监测血浆EBV-DNA含量在鼻咽癌诊疗中的意义

柳文菊，杜昆

（长江大学附属第一人民医院检验科，湖北荆州434000）

监测血浆EBV-DNA含量在鼻咽癌诊疗中的意义

柳文菊，杜昆

（长江大学附属第一人民医院检验科，湖北荆州434000）

目的探讨鼻咽癌患者放化疗过程中血浆EBV-DNA含量在临床诊疗中的意义。方法采用荧光定量PCR法检测50例NPC患者在不同的诊疗阶段血浆EBV-DNA的含量，同时设50例健康体检者为阴性对照组。结果50例NPC组中EBV-DNA检测阳性率为92.0%（46/50），健康对照组阳性率为8.0%（4/50）；46例EBV-DNA阳性的患者中，26例患者从第一周治疗开始，DNA水平就开始明显下降，至治疗结束前已检测不到DNA的复制；14例患者开始几周DNA水平变化并不明显，至治疗结束前，基本检测不到DNA的复制；6例患者在治疗过程中均可检测到较高水平的EBV-DNA。结论采用荧光定量PCR方法检测NPC患者血浆中游离的EBV-DNA是一种敏感可靠的方法，对于NPC的早期诊断及预后具有非常重要的临床意义。

荧光定量PCR；鼻咽癌；EBV-DNA；血浆

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是一种普遍存在的疱疹病毒群，感染后能累及机体全身各个器官系统[1-2]，其中以侵犯造血系统和淋巴系统最为常见，可引起各种恶性肿瘤，从而严重危害人类生命健康。鼻咽癌（Nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我国南方常见的一种恶性肿瘤，其具体的发病机制仍然不清楚，但目前认为NPC的发生与EBV感染有关[3-4]。自Mutirangura等[5]报道NPC患者血浆中可检测到EBV-DNA以来，许多学者都进行了这方面的研究，并证实NPC患者血浆EBV-DNA量的含量能够反映体内肿瘤负荷情况[6-7]。我们采用TaqMan探针荧光定量PCR技术对50例已确诊为鼻咽癌的患者血浆EBV-DNA进行定量检测，探讨鼻咽癌患者放化疗过程中血浆EBV-DNA含量在临床诊疗中的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料2009年1月至2011年2月间入住我院肿瘤分院经初诊确诊为鼻咽癌的患者50例。年龄27～65岁，平均47.6岁。其中男性38例，女性12例。所有的患者均接受同期放化疗。放射治疗按照临床检查和CT/MRI示肿瘤范围设野，并按临床常规进行。化疗与放疗同时进行，采用草酸铂70 mg/m2每周一次连续6周。放化疗期间，每周用间接鼻咽镜检查鼻咽肿物1～2次，同时密切注意颈淋巴结肿胀的消退情况。治疗结束后2～3个月复查鼻咽CT或MRI、胸片、腹部B超等以评价疗效。疗效的评价依据WHO实体瘤评价标准进行。另采集50例健康体检者血样（由体检中心负责抽取）作为阴性对照组。两组之间性别、年龄差异无统计学意义。

1.2 血浆标本的采取每位受检者每次抽取血外周血3 ml，加入到EDTA抗凝管中，2 000 rpm离心5 min，吸取200 ul血浆于-20℃冻存备用。

1.3 EBV-DNA的提取及扩增将冻存的血浆复融后放置至室温，严格按照中山大学达安基因股份有限公司提供的EBV荧光定量PCR检测试剂盒说明书进行DNA的提取。吸取抽提的DNA入PCR的反应管中，在德国产Agilent Technologies Stratagene Mx3000P全自动扩增仪上扩增。扩增程序如下：93℃3 min，再93℃45 s、55℃2 min，共40个循环。反应结束后结果由计算机进行数据处理，以IU/ml报告，小于检测下限5.0×102IU/ml结果判定为阴性。

1.4 统计学处理所有实验数据应用SPSS13.0统计软件进行统计分析。符合正态分布的计量资料采用方差分析，非正态分布的计量资料采用秩和检验。两组间EBV-DNA阳性率比较采用卡方检验，P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 鼻咽癌组和健康对照组血浆EBV-DNA阳性检出率结果如表1所示，50例鼻咽癌患者中共检出46例EBV-DNA阳性患者，而50例健康对照组中检出4例EBV-DNA阳性，两组统计学比较差异有统计学意义（P＜0.01）。

2.2 放化疗后不同时期血浆EBV-DNA水平46例EBV-DNA阳性鼻咽癌患者在治疗后不同时期检测血浆EBV-DNA含量，发现40例在治疗后EBV-DNA含量逐渐减少，至第6周完全检测不到EBV-DNA；另外6例在治疗过程中均能检测到EBV-DNA。

表2 46例EBV-DNA阳性患者治疗期间血浆EBV-DNA水平(IU/ml)

2.3 血浆EBV-DNA动态变化与疗效的关系治疗前，92%（46/50）的患者血浆中可检测到较高水平的EBV-DNA，8%（4/50）患者未检测出EBV-DNA。46例EBV-DNA阳性的患者中，26例患者从第一周治疗开始，DNA水平就开始呈明显下降，到第4周至第5周，就基本已经检测不到DNA的复制。14例患者开始几周DNA水平变化并不明显，但到治疗结束前1～2周，也基本检测不到DNA的复制。对这40例患者在治疗结束后进行一系列相关检查，确定为完全缓解，而另外6例在治疗过程中均能检测到EBV-DNA，在治疗结束后进行相关检查，发现这6例患者均有肿瘤残留，其中2例为颅内残留，4例示淋巴结残留。

