HPLC法测定妇炎舒片中丹酚酸B的含量

王粉安 郑海波 赵东玲

[摘要] 目的 建立妇炎舒片中丹酚酸B的含量测定方法。 方法 以丹酚酸B为测定指标，HPLC测定妇炎舒片中丹酚酸B的含量。色谱条件：色谱柱为KromasilC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；检测波长：286 nm；流速：1.0 mL/min。 结果 丹酚酸B对照品在0.508～3.176 μg范围内线性关系良好，r ＝ 0.999 9；平均回收率为97.94%，RSD = 1.14（n = 6）。 结论 本定量方法简便、准确、专属性强，能有效控制妇炎片的质量。

[关键词] 妇炎舒片；高效液相色谱法；丹酚酸B；含量测定

[中图分类号] R286.0[文献标识码] B[文章编号] 1674-4721（2012）07（c）-0079-02

Determination of salvianolic acid B in Fuyanshu Tablets by HPLC

WANG Fen'an1 ZHENG Haibo2 ZHAO Dongling3

1.Ruixin Pharmaceuticals Co.Ltd of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China; 2.Medical college of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China; 3. Hospital of Xi'an Jiaotong University in Shannxi Province, Xi'an 710061, China

[Abstract] Objective To determine of salvianolic acid B in Fuyanshu tablets by HPLC. Methods With salvianolic acid B as the Determination index, HPLC was used to determine the contents of salvianolic acid B in Fuyanshu tablets. The analysis was performed on a Kromasil C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm); The mobile phase was methanol-acetonitrile- formic acid-water (30∶10∶1∶59) at a flow rate of 1.0 mL/min; The detective wavelength was 286 nm. Results The standard of curves of salvianolic acid B showed a good linearity from 0.508 μg to 3.176 μg, (r = 0.999 9); average recovery was 97.94%，RSD = 1.14(n = 6). Conclusion The quantitative method is simple and convenient, accuracy, and strong specificity which can effective control the quality of Fuyanshu Tablets.

[Key words] Fuyanshu tablets; HPLC；Salvianolic acid B; Content determination

婦炎舒胶囊为《国家药品监督管理局国家药品标准中成药地标升国标外科妇科分册》中收载的品种，具有清热凉血，活血止痛的功效[1]。妇炎舒片为改剂型品种，处方由忍冬藤、大血藤、丹参、芍药、甘草等十一味药味组成，文献报道及该制剂质量标准中都采用HPLC法测定芍药中芍药苷的含量[2-3]。处方中丹参具有祛瘀止痛、凉血消痈、清心除烦的功效[4]，本文笔者结合文献采用HPLC法增加丹参中丹酚酸B的含量测定方法[5-6]，有利于制剂中多组分的质量控制，报道如下：

1 仪器与试剂

1.1 仪器

岛津LC-2010CHT 型高效液相色谱仪，LCsolution工作站。

1.2 试剂

丹酚酸B对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：111562-200605）；妇炎舒片（自制，批号：01、02、03）。

2方法与结果

2.1 色谱条件

Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）；流速：1.0 mL/min；检测波长286 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。在此条件下，色谱图显示供试品中丹酚酸B与其他杂质峰基线分离。见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取对照品丹酚酸B 15.88 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇制成每1毫升含0.635 2 mg的溶液，作为贮备液。分别精密吸取2、3、5、3、5mL贮备液分别置于25、25、25、10、10 mL量瓶中，加入70%甲醇稀释至刻度，分别得到每1毫升含丹酚酸B 0.050 8、0.076 2、0.127 0、0.190 6、0.317 6 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，研细，取约0.5 g，精密称定，精密加入70%甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，称定重量，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按供试品处方工艺制备不含丹参的阴性样品1 g，按2.2.2项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 线性试验

精密吸取上述对照品溶液各10 μL，按2.1项下色谱条件测定峰面积，以进样量（C，μg）对峰面积（A）作标准曲线，计算丹酚酸B的回归方程为A=6.605 6×105C-8 230.7（r = 0.999 8），结果表明在0.508～3.176 μg范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验

