增殖细胞核抗原(PCNA)在甲状腺癌中的表达及意义

郭继文 李德强

增殖细胞核抗原(PCNA)在甲状腺癌中的表达及意义

郭继文 李德强

目的研究PCNA在甲状腺癌组织、甲状腺良性肿瘤组织及癌旁组织中的表达，并与甲状腺癌患者的年龄、临床分期及淋巴结转移与否等进行比较，探讨其与甲状腺癌侵袭/转移的关系。方法应用免疫组化的方法检测25例甲状腺癌组织、17例癌旁组织及26例甲状腺良性肿瘤组织中PCNA的表达情况，并对数据进行分析。结果PCNA蛋白在甲状腺癌组织、癌旁组织及甲状腺良性肿瘤组织中的表达率分别为68.00%、23.53%和19.23%，经统计学分析，PNCA蛋白在甲状腺癌与癌旁组织(P=0.029)、甲状腺癌与甲状腺良性肿瘤组织(P=0.018)之间的表达率差异有显著性差异，而癌旁组织与良性肿瘤组织之间无显著性差异(P＞0.05)。PCNA蛋白在Ⅰ期+Ⅱ期、Ⅲ期+Ⅳ期患者中的表达率分别为42.86%、100%，经统计学分析，两组间的表达率有统计学差异(P=0.021)。PCNA蛋白在伴淋巴结转移及无淋巴结转移的甲状腺癌组织中的表达率分别为83.33%及28.57%，两者有显著性差异(P=0.011)。结论PCNA在甲状腺癌中的表达率明显高于癌旁组织及甲状腺良性肿瘤组织;PCNA的表达与甲状腺癌的临床分期关系密切，临床分期越晚，PCNA的表达率越高。伴淋巴结转移甲状腺癌PCNA表达率高于无淋巴结转移者。

甲状腺癌;增殖细胞核抗原;免疫组化

研究表明许多肿瘤的转移、复发及预后与肿瘤细胞的增殖活性关系密切。增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA)是细胞增殖相关核抗原中比较受关注的一种。本研究对PCNA在甲状腺癌组织、癌旁组织及甲状腺良性肿瘤组织中的表达进行检测，并与甲状腺癌患者年龄、临床分期、淋巴结是否转移进行比较，探讨其与甲状腺癌侵袭转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2010年8月至2011年8月甲状腺手术切除的新鲜标本68例。其中甲状腺癌标本25例，包括甲状腺乳头状癌18例，滤泡癌3例，髓样癌4例。甲状腺良性标本26例，包括桥本甲状腺炎5例，甲状腺腺瘤9例，结节性甲状腺肿12例，另外收集17例甲状腺癌旁组织。

1.2 采集标本 手术中收集癌灶中央组织约0.5cm×0.5cm×0.5cm，在距离癌灶至少1cm处收取癌旁组织，所有标本均装进无菌管内，入液氮罐冷冻后放入-80℃冰箱保存，所有标本术后均行病理检查。

1.3 免疫组化检测 蛋白检测采用链霉素抗生物素蛋白-生物素免疫染色方法。石蜡包埋甲状腺病理标本，4μm连续切片，入60℃烤箱烘干，二甲苯脱蜡，酒精梯度脱水，蒸馏水漂洗，抗原修复，阻断内源性过氧化物酶的活性，血清封闭后加入一抗，工作浓度1:50，37℃孵育1h。PBS冲洗，去除PBS液后每张切片加一滴生物素标记的二抗，室温下孵育10min，滴加DAB工作液，于镜下观察显色，出现阳性染色后再充分水洗，苏木素复染，PBS冲洗返蓝，酒精脱水干燥，树胶封固。对照:从步骤6，同时设立空白对照(不加一抗)其余操作不变，用已知阳性切片作阳性对照。

1.4 结果判断 随机选择10个高倍(×400)视野，根据染色程度和染色细胞百分率进行分析评分。A、表达数量:①表达阳性细胞数是0为0分;②表达阳性细胞数≤25%为1分;③表达阳性细胞数介于26% ～50%为2分;④表达阳性细胞数介于51% ～75%为3分;⑤ 表达阳性细胞数＞75%为4分。B、表达强度:①没有阳性信号，为0分;②阳性信号弱为淡棕色且呈细颗粒状，为1分;③阳性信号中等为棕色且呈粗颗粒状，为2分;④阳性信号强烈为棕褐色且呈小块状，为3分。将两者得分相加，阴性(-)为0分，弱阳性(+)为2～3分，中度阳性(++)为4～5分，强阳性(+++)为6～7分。

