被动凝集定量检测法在早期肺炎支原体感染诊断中的应用

2012-09-05刘学政董虹雷选斌

海南医学 2012年2期

关键词：被动支原体阴性

刘学政，董虹，雷选斌

（荆州市第一人民医院检验科，湖北荆州434000）

被动凝集定量检测法在早期肺炎支原体感染诊断中的应用

刘学政，董虹，雷选斌

（荆州市第一人民医院检验科，湖北荆州434000）

目的探讨被动凝集法在早期肺炎支原体感染诊断中的应用。方法采用被动凝集法及ELISA法检测门诊及住院696例疑似肺炎支原体感染患者血清中肺炎支原体抗体并进行对比分析。结果696例疑似肺炎支原体感染患者血清中（1:40）阴性501例，（1:80）阳性141例，（1:160）阳性39例，（≥1:320）阳性15例；阳性共195例，总阳性率为28.0%（195/696）。结论被动凝集法试验结果为(1:160)～（≥1:320）高效价滴度时，可为早期肺炎支原体感染的临床诊断提供有价值依据。

被动凝集法；早期感染；抗肺炎支原体抗体；IgM

肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia，MP)是一种介于病毒和细菌之间，能自行繁殖的最小原核生物，它无细胞壁、不易染色，是引起小儿呼吸道疾病的常见病原体之一，亦可导致心、脑、肾、肝、胃肠道、血液等肺外各种器官损害，因此准确检测MP抗体是诊断和成功治疗支原体肺炎的关键。本研究采用被动凝集法及酶联免疫吸附实验(ELISA)法同时检测MP抗体并进行对比分析，探讨被动凝集法在早期肺炎支原体感染诊断中的应用。

1 材料与方法

1.1 标本来源收集本院2011年1～4月门诊及住院696例有明显呼吸道症状及X线胸片示肺部呈不同程度炎症表现的疑似肺炎支原体感染患者血清。

1.2 试剂本试验采用(日本)富士瑞必欧株式会社生产的赛乐迪亚-麦克Ⅱ试剂盒(被动凝集法)及欧蒙(德国)医学实验诊断股份公司生产的(ELISA法)抗肺炎支原体抗体试剂盒。

1.3 检测方法被动凝集定量检测法：该方法为检测MP总抗体(IgG+IgM+IgA)。具体操作：向反应板(12×8)第1孔加入100µl，第2～12孔各加入25µl血清稀释液，第1孔加入25µl待检血清，后从第1～12孔进行对倍稀释，第2孔加入25µl未致敏因子，第3～12孔各加入25µl致敏因子，第3～12孔最终稀释倍数(1:40)、(1:80)…(1:20 480)，充分混匀后反应板加盖，室温(15℃～30℃)放置3 h，观察读取凝集反应图像。ELISA法严格按照试剂说明书操作，见表1。

1.4 结果判读标准

表1 被动凝集法检测肺炎支原体结果判定标准

1.4.1 被动凝集法阴性：1:40；阳性：≥1:80。

1.4.2 ELISA法以标准品的吸光度值作为未感染人群参考范围的上限(临界值)。检测结果低于临界值的样本为阴性，高于临界值的样本为阳性。

1.5 统计学方法应用SPSS13.0统计软件和t检验对数据进行统计分析。

2 结果

2.1 被动凝集法检测结果696例疑似肺炎支原体感染患者血清中(1:40)阴性501例，(1:80)阳性141例，(1:160)阳性39例，(≥1:320)阳性15例；阳性共195例，总阳性率为28.0%(195/696)。

