翼状胬肉组织VEGF、PCNA的表达及相关性研究

张静辉 陈剑

翼状胬肉是常见的眼表疾病之一。具体病因不明，可能与紫外线照射、烟尘等有一定关系［1］。大量研究工作表明，翼状胬肉的发病与细胞增殖密切相关。本研究通过对翼状胬肉组织中VEGF和PCNA的表达情况及VEGF、PCNA两者的相关性研究，探讨翼状胬肉与细胞增殖之间的关系，为翼状胬肉的病因和发病机制的研究提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 35例翼状胬肉组织标本取自某大学附属第一医院眼科住院患者，单眼翼状胬肉，病变部位均位于鼻侧，其中进行期患者16例，静止期患者19例。其中男19例，女16例;年龄为31～74岁，平均年龄(55.80±11.80)岁。10例正常结膜组织做对照组，标本取自角膜移植供体眼球结膜，其中男8例，女2例;年龄为35～65岁，平均年龄(55.30±8.39)岁。两组间性别、年龄经统计学处理无差异。所有病例均无其他角膜、结膜疾病。

1.2 方法 将切除后的翼状胬肉组织标本立即置于10%甲醛固定，分开头部和体部，石蜡包埋，连续切片，切片厚度为4 μm，进行常规HE染色结合病程镜检确定分期后行免疫组化检查。

1.3 统计学方法 在EXCEL中建立数据库，应用SPSS 13.0软件进行统计分析，年龄比较采用t-检验，性别分析采用χ2-检验，两组中VEGF和PCNA的差异应用Mann-Whitney秩和检验，VEGF、PCNA两者关系应用Spearman等级相关分析。

2 结果

翼状胬肉组织VEGF和PCNA的阳性表达率是88.5%，正常结膜组织中VEGF和PCNA的阳性表达率分别20%、40%;VEGF在翼状胬肉和正常结膜中的表达差异存在统计学意义(P＜0.05);PCNA在翼状胬肉和正常结膜中的表达差异存在统计学意义(P＜0.05)。VEGF与PCNA在翼状胬肉组织不同分期的表达有统计学意义(P＜0.05)。VEGF与PCNA在翼状胬肉组织中的表达呈正相关 r=0.599，P=0.000。

3 讨论

3.1 VEGF在翼状胬肉中的表达 近年来，随着多种肿瘤相关基因在胬肉中异常表达的发现，以及胬肉的某些与肿瘤类似的生物学行为，促使研究者更倾向于认为翼状胬肉是眼表的一种异常增生性疾病，由此更加关注对胬肉发病机制的研究［2］。VEGF是目前已知在新生血管形成过程中最重要的刺激因子［3］。本实验研究结果发现，翼状胬肉组织上皮层及纤维组织均可见不同程度的增生。翼状胬肉组织上皮细胞VEGF蛋白较正常结膜增多，阳性表达主要在上皮细胞胞浆及血管内皮，呈棕黄色染色。VEGF在翼状胬肉静止期和进行期组织中的表达有明显差异具有统计学意义。结合本研究实验结果，认为翼状胬肉病变发展中可能由于VEGF活性受各种因素的影响，促进了VEGF的表达，促进内皮细胞的分裂增殖，从而促进血管的增生，使正常结膜组织过度增殖及翼状胬肉纤维血管组织向角膜的侵袭。李海燕等［4］研究报道，翼状胬肉组织上皮中有Ki-67和VEGF的过度表达，提示翼状胬肉组织上皮中存在增殖调控的异常，上皮细胞可能发生了转化，上皮细胞在翼状胬肉的发生发展中可能起着关键的作用。

