分析前处理对比浊法凝血仪检测结果的影响

卢美红，景蓉蓉

（南通大学附属医院检验科，江苏南通226001）

分析前处理对比浊法凝血仪检测结果的影响

卢美红，景蓉蓉

（南通大学附属医院检验科，江苏南通226001）

目的研究不同分析前处理方法对比浊法凝血仪检测结果的影响。方法将乳糜血20份、健康人血20份，分别用常规法、高速离心法和手工法进行PT、APTT检测；将溶血标本21份、血量不足标本30份和重新补抽来的51份标本同时进行PT、APTT检测。结果健康人标本常规法、高速离心法、手工法检测的PT，APTT结果差异无统计学意义(P＞0.05)。而乳糜血标本常规法检测PT、APTT结果高，甚至检测不出，经高速离心处理后结果与手工法比较差异无统计学意义(P＞0.05)；溶血、血量不足等问题标本的PT、APTT结果与重新采血后标本的结果比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），特别是血量不足时APTT明显延长。结论乳糜血、溶血、血量不足等问题标本大大影响了光电比浊法凝血仪检测结果的准确性，分析前标本的处理是保证其检测结果可靠性的一个重要因素。

血浆凝血酶原时间；活化部分凝血活酶时间；分析前处理；乳糜；溶血；血量不足

凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APPT)是临床实验室常规检查项目，它们反映内、外源性凝血因子是否异常，主要用于手术前检查、血栓病治疗和弥散性血管内凝血(DIC)治疗抗凝剂使用的监测等。手工测定法为经典方法，但操作程序复杂，效率低，不能适应于大医院大批量标本的检测，而且人为主观因素对测定结果影响较大。我科使用的Sysmex CA7000血液凝固分析仪具有测定成本低速度快、对正常外观标本的测定准确度和精密度高等优点，得到广泛使用，是解决大批量标本测定的关键手段。其原理为：光电比浊法即当一束光(光源卤素灯)通过样品杯，会发生透射和散射，样品杯中的血浆在凝固过程中，纤维蛋白原逐渐转变成纤维蛋白，其理学性状发生改变，导致透射光和散射光强度发生改变，由此判断凝固终点[1]。由于许多凝血因子是具有生物活性的蛋白质，极易失活，而凝血过程又是一个相当复杂的生理病理过程，其测定影响因素比较多，其中标本的影响是一个重要的因素，如乳糜血、溶血、血量不足、标本未及时送检等问题大大影响了结果的准确性。在临床检测中经常会遇到此类标本，严重干扰了临床医师及时准确判断，从而延误最佳治疗时间，可见样本分析前处理是保证检测可靠性的一个重要方面。本人对几种影响因素和处理方法分别进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂Sysmex CA7000血液凝固分析仪、TGL-16C台式普通高速离心机，测定条件室温20℃～25℃，湿度＜80%，测定时严格进行质量控制。试剂、质控品均为Sysmex公司提供。

1.2 标本来源健康血浆对照组：随机收集我院2010-2011年住院患者非乳糜标本20份，排除心脏、肾脏、肝脏疾病和口服抗凝药物。乳糜血血浆组：20份乳糜血来自我院2010-2011年住院患者，排除心脏、肾脏、肝脏疾病和口服抗凝药物。按外观将标本分为轻中度乳糜、重度乳糜，分别为15份、5份。溶血、血量不足组：收集我院2010年12月至2011年6月住院送检的严重溶血标本21份，血量不足标本30份。

1.3 方法

1.3.1 乳糜血处理的方法将健康血浆对照组、乳糜血血浆组标本分别用常规法、手工法和高速离心法进行检测。常规法：将健康人血浆组、乳糜血浆组，常规离心3 000 r/min，15 min后立即在Sysmex CA7000血液凝固分析仪上检测PT、APTT。手工法：常规法剩余的血浆用手工法测定血浆中的PT、APTT重复测定2～3次，取其平均值。高速离心法：所剩余的血浆用高速离心专用塑料管密封后以15 000 r/min离心10 min后，用注射器抽取下层清亮血浆(即去乳糜血浆)在CA7000上检测PT、APTT值。

1.3.2 溶血、血量不足的处理方法采用Sysmex CA7000血液凝固分析仪检测PT、APTT值，对51份标本进行再次抽血复检，将先后两次结果进行比较。

1.4 统计学处理所有实验数据均采用SPSS16.0软件，采用配对t检验分析。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 乳糜血的处理结果健康对照血浆组：20份标本经常规离心法、高速离心法、手工法检测的PT、APTT结果差异无统计学意义(P＞0.05)。乳糜血血浆组：15例轻、中度乳糜血标本常规法与高速离心及手工法差异有统计学意义(P＜0.01)，常规法结果偏高，而高速离心和手工法差异无统计学意义(P＞0.05)，5例高度乳糜标本常规离心均未能检测出PT、APTT结果，而对高速离心后去脂肪乳糜血浆检测结果与手工法测定结果比较，PT、APTT差异无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1 对照组与乳糜组三种方法的检测结果

