血清硫氧还蛋白－1水平与幽门螺杆菌感染及胃黏膜病理改变的相关性研究

郁海静，丁士刚，张 静，杨雪玲，刘琳娜，王 晔

幽门螺杆菌 (helicobacter pylori，H.pylori)于1982年由澳大利亚学者Warren和Marshall首先从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜中分离出，多种细菌因子以及毒力因子参与了H.pylori相关疾病的发生、发展。硫氧还蛋白 (thioredoxin，TRX)最初发现于大肠杆菌，后相继发现于几乎所有的原核及真核生物，是一种具有氧化还原活性的小分子蛋白质，分子量约为12 kDa，TRX主要分为TRX－1和TRX－2两型，TRX－1主要位于细胞质和细胞核中，而TRX－2仅位于线粒体中［1］。TRX－1具有强大的清除体内活性氧的功能，能保护细胞免受损伤。有动物实验表明，在TRX－1过度表达情况下可减轻H.pylori感染引起的胃黏膜炎症［2］。目前关于H.pylori感染与血清TRX－1水平关系尚不清楚。本研究探讨了血清TRX－1水平与H.pylori感染及胃黏膜病理改变的关系，以进一步明确其临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选择2009年4—7月于北京大学第三医院进行胃镜检查的患者116例，其中男56例，女60例;年龄16～79岁，平均 (44.3±15.1)岁;所有患者除外糖尿病、慢性肺病、慢性肝病、肿瘤以及严重感染等疾病。记录患者的一般情况 (性别、年龄、身高、体质量)。

1.2 血清TRX－1检测 所有患者于胃镜检查前7～10 h空腹抽取静脉血2 ml，注入血清分离管中，室温1 000 g离心15 min，分离血清，置于－20℃冰箱内备检。血清TRX－1水平检测采用酶联免疫吸附实验 (ELISA)法测定。应用商品化的试剂盒 (Human TRX ELISA Kit，Groundwork Biotechnology，Diagnosticate公司)，严格按照试剂盒说明进行操作。

1.3 H.pylori和胃黏膜组织病理学检查 所有患者进行胃镜检查的同时于胃窦和胃体分别钳取至少一块组织进行病理学检查。组织固定于10%甲醛溶液，常规石蜡包埋，5 μm连续切片，行Warthin－Starry(WS)及HE染色，进行组织学评价、分类并判定H.pylori感染状况。胃黏膜组织学评价依据悉尼胃炎分类标准［3］。血清H.pylori抗体采用ELISA法测定，应用商品化的试剂盒 (H.pylori抗体检测试剂盒，北京贝尔生物工程有限公司)，严格按照试剂盒说明进行操作。同一患者胃窦和胃体黏膜中任何一项WS染色阳性，同时血清H.pylori抗体阳性则判定为H.pylori感染。

1.4 统计学方法 应用SPSS 11.5软件进行统计分析。测得的血清TRX－1为非正态分布，两组间比较采用非参数检验(Mann－Whitney u检验)。计数资料采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 所入选的116例患者中H.pylori阳性75例，H.pylori阴性41例;慢性浅表性胃炎 (CSG)91例 (其中H.pylori阳性57例)，慢性萎缩性胃炎 (CAG)25例 (其中H.pylori阳性18例)。

2.2 H.pylori对血清TRX－1水平的影响 H.pylori阳性患者血清TRX－1水平为9.45 ng/ml，高于H.pylori阴性患者的8.99 ng/ml，但差异无统计学意义 (u=1 488.000，P=0.775)。

2.3 CSG和CAG患者血清TRX－1水平比较 CSG患者血清TRX－1水平为8.98 ng/ml，低于 CAG患者的10.40 ng/ml，差异无统计学意义 (u=1 068.000，P=0.641)。

2.4 不同胃黏膜组织病理情况下H.pylori感染与否对血清TRX－1水平的影响 无论是CSG还是CAG患者，H.pylori阳性者与阴性者的血清TRX－1水平间差异均无统计学意义 (P＞0.05，见表1)。

表1 不同胃黏膜组织病理情况下H.pylori感染与否对血清TRX－1水平的影响 (ng/ml)Table 1 The influence of H.pylori Infection or not to serum TRX－1 levels in different gastric mucosa tissue pathological conditions

2.5 不同性别患者血清TRX－1水平比较 男性患者血清TRX－1水平为8.24 ng/ml，低于女性患者的10.27 ng/ml，差异有统计学意义 (u=1 315.000，P=0.044)。