3 讨论

长期以来，检测EB病毒相关抗原抗体如壳抗原IgA抗体(VCA-IgA)、早期抗原IgA抗体(EA-IgA)等是筛查、辅助诊断和监测鼻咽癌病情变化的主要方法[8]。有研究表明VCA-IgA滴度水平在放疗中不随肿瘤的消退而下降，提示抗体检测不能精确反映体内肿瘤负荷。由于VCA-IgA半衰期较长，即使体内EB病毒被清除，在较长一段时间内血液中仍可检出该抗体，故VCA-IgA不能准确反映鼻咽癌病情变化的情况[9]。

由于鼻咽癌患者血浆或血清中可检测出EBV-DNA，本研究通过用荧光定量PCR技术检测50例鼻咽癌患者血浆中EBV-DNA水平，46例（92%）阳性[中位浓度为（5.23±5）IU/ml]；而在50例对照组中，仅4例（8%）阳性（中位浓度为0 IU/ml），两者比较差异有统计学意义（P＜0.01）。这一结果与Lo等[10]的研究结果一致，表明检测血浆EBV-DNA是一种敏感有效的初治筛选NPC的方法。

目前，监测NPC患者肿瘤转移、复发的方法主要依靠常规体检、间接鼻咽纤维镜和影像学检查，但这些方法的敏感性和特异性较差、检测过程繁琐、费用昂贵、发现不及时以及不能明确区分肿瘤病灶为原发病灶还是转移病灶等问题。而PCR定量检测NPC患者在治疗不同阶段的血浆EBV-DNA含量，能够给临床提供快速和准确的疗效观察。本研究中，46例EBV-DNA阳性患者中，40例患者经治疗后，血浆中检测不到EBV-DNA，同时其症状也得到缓解，肿瘤消退；而另外6例患者，在治疗过程中均能检测到EBV-DNA，其症状缓解不明显，有肿瘤残留。这表明NPC患者治疗后EBV-DNA的含量能很好的反映患者病情变化，这对NPC患者的疗效及预后判断具有非常重要的临床意义。

综上所述，采用荧光定量PCR方法检测血浆中游离的EBV-DNA，对于NPC的早期诊断、疗效及预后判断具有重要的临床意义，尤其是对高危地区和高危人群的鼻咽癌筛查和鼻咽癌患者的预后有重要的实用价值。

[1]OkanM.Overview and problematic standpoints of severe chronic activeepslein-barr virlis infection syndrome[J].OncolHematol, 2002,44(4)：273-282.

[2]易世红,苏盈盈,张国梁.EB病毒检测及EB病毒感染相关疾病的分析[J].中国卫生检验杂志,2009,19(1)：26-27.

[3]Feng P,Chan SH,Soo MY,et al.Antibody response to Epstein-Barr virus Rta protein in patients with nasopharyngeal carcinoma：a new serologic parameter for diagnosis[J].Cancer,2001,92：1872-1880.

[4]林钦塘.EB病毒感染与鼻咽癌发病机制的关系[J].癌症,2009,8：791-804.

[5]Mutirangura A,Pornthanakasem W,Theamboonlers A,et al.Epstein-Barr viralDNA in serum of patientswith naso-pharyngeal carcinoma[J].Clin Cancer Res,1998,4(3)：665.

[6]李多杰,彭开桂,江浩.血浆EBV DNA定量分析在监测鼻咽癌患者复发和转移中的价值[J].实用肿瘤杂志,2008,23(1)：12-15.

[7]叶新芊,李金高,龚晓昌,等.鼻咽癌血浆EB病毒DNA水平与肿瘤负荷的关系[J].实用癌症杂志,2007,22(2)：147-149.

[8]唐国全,周向阳,阳春茂.EB病毒IgA滴度在鼻咽癌诊断的敏感性和特异性[J].广西医学,2008,30(6)：831-832.

[9]罗耀凌,欧国萍,池沛冬,等.联合检测EB病毒相关抗体和抗原对诊断鼻咽癌的价值[J].癌症,2009,28(1)：96-99.

[10]Lo YM,Chan LY,Lo KW,et al.Quantitative analysis of cell-free Epstein-Barr virus DNA in plasma of patients with nasopharyngeal carcinoma[J].Cancer Res,1999,59(6)：1188-1191.

Clinical significance of plasma Epstein-Bar virus DNA concentration in the diagnosis and treatment of nasopharyngeal carcinoma.

LIU Wen-ju,DU Kun.Department of Clinical Laboratory,the First Affiliated Hospital of Yangtze University,Jingzhou 434000,HuBei,CHINA

ObjectiveTo investigate the clinical significance of plasma Epstein-Bar virus DNA (EBV-DNA)concentration in the diagnosis and treatment of nasopharyngeal carcinoma(NPC).MethodsFluorescence quantitative PCR was used to determine the content of EBV-DNA in blood serum in 56 patients with NPC(the study group)and 50 healthy individuals(the control group).ResultsThe positive rate of EBV-DNA was 92%(46/ 50)in the study group and 8%(4/50)in the control group.Among the 46 patients detected positive in the study group, 26 patients were detected with significantly decreased EBV-DNA at the first week of treatment,and with no EBV-DNA at the end of the treatment.Fourteen patients were detected with high levels of EBV-DNA at the initial weeks of treatment,but with no EBV-DNA at the end of the treatment.Six patients were found to maintain a high levels of EBV-DNA throughout the treatment.ConclusionDetermination of EBV-DNA by fluorescence qualitative PCR in blood serum is reliable and sensitive,which has high clinical value in the diagnosis and treatment of NPC.

Fluorescence qualitative PCR;Nasopharyngeal carcinoma;EBV-DNA;Plasma

R739.63

A

1003—6350（2012）18—007—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2012.18.003

2012-03-19）

柳文菊（1971—），女，湖北省荆州市人，主管技师，学士。