精密吸取供试品溶液10 μL，重复进样5次，测定色谱峰面积，丹酚酸B RSD = 0.57。

2.5 重复性试验

取同一批号供试品（批号：01），平行称取6份，按2.2.2项下方法制备，精密吸取10 μL，按2.1项下色谱条件测定，样品平均含量9.91 mg/g，RSD = 1.15。

2.6 稳定性试验

取同一批供试品溶液，精密吸取10 μL，按2.1项下色谱条件分别在0、2、4、8、24、48 h测定，丹酚酸B色谱峰面积RSD = 1.09，表明稳定性良好。

2.7 加样回收率试验

取2.3项下已知含量的样品（批号：01，样品平均含量9.91 mg/g）约0.25 g，平行精密称取6份，分别精密加入丹酚酸B对照品（0.127 0 mg/mL）溶液2 mL，挥干溶剂后，按2.2.2项下同法制备，测定含量，平均回收率为97.94%，RSD = 1.14。见表1。

2.8 样品测定

按2.1项下色谱条件，精密吸取供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，结果见表2。

3 讨论

（1）由于处方中丹参经过乙醇提取，笔者结合文献考察了丹参饮片中丹酚酸B在提取工艺中的含量变化，再结合芍药苷的含量变化，多指标优化工艺参数[7-8]，有利于在批量生产中保持药品质量的稳定。（2）本试验对样品的处理方法进行了考察，比较了样品回流提取、超声提取的方法，证明两种方法测定结果接近，而超声处理方法相对简便，故选用超声提取的方式。但由于丹酚酸B含有多个酚羟基和酯键，对光和温度都比较敏感，非常容易发生氧化和水解反应。因此，在制备和放置样品的过程中应注意保持低温和避光，且超声时间不宜过长，以免因溶液过热而发生降解。经试验比较，超声10 min即可。（3）关于检测波长的选择，笔者用丹酚酸B对照品在200～400 nm进行紫外扫描，发现其在286 nm波长处有最大吸收，响应值大、灵敏度高、便于检测，故选择286 nm为检测波长。（4）关于流动相的选择，笔者经查阅文献，对不同的流动相如：甲醇-乙腈-冰醋酸-水（15∶15∶5∶65）、乙腈-水（10∶90）、乙腈-0.1%磷酸溶液（13∶87）、甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）以及本文采用的甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）等进行了比较，因为丹酚酸B为酸性化合物，在流动相中加入适量的酸可以改善峰形，避免发生拖尾现象，故本试验采用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相，可以达到很好的分离效果，且阴性试验无干扰。（5）笔者增加制剂中丹酚酸B的含量测定方法，重复性好，能整体控制药品的质量，保证療效。

[参考文献]

[1]国家药品监督管理局. 国家药品监督管理局国家药品标准地标升国标外科妇科分册[S]. 2002：302-305.

[2]齐晓飞，张伏，张璐，等. HPLC法测定妇炎舒丸中芍药苷的含量[J]. 实用药物与临床，2011，14（1）：43-44.

[3]刘立，杨伍. 妇炎舒片的质量标准研究[J]. 现代医药卫生，2011，27（2）：202-203.

[4]国家药典委员会编. 中华人民共和国药典[S]. 一部. 北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

[5]邓松岳，王伟丽，张颖，等. HPLC法测定丹参益坤口服液中丹酚酸B的含量[J]. 河南中医，2012，32（2）：235.

[6]丁宁，郑云枫，程建明，等. RP-HPLC法分离丹参滴注液中的丹酚酸D及测定4种酚酸类的含量[J]. 中国药房，2012，23（8）：744-746.

[7]黄爱萍. 多指标优化姜黄连炮制工艺分析[J]. 中国当代医药，2011，18（16）：144-145.

[8]刘欣媛，李培锋，关红. 从牛胆汁中提取牛磺胆酸的工艺研究[J]. 中国当代医药，2011，18（15）：11-12.

（收稿日期：2012-04-17本文编辑：魏玉坡）