁醇、乙酸乙酯等不同有机溶剂进行萃取，得到石油醚层浸膏、乙酸乙酯层浸膏、正丁醇层浸膏和水母液浸膏[3]。前期研究表明抗菌成分主要集中在石油醚层浸膏内[2]。因此，本实验采用硅胶色谱和反相高效色谱及葡聚糖凝胶色谱对其进行分离，不同溶剂进行洗脱，反相高效液相色谱纯化，最终得到一橙黄色化合物(约8mg)。

2.2 药物提取成分的结构鉴定结果 得到的单一成分通过NMR测定氢谱、碳谱、DEPT谱、HSQC谱，HMBC谱[4]，得出该化合物结构(图1)。与文献对照表明，该化合物为大黄酚(Chrysophanol)[5-6]，NMR数据归属见表1。

图1 大黄酚分子结构图Fig.1Molecular structuer of Chrysophanol

表1 大黄酚在CDCl3中核磁共振波普数据排布(J in Hz)Table 1NMR assignments for Chrysophanol in CDCl3(J in Hz)

分离鉴定结果为大黄酚，大黄酚为已知的体内有效抗菌抑菌成分[7]，大黄酚属蒽醌类化合物[8-9]，具有很强的体内外抑菌作用，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、甲型链球菌、肺炎球菌、流感杆菌等多种细菌具有不同程度的抑制作用[10]。因此，确定蒙药复方特润舒都乐抗菌抑菌有效成分为大黄酚。特润舒都乐作为传统复方应用至今，临床效果非常显著，但其服用量大、不够经济等弱点，有待于通过有效成分，获得新的经济、实用的抗菌、抑菌抗炎的新药物。

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