1.5 统计学方法 计数资料采用χ2检验及四表格确切概率法，SPSS 13.0软件进行统计学处理。

2 结果

2.1 免疫组织化学染色结果 PCNA蛋白主要在细胞核表达，棕黄色颗粒，部分细胞细胞浆内也可见到PCNA蛋白的表达。

2.2 甲状腺癌组织、癌旁组织及甲状腺良性肿瘤组织中PCNA蛋白的表达 如表1所示PCNA蛋白在甲状腺癌组织、癌旁组织及甲状腺良性肿瘤组织中的表达率分别为68.00%、23.53%和19.23%，经统计学分析，甲状腺癌与癌旁组织(P=0.029)、甲状腺癌与甲状腺良性肿瘤组织(P=0.018)之间的PCNA表达率有显著性差异，而癌旁组织与良性肿瘤组织之间的PCNA表达率无显著性差异(P＞0.05)。

表1 PCNA在甲状腺癌组织、癌旁组织及甲状腺良性肿瘤组织中的表达

2.3 PCNA蛋白与临床病理特征的关系 如表2所示PNCA蛋白在Ⅰ期+Ⅱ期、Ⅲ期+Ⅳ期患者中的表达率分别为42.86%、100%，经统计学分析，两组间的表达率有统计学差异(P=0.021)。PCNA蛋白在伴淋巴结转移甲状腺癌表达率为83.33%，无淋巴结转移的表达率为28.57%，两者有显著性差异(P=0.011)。

表2 PCNA蛋白与临床病理特征的关系

3 讨论

3.1 PCNA的基本结构和功能 细胞增殖相关核抗原的探讨对了解细胞的生长，损伤组织的修复及恶性肿瘤转移等有很重要的意义。PCNA与细胞的增殖周期关系密切，它的分子量约为36KD，是一种酸性非组蛋白核蛋白，性质相对稳定，半衰期为20h左右。人类的PCNA基因定位于第20号染色体上，含有5个内含子和6个外显子，是一个长约7.0KB的断裂基因［1］。有学者认为在正常的细胞周期中，PCNA的表达与DNA复制有关，因此它可以作为一个反映S期的标志物，也有作者认为在细胞周期中主要是与复制有关的PCNA所占的比例变化较大，而PCNA的总体水平变化不太显著。PCNA是细胞周期能够顺利进行及DNA合成的必须蛋白质之一，其作用机制目前不清楚。用PCNA的反义寡聚脱氧棱苷酸处理了Balb/c3T3细胞株之后，其细胞周期和DNA合成抑制，说明PCNA在DNA复制中起重要作用。此外，PCNA在DNA损伤修复过程中也发挥了重要作用［2］。

3.2 PCNA与肿瘤的关系 本组数据显示，PCNA在甲状腺癌组的表达率为68.00%，而在癌旁组织和良性肿瘤中表达率分别为23.53%和19.23%，低于甲状腺癌中的表达。PCNA在不同TNM分期及淋巴结有无转移的标本中有显著性差异，在TNMⅢ+Ⅳ和具有淋巴结转移组中，PCNA的表达明显高于TNMⅠ+Ⅱ和无淋巴结转移组，由此看出在甲状腺癌的临床分期转化和转移中，PCNA起到了很重要的作用。De Marzo等［3］的研究表明，PCNA是细胞核DNA合成必需的核蛋白之一，由于癌前病变和癌组织的DNA合成紊乱，其PCNA表达明显增加。目前关于不同肿瘤组织中PCNA的表达情况，及其与肿瘤的临床分期、病理分级、复发及转移等综合起来分析的研究较多，但研究结果并不一致，多数倾向于PNCA在实体肿瘤中的表达与病理分期关系密切，其随着肿瘤的恶性程度增高而表达增加，并且与肿瘤的转移、浸润等生物学行为密切相关。Kayaselcuk等［4］发现PCNA阳性率与中枢神经系统肿瘤组织类型和分级呈正相关。国外学者对PCNA在前列腺癌、胃癌、肺癌、乳腺癌等组织中的表达进行检测，发现PCNA高表达患者预后不良［5-9］。本组研究表明PCNA与甲状腺癌肿瘤的生长和浸润以及淋巴结转移之间存在着密切相关性，即PCNA表达率高的甲状腺癌细胞恶性程度高，细胞增殖活跃，侵袭性大，转移机会高，预后不良。因此PCNA有可能成为甲状腺癌的辅助诊断及良恶性甲状腺病变鉴别诊断的标志物之一。

