半胱胺对鸡血液中IgA含量的影响研究

练高建， 杨 倩

(1.南京农业大学 动物医学院，江苏 南京210095;2.南华大学 实验动物学部，湖南 衡阳421001)

半胱胺因能耗竭动物体内的生长抑素(Somatostatin，SS)已成为促进动物生长的饲料添加剂，广泛用于畜牧生产中［1，2］.有研究报道，在添加半胱胺耗竭小肠粘膜中SS 的基础上，通过消化道进行粘膜免疫可增加小肠粘膜中sIgA 及iIEL 阳性细胞数量，有效地增强小肠局部粘膜免疫力［3］. 半胱胺是否可以通过耗竭血浆中的SS，改变血液中IgA 含量，从而影响机体的系统免疫，值得进一步研究.

本研究建立了ELISA 双夹心法检测血清中IgA 水平的变化，以探讨半胱胺对血液中IgA 水平的影响.

1 材料与方法

1.1 动物免疫

84 只1日龄小公鸡(AA 蛋鸡，购自汤泉种鸡场)，随机分为4 组，每组21 只. 自由饮水，摄食.8日龄时首次免疫.第1 组为对照组，每只鸡经口腔注入Hank’s 营养液0.4 mL;第二组为鸡新城疫免疫组(ND 组)，每只鸡经口腔注入新城疫Ⅳ系弱毒苗(JAAS 牧(2000)第003 号，购自江苏农科院畜牧兽医研究所)0.4 mL;第三组为半胱胺组(CS 组)，每只鸡经口腔注入半胱胺稀释液0.4 mL;第四组为半胱胺加新城疫免疫组(CN 组)，每只鸡先经口腔注入半胱胺稀释液0.4 mL，此后再经口腔注入鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗0.4 mL.鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗的剂量为常规剂量的4 倍.首免后14 d，第二、第四组再用鸡新城疫Ⅳ系弱毒苗免疫一次，方法与剂量同首免.

1.2 取材

每组鸡首免后分别于第21、28、35 d 各宰杀5只，收集血液，4 ℃冰箱放置至次日，然后离心分离血清收集，于－20 ℃冰箱保存.

1.3 兔抗鸡IgA 抗体和鼠抗鸡IgA 抗体的制备

按常规方法用纯化的鸡IgA 按常规方法分别免疫兔和豚鼠，琼扩实验效价达1∶32 采血，制备兔抗鸡IgA 抗体和鼠抗鸡IgA 抗体.

1.4 ELISA 双夹心法检测血液中IgA 抗体含量

鼠抗鸡IgA 抗体包被聚乙烯微量反应板(1∶50)，4 ℃冰箱过夜，取出甩去液体，洗涤3 ×3 min.加入1%BSA 封闭，于湿盒中37 ℃2.5h. 洗涤3 ×3 min.分别加入1∶2 待检血清，阳性参考血清和阴性参考血清，于湿盒中37 ℃1 h.洗涤3 ×3 min.加入兔抗鸡IgA 抗体(1∶80)，于湿盒中37 ℃1 h. 洗涤3 ×3 min. 加入酶标记的羊抗兔IgG 抗体(1 ∶1 000)，于湿盒中37 ℃3h.洗涤3 ×3 min 后加底物溶液100 μL，室温下5 ～10 min，每孔加入50 μL 终止剂，酶标仪自动打印结果.

1.5 数据处理

全部数据采用Statistics 和Microsoft Excel 软件处理.

2 结 果

首免后第三周，新城疫组鸡的IgA 水平与对照组比较极显著增加(P ＜0.01);而半胱胺Ⅰ组和半胱胺Ⅱ组与新城疫组相比又呈极显著增加(P ＜0.01);半胱胺Ⅰ组IgA 水平比半胱胺Ⅱ组显著增加(P ＜0.05).首免后第四周，新城疫组的IgA 水平与对照组比较差异不显著;但与半胱胺Ⅰ组比较差异极显著(P ＜0.01)，新城疫组与半胱胺Ⅱ组比较差异显著(P ＜0.05);半胱胺Ⅰ组和半胱胺Ⅱ组与对照组比较，IgA 水平均呈极显著增加(P ＜0.01);首免后第五周，尽管三个试验组之间IgA 水平无明显差异，但均保持比对照组有极显著高的水平(P ＜0.01)(图1).