2.2 ELISA法检测结果696例疑似肺炎支原体感染患者血清中MP-IgM阴性共636例，阳性共60例，总阳性率为8.6%(60/696)。

2.3 被动凝集法和ELISA法检测结果比较被动凝集法501例(1:40)样本中ELISA法IgM阴性499例，阳性2例；141例(1:80)样本中IgM阴性130例、阳性11例；39例(1:160)样本中IgM阴性6例，阳性33例(84.6%)；15例(≥1:320)样本中IgM阴性1例，阳性14例(93.3%)。被动凝集法试验结果为(1:160)～(≥1: 320)时，与ELISA检测MP-IgM阳性总符合率为89.0%，两者呈显著相关(P＜0.01，表2)。

表2 被动凝集法和ELISA法检测结果比较（例）

2.4 药物治疗696份样本中60例ELISA法MP-IgM阳性患者经临床以青霉素、头孢类抗生素治疗无效而改用大环内酯类抗生素时疗效显著。

3 讨论

支原体肺炎又称原发性非典型肺炎，主要靠呼吸道飞沫传播，全年均可发病，以秋冬季为高峰，是学龄儿童及青年常见的一种肺炎[1]。近年来肺炎支原体感染患病率呈日益上升且有局部流行的趋势，临床表现早期仅有咳嗽或伴不规则发热等呼吸道感染症状，随着咳嗽加重，可出现肺部和肺外症状[2]，据统计，支原体肺炎占小儿肺炎的比率在不断上升，由2006年的10.5%～22.4%升至31.8%[3]，在我国社区获得性肺炎(CAP)中占据着重要地位。由于MP无细胞壁，单一青霉素或头孢类抗生素治疗无效，并对一般治疗肺炎、上呼吸道感染的药物有耐药性，临床首选治疗药物为大环内酯类抗生素(阿奇霉素、红霉素、罗红霉素等)[4-5]，所以一定要及时进行相关MP抗体检测，尽快明确诊断，选择相应的抗生素[6-7]。

目前临床上常用MP-IgM抗体检测作为MP感染的早期诊断指标，现大部分临床实验室采用被动凝集法或ELISA法检测MP抗体[8]。ELISA法作为一种比较成熟的实验技术，具有灵敏度高、特异性强等特点，但操作相对复杂，且需特殊仪器设备。被动凝集法作为辅助诊断MP感染的试验，操作简单快捷、结果判定直观且无需特殊仪器设备，但由于该方法为检测MP总抗体，阳性结果时无法判断MP感染者血清中升高的抗体具体类型，无法确定患者属早期感染和(或)既往感染从而影响临床对其进行及时有效的治疗。本研究通过两种方法同时检测696例疑似肺炎支原体感染患者血清中MP抗体，结果显示被动凝集法共检测出阳性195例，总阳性率为28.0%；ELISA共检测出MP-IgM阳性60例，总阳性率为8.6%。其中被动凝集法检测501例阴性样本中ELISA法检测MP-IgM阳性为2例，可能是由于一些患者体者抗体含量极低，导致被动凝集法未能检出[9]。被动凝集法检测141例(1:80)阳性样本中ELISA法检测MP-IgM阳性为11例，提示大多数患者样本中升高的MP抗体类型可能为IgG和(或)IgA，疑为既往感染。而被动凝集法检测39例(1:160)和15例(≥1:320)样本中ELISA法检测MP-IgM阳性分别为33例和14例，阳性符合率分别为84.6%和93.3%，显示被动凝集法试验结果滴度越高，ELISA法MP-IgM阳性检出率越高，且两种检测方法总符合率达89.0%，结果极具相关性(P＜0.01)，提示此两类样本中升高的MP抗体类型主要为IgM，且经临床大环类酯类抗生素治疗，疗效显著[10]，基本上可诊断为肺炎支原体感染早期。故被动凝集法虽检测MP总抗体，但当结果为高效价滴度(1:160)～(≥1:320)时可为临床对肺炎支原体感染的早期诊断提供有力依据，做到早发现、早治疗，以避免肺炎支原体感染的大流行和严重并发症发生。

综上所述，应用被动凝集法检测MP抗体呈高效价滴度时对疑似肺炎支原体感染患者的早期诊断和临床治疗策略具有重要意义。

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