［1］Takasaki Y，Kaneda K，Takeuchi K，et al.Analysis of the Structure of Proteasome Proliferating Cell Nuclear Antigen(PCNA)Multiprotein Complex and Its Autoimmune Response in Lupus Patients.Ann NY Acad Sci，2003，987:316-318.

［2］Shivji MKK，Kenny MK，Wood RD.Proliferating cell nuclear antigen(PCNA)is required for DNA excision repair.Cell，1992，69:345-367.

［3］De Marzo AM，Marchi VL，Yang ES，et al.Abnormal regulation of DNA methyl transferase expression during colorectal carcinogensis.Cancer Res，1999，59:3855-3860.

［4］Kayaselcuk F，Zorludemir S，Gumurduhu D，et al.PCNA and Ki-67in central nervous system tumors:correlation with the histological type and grade.J Neuroonco1，2002:57-115.

［5］Jorge O，Parasi AS，Manioudaki HS，et al.Prognostic impact of DNA ploidy pattern，S-phase fraction(SPF)，and proliferating cell nuclear antigen(PCNA)in patients with primary gastric lymphoma.J Surg Oncol，2003，82:247-255.

［6］Cappello F，Palma A，Martorana A，et al.Biological aggressiveness evaluation in prostate carcinomas:immunohistochemical analysis of PCNA and p53in a series of Gleason 6(3+3)adenocarcinomas.Eur J Histochem，2003，47:129-132.

［7］Grossi F，Loprevite M，Chiaramondia M，et al.Prognostic significance of K-ras，p53，bcl-2，PCNA，CD34in radically resected non-small cell lung cancers.Eur J Cancer，2003，39:1242-1250.

［8］Kato T，Kameoka S，Kimura T，et al.C-erbB-2and PCNA as prognostic indicators of long-term survival in breast cancer.Anticancer Res，2002，22:1097-1103.

［9］Dabrowski A，Szumilo J，Brajerski G，et al.Proliferating nuclear antigen(PCNA)as a prognostic factor of squamous cell carcinoma of the oesophagus.Univ Mariae Curie Sklodowska，2001，56:59-67.

Expression of proliferating cell nuclear antigen in thyroid carcinoma and its clinical significance

GUO Ji-wen，LI De-qiang.Department of Surgery，Development Zone Hospital of Guangong，Guangdong 510730，China

ObjectiveTo explore the expression of PCNA in human thyroid carcinoma and the relationship between PCNA expression and clinical pathological features(patient’s age，clinical stage，limph node metastasis，).MethodsThe expression of PCNA in 25cases of human thyroid carcinoma tissues，17cases of paraneoplastic tissue and 26cases of adenoma was detected by immunohistochemistry.ResultsThe expression of PCNA in thyroid carcinoma tissues，adenoma，paraneoplastic tissue were 68.00%、19.23%and 23.53%，statistical difference was found between thyroid carcinoma tissues and paraneoplastic tissue(P=0.029)，between thyroid carcinoma tissues and adenoma tissue(P=0.018).The expression rate of PCNA in stageⅠ+Ⅱand stageⅢ +Ⅳwere 42.86%and 100%，statistical difference was found between them(P=0.021).ConclusionPCNA expression is higher in thyroid carcinoma tissues compared with paraneoplastic tissue and adenoma tissue.The thyroid carcinoma cells proliferation capacity is increase，degree of malignancy is higher and facilitates metastasis occurred which PCNA expressed.

Thyroid carcinoma;Proliferating cell nuclear antigen;Immunohistochemistry

510730广州开发区医院外科(郭继文);湛江中心人民医院外科(李德强)