3.2 PCNA在翼状胬肉中的表达 本实验研究结果显示，PCNA在翼状胬肉组织中的阳性表达主要在细胞核，呈浅黄色或深棕色颗粒，明显高于正常结膜组织;PCNA在翼状胬肉静止期和进行期组织中的表达有明显差异，具有统计学意义，提示翼状胬肉内存在明显的细胞增殖，细胞的高增殖状态是组织增生性疾病的生物学标志，因此可将翼状胬肉视为一种增生性疾病，研究结果提示PCNA可能与翼状胬肉的发生发展有关。Ueda等［5］用免疫组化方法了解 P53、P21、PCNA 在日本人及突尼斯人翼状胬肉中的表达，结果发现PCNA在日本人翼状胬肉阳性率为76.2%，在突尼斯人翼状胬肉中阳性率为63.1%，两者差别不明显。颜美荣等［6］研究发现PCNA在翼状胬肉中的高表达和Caspase-3在翼状胬肉中的低表达，提示细胞凋亡和增殖异常，可能与翼状胬肉的发生、发展有关。

3.3 VEGF和PCNA在翼状胬肉表达的相关性 本研究结果发现，VEGF和PCNA在翼状胬肉组织中都有阳性表达，明显高于正常结膜组织，两者之间的表达呈正相关性。随着研究的进展，VEGF和PCNA的阳性表达成为判断肿瘤诊断、恶性程度、预后的重要指标及辅助指标，VEGF和PCNA在其他疾病中的表达已经有较多的报道。周祥荣等［7］发现胃癌组织中 PCNA、VEGF的阳性表达率分别为85.0%、68.3%，VEGF和PCNA在胃癌中的表达呈正相关。杨宏刚等［8］用免疫组化SP法检测了40例非小细胞肺癌的VEGF阳性表达率为72.5%，PCNA在非小细胞肺癌中的阳性表达率为62.5%，认为VEGF和PCNA可以作为评价非小细胞肺癌预后的重要指标。郑琦等［9］用免疫组化法检测30例翼状胬肉组织和30例正常结膜中VEGF与PCNA的表达，结果发现翼状胬肉中VEGF和PCNA的阳性表达均高于正常结膜，VEGF、PCNA在翼状胬肉中的高表达，提示翼状胬肉组织血管活性、增殖活性增强。与本研究结果一致，由此可见，翼状胬肉的形成与肿瘤组织的形成有相似之处，可能是VEGF和PCNA共同作用的结果。

4 小结

本实验研究结果显示，VEGF和PCNA在翼状胬肉组织中均有阳性表达，明显高于正常结膜组织;VEGF和PCNA在翼状胬肉中的表达呈正相关，PCNA随着VEGF表达强度的升高而升高，提示VEGF和PCNA可能通过不同的途径共同参与了翼状胬肉的发病过程。

［1］ 惠延年．眼科学．第6版．人民卫生出版社，2004:89．

［2］ Tsai YY，Chang KC，Lee H，et al.Effect of p53 codon 72 polymorphism on p53 protein expression in pterygium．Clin Experiment Ophthalmology，2005，33(1):60-62．

［3］ 朱华锋，汪春兰，赵宇.VEGF和FGF-2在血管生成中的协同作用研究进展.中华整形外科杂志，2006，22(1):72-75．

［4］ 李海燕，刘克兰，袁志刚，等．翼状胬肉中Ki-67和VEGF的表达．中国实用眼科杂志，2006，24(9):946-948．

［5］ Ueda Y，Kanazawa S，Kitaoka T，etal．Immunohistochemical study of p53，p21 and PCNA in pterygium.Acta Histochem，2001，103(2):159-65．

［6］ 颜美荣，李正贤，刘庚勋，等．PCNA、Caspase23在翼状胬肉中的表达与细胞增殖的关系．湖南师范大学学报(医学版)，2007，4(2):20-22．

［7］ 周祥荣，李忠音，杨小东，等．PCNA和VEGF在胃癌组织中表达的关系及意义 华西医学，2009，24(10):2585-2587．

［8］ 杨宏刚刘建军，杨敏．VEGF、PCNA在非小细胞肺癌组织中的表达及意义．新疆医科大学学报，2009，32(2):159-164．

［9］ 郑琦，王伟刚，郑根主．VEGF与PCNA在翼状胬肉中的表达．中国中医眼科杂志，2010，20(3):159-161．