表1 对照组与乳糜组三种方法的检测结果

注：“-”表示未测出结果。

2.2 溶血、血量不足的处理结果溶血、血量不足等问题标本的PT、APTT结果与二次采血后标本的结果比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)，特别是血量不足时APTT明显延长。血液量略低于凝血抗凝管刻度线便有APTT延长的现象，往往易被检测者忽略，从而误导临床诊断用药，见表2、表3。

表2 问题标本与重新采血标本的PT结果

表2 问题标本与重新采血标本的PT结果

表3 问题标本与重新采血标本的APPT结果

表3 问题标本与重新采血标本的APPT结果

3 讨论

脂血标本通常由于餐后以及某些病理状态下血浆中含有大量的乳糜微粒时产生，因乳糜微粒颗粒较大能使光发生散射，而使血浆外观混浊。一般情况下应空腹抽血，从而消除高脂对凝血结果的影响。但有的患者采血前食用高脂饮食，出现了乳糜血。另外由于脂肪乳注射液是临床上常用的营养剂，对于那些对能量需求较高的消耗性疾病患者，如大面积烧伤、外伤急救、外科大手术前后及长期禁食患者，提供足够的热量和营养，对于改善患者的氮平衡具有极其重要的意义[2]。但是，患者输注脂肪乳后抽取的血样，会使血液标本呈乳糜样外观。虽然有些学者提出采用最合适的脂肪乳输注时间，可避免这些影响，但却只对常规患者有效。而对于术后或急诊、抢救患者的凝血功能检测，依然困扰临床及实验室。为克服乳糜血对检测结果的影响，本人查阅文件发现已有资料显示文献报道去除高脂肪乳糜的方法有标本放置法[1]、高速离心法[3]、过滤法等。放置法需要很长时间，不能及时检测，延误诊治时机，另有报道凝血标本存放一段时间后对结果有影响，特别是对APTT影响明显[4]。过滤法、低温高速离心法对设备要求较高，一般实验室不易装备。常温高速离心机价格低，实验室容易装备。

溶血往往是由于针头过细、抽入气泡、止血带压迫时间过长以及运输过程不当等原因造成的。溶血会使红细胞内成分释放，激活凝血机制，对凝血结果有影响。血量不足是我室临检组标本拒收的主要原因，正常情况下血液与抗凝剂(109mmol/L的枸橼酸钠)比例应按9：1配比，否则会改变血浆中的钙离子浓度而影响测定结果[5]。抽取抗凝血时一定要按比例采血，采集血后应立即轻轻混匀，避免血液凝固[6]。严重溶血、血量不足等不合格的标本应拒收，通知临床重新采集后再做检测。因此检验凝血功能最好空腹抽血，如果遇到高脂饮食、术后、急诊、抢救患者等生理、病理情况下的乳糜血标本，特别是高度乳糜血标本时，手工法等以光电比浊法为原理的血凝仪检测结果不可靠，建议使用简单可行的高速离心。

[1]丛玉隆,王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社,1997：196-198.

[2]任峰,孟庆忠.脂肪乳剂的临床应用[J].中国现代药物应用, 2009,3(8)：132.

[3]陈建芸,石凌波,任峰.高速离心法消除高血脂对凝血酶原时间测定的影响[J].检验医学,2005,20(4)：401-402.

[4]冯荔,冯忠盈,曹文俊.标本存放时间对凝血指标影响的实验评估[J].检验医学,2010,25(1)：8-9.

[5]蔡焕荣,潘秀贤.PT、APTT实验影响因素的探讨[J].海南医学, 2011,2(6)：105-106.

[6]叶秀枝.提高静脉抽血护理质量体会[J].中国误诊学杂志,2008,2 (5)：1094.

Effect of pre-processing on the results of blood coagulation analyzer through turbidimetric method.

LU Mei-hong,JING Rong-rong.Department of Clinical Laboratory,the Affiliated Hospital of Nantong University,Nantong 226001,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the influence on test results with different pre-processing by applying turbidimetric method on blood coagulation analyzer.MethodsWe detected PT and APTT from 20 chylous blood specimens and 20 blood specimens of healthy individuals by routine method,high speed centrifugation and manual method,respectively.PT and APTT were also measured from 21 hemolytic specimens,30 insufficient blood volume specimens and 51 re-sampling specimens at the same time.ResultsNo statistically significant differences was found between PT and APTT results of the healthy individuals by routine method,high speed centrifugation and manual method(P＞0.05).There was also no statistically significant difference between PT and APTT results of chylous blood specimens by high speed centrifugation and manual method(P＞0.05),but the results of PT and APTT by routine method were higher.Differences in hemolytic specimens and insufficient blood volume specimens before and after re-sampling was statistically significant,and the results of APTT were significantly higher in insufficient blood volume specimens(P＜0.05).ConclusionProblems such as chylemia,haemolysis and insufficient blood significantly influenced the accuracy of blood coagulation analyzer based on turbidimetric method.Pre-processing is an important element which ensures the reliability of test.

Prothrombin time(PT);Activated partial thromboplastin time(APTT);Pre-processing;Chylous; Hemolysis;Insufficient blood

R446.11

B

1003—6350（2012）18—080—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.038

2012-03-01)

卢美红（1975—），女，江苏省南通市人，主管技师，学士。