2.6 不同性别患者H.pylori感染与否对血清TRX－1水平的影响 所入选病例中H.pylori阳性患者75例，其中男39例，女36例;H.pylori阴性患者41例，其中男17例，女24例，H.pylori阳性与阴性者的性别构成间差异无统计学意义 (χ2=1.179，P=0.278)。无论是男性还是女性，H.pylori阳性者与阴性者的血清TRX－1水平间差异均无统计学意义 (P＞0.05，见表2)。

表2 不同性别患者H.pylori感染与否对血清TRX－1水平的影响Table 2 The influence of H.pylori infection or not to serum TRX－1 levels in different genders

3 讨论

H.pylori是微需氧革兰阴性杆菌，主要定植在胃黏膜上皮及黏膜层，口腔牙菌斑及结肠中也有。H.pylori感染导致黏膜慢性活动性炎症，中性粒细胞及巨噬细胞等炎性细胞浸润，释放大量活性氧，导致氧化应激，氧化损伤在慢性胃炎、消化性溃疡以及胃癌的发生中有重要的作用［4－5］。TRX－1是具有氧化还原活性的蛋白，具有多种生物学功能，能够直接清除活性氧，参与炎症反应，维持细胞的氧化还原状态，同时具有细胞生长刺激和趋化作用，还能调节转录因子NF－κB，并参与细胞凋亡［6］。血清TRX－1水平是氧化应激和炎性疾病的重要标志［7－9］，在炎症以及氧化应激下表达上调［6］。动物实验表明内源性TRX－1可能是胃黏膜组织抵御氧化应激损伤的重要因子之一［10］。Kimio等［2］进行动物实验显示，内源性过度表达的TRX－1通过抑制中性粒细胞的趋化而降低氧化应激，减低H.pylori感染导致的胃黏膜炎症。H.pylori感染状况是否会影响血清TRX－1水平，二者的关系又如何?本研究结果显示，H.pylori阳性与阴性患者血清TRX－1水平间无差异，提示H.pylori感染状况对血清TRX－1水平可能无影响。考虑可能与H.pylori的致病性、H.pylori与宿主的相互作用以及个体差异、地域差异和环境等多种因素有关。另外Noyan等［11］研究认为在胃癌患者中血清H.pylori抗体阳性组与H.pylori抗体阴性组血清氧化应激参数及抗氧化酶活性无差异，由此推论在胃炎患者中H.pylori感染不同状况下血清氧化应激指标TRX－1水平可能无差异。为进一步明确H.pylori的菌株及致病力，可进行H.pylori基因组学分析，对于H.pylori感染能否引起TRX－1表达水平上调，有待进一步对胃黏膜组织TRX－1水平以及氧化应激标记物进行分析。

本研究进一步分析显示，CSG和CAG两种不同胃黏膜病理学改变对血清TRX－1水平没有影响，在两种不同胃黏膜病理学改变情况下，H.pylori感染与否对血清TRX－1水平也没有影响。Kimio等［2］的研究显示，TRX－1主要存在于壁细胞，CAG时由于胃黏膜萎缩可导致产生TRX－1的细胞减少。karnes等研究［12］表明CAG时由于胃黏膜变薄，胃酸减少而导致H.pylori感染减少或H.pylori被清除，由H.pylori感染引起的氧化应激减轻或消失，从而导致血清TRX－1水平进一步下降，由此推论CSG与CAG患者血清TRX－1的水平应有差异，但本研究结果却恰好相反，可能由于产生TRX－1的胃黏膜细胞的减少不足以导致血清TRX－1水平的下降，另外TRX－1可由多种正常细胞和异常细胞分泌，如成纤维细胞、呼吸道上皮细胞以及活化的T淋巴细胞及B淋巴细胞，血清TRX－1水平可能不能直接反映胃内产生的TRX－1情况，也不能真实反映其与H.pylori感染的关系。尚需要进一步检测胃液中或者胃黏膜组织中TRX－1的表达水平。

本研究发现血清TRX－1水平与性别有关，男性患者血清TRX－1水平与女性患者间有差异。Shoko等［13］研究发现在轻度肾小球滤过率下降的患者中，血清TRX－1水平与男性患者高度相关，多项动物实验［14－15］发现TRX－1的表达水平及抗氧化应激作用与性别有关。由此推测男性、女性患者性激素水平的不同可能对血清TRX－1水平有影响，有待进一步研究。

总之，虽然本研究发现不同H.pylori感染状况及胃黏膜病理状况对血清TRX－1水平没有影响，但是需要进一步分析感染H.pylori的菌株和细菌毒力，评价胃黏膜中TRX－1的表达水平，进一步探讨TRX－1在胃黏膜病变中发挥的作用。

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