图1 半胱胺对血液中IgA 水平的影响Fig.1 The influence of cysteamine on the IgA level in blood

3 讨 论

机体中IgA 有两种存在形式:一种是分泌型IgA(SIgA);另一种是血清型IgA(mIgA). 分泌型IgA 为多聚体，是由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等处的粘膜固有层中的浆细胞产生，然后与上皮细胞产生的糖蛋白分泌片连接完整的SIgA，排至粘膜表面发挥其免疫作用.血清型IgA 为IgA 单体，主要是由肠系膜淋巴组织中的浆细胞所分泌的，具有多种抗体活性［4］.

血清中免疫球蛋白含量是反映全身免疫水平或免疫应答水平的重要指标.粘膜局部的SIgA 抗体水平是否与血液中的IgA 水平有关目前尚有争议.有研究证明消化道粘膜免疫能引起血液中IgA 水平的升高，血液中IgA 浓度可以反应肠道分泌物中特异IgA 的水平，血液IgA 和粘膜局部SIgA 存在密切的关系［5］.血液中的IgA 单体除了由肠系膜淋巴组织中的浆细胞分泌外，小肠固有膜中也有少量浆细胞产生IgA 单体，作为血清型IgA 进入到血液中［6］.试验表明，消化道粘膜免疫可使小肠粘膜中sIgA 阳性细胞数量大量增加［3，7］，从而提高了动物的局部粘膜免疫力.从本试验结果可以看出消化道粘膜免疫也可提高血液中IgA 和新城疫血凝抑制抗体的水平(IgG).进一步说明粘膜免疫不仅刺激局部粘膜产生免疫应答，可引起全身体液免疫反应.

SS 是一种脑肠肽，除了可以抑制生长激素的释放外，还具有广泛的免疫抑制作用. 在免疫反应过程中SS 不仅能抑制T 淋巴细胞的活动，还可抑制免疫球蛋白的合成，特别是对IgA 的合成抑制作用可达20 ～50%［8］.半胱胺作为一种SS 耗竭剂可以降低动物血浆中SS 水平.本实验在应用半胱胺的基础上进行了消化道粘膜免疫，结果血清中IgA 含量比只用新城疫弱毒苗的明显升高，而且持续时间较长，表明血清中IgA 受半胱胺的影响较大，这与小肠中IgA 细胞的实验结果一致.因此，半胱胺能够通过减低血浆中SS 的水平增强动物机体的系统免疫力，有希望发展成为通过神经内分泌途径发挥作用的一种粘膜免疫佐剂，在预防传染病中应用.

［1］林 铃，韩正康.生长抑素抑制剂——半胱胺促进大鼠、幼兔生长的研究［J］. 中国应用生理学杂志，1991，7(4):345-347.

［2］王艳玲，韩正康.半胱胺对肉用仔鸡增重和生长抑素、β-内啡肽含量的影响［J］. 南京农业大学学报，1993，16(Z):5-8.

［3］杨 倩，练高建，黄国庆，等.半胱胺对鸡小肠粘膜中分泌型IgA 细胞和上皮内淋巴细胞的影响［J］.南京农业大学学报，2002，25(2):89-92.

［4］石美鑫，熊汝成，李鸿儒，等. 实用外科学(上册)［M］.北京:人民卫生出版社，1992:718.

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［6］成令忠，钟翠平，蔡文琴.现代组织学［M］.上海:上海科学技术文献出版社，2003.

［7］杨 倩，毛卫华，黄国庆，等.巴氏杆菌弱毒苗和鸡新城疫弱毒苗饮水免疫蛋鸡后分泌型免疫球蛋白A 细胞的分布［J］.中国畜禽传染病，1998，20(6):340-342.

［8］Stanisz A M.Differential effects of vasoactive intestinal peptide，substance P，and somatostatin on immunoglobulin synthesis and proliferations by lymphocytes from Peyers patches，mesenteric lymph nodes，and spleen［J］. J Immunol，1986，136:1.