用紫外分光光度仪对缺血修饰白蛋白进行扫描检测

何乐春 张蓓

1 重庆医疗器械质量检验中心 (重庆 401147)

2 重庆市医疗器械质量与安全控制工程技术研究中心 （重庆 401121）

3 重庆市计量质量检测研究院 （重庆 401121）

0.前言

缺血修饰白蛋白(IMA)是一种新的较为理想的缺血标志物，它是第一个被美国食品药品管理局(FDA)批准销售的心肌缺血标志物。利用白蛋白-钴结合试验检测缺血修饰白蛋白含量，作为检测早期心肌缺血的指标。多方面研究证明，IMA可敏感地反映心肌缺血状况，在急性冠状动脉综合征的早期诊断、危险分层、指导治疗等方面有重要意义，是目前较为理想的检测心肌缺血的生化标志物。

1.试验过程

1.1 缺血修饰白蛋白检测试剂盒说明

上海微银生物技术有限公司生产的缺血修饰白蛋白检测试剂盒[沪食药监械生产许20061411号]，批号为11060150。

试剂盒里试剂为双试剂，主要组成成分：R1（氯化钴溶液 CoCl2·6H2O）、R2（偶氮显色剂）。

1.2 试验原理

正常对照组血清样品中的白蛋白以活性形式存在，在和R1已知过量的钴离子溶液混合后，混合液中未与白蛋白结合的钴离子的数量较少；而缺血病人含有较多的缺血修饰白蛋白（IMA），由于IMA与钴离子结合的能力弱，混合液中存在较多数量的未与白蛋白结合的钴离子，然后加入R2偶氮显色剂显色，缺血病人比正常对照组颜色深。在650nm或最接近650nm处检测样品的吸光度，所得数值与IMA标准曲线进行对照，即可得出IMA值。

1.3 操作说明

1.3.1 试验依据：采用缺血修饰白蛋白（IMA）检测试剂盒说明书进行试验。

1.3.2 试剂：

a) 空白试剂：试剂盒里现有的配套使用的空白试剂。

b）应用试剂：按说明书配制，R1:R2=1:10

c）试验试剂：质控血：R1:R2＝1:1:10

1.3.3 试验仪器：紫外分光光度仪（TU-1901）

1.3.4 试验步骤

1.3.4.1 分别以空气、空白试剂、应用试剂调零，在190nm～900nm对试验试剂进行扫描，检出特征吸收峰（谷）；

1.3.4.2 分别以空气、空白试剂、应用试剂调零后，按照产品说明书中的比色条件（光径1cm，波长650nm）：测定试验试剂的OD值，平行测定3次。

2.试验结果

2.1 以空气、空白试剂、应用试剂调零，检出试验试剂的特征吸收峰（谷）分别为580nm、586nm、646nm，光图谱分别见图1、图2、图3。

2.2 试验试剂的OD值（见表1）。

表1.

图1.

图2.

图3.

3.对试验结果的分析

3.1 从特征吸收峰（谷）的光谱图（图1～图3）可看出，图1检出的特征吸收峰为580nm，图2检出的特征吸收峰为586nm，即以空气调零和以空白试剂调零所检出的特征吸收峰完全一样，而以应用试剂调零检出的光谱图，其特征吸收峰为545nm，谷为646nm，与图1、图2相比校，光谱图存在差异，一是峰值相差35～41nm，二是有波谷的出现。

3.2 从表1得出，以空气和空白试剂分别调零后所得出的OD值几乎一样，两者与以应用试剂调零后所得出的OD值完全不一样。图3会出现波谷（646nm），以及在650nm的OD值为负值，皆因为反应原理是显色剂结合了剩余的钴离子（即以R1和R2发生反应后的吸光度值A1来调零，测定质控血里的白蛋白和R1发生反应后，R1中剩下的钴离子与R2发生反应所得的吸光度值A2，因A1＞A2，所以A2为负值）。

4.结束语

现目前市场上生产的缺血修饰白蛋白（IMA）检测试剂盒的原理大致相同，主要基于白蛋白钴结合试验，但由于试剂盒主要成分（大多为CoCl2•6H2O、显色剂等）的配比及试验环境（即酸碱性）的不同，使得不同的生产厂家对其测定波长的设定有所不同，分别有470nm、505nm、510nm等。

此次试验的目的，第一，通过紫外分光光度仪检出特征吸收峰（谷）；第二，按试剂盒说明书的要求，在指定波长下检测吸光度，比较吸光度的差异。对图1和图2进行比较，可看出，从吸收峰（580nm/586nm）到650nm这一波长范围内，吸光度是呈下降趋势，企业将试验试剂吸光度呈下降趋式中的某一点（650nm）设置为检测波长，不知意义何在，为何不直接将检测波长设置在特征吸收峰的波长范围内，且企业在做该产品的研发时，是否做过相关性试验的对比及研究。比较图2与图3，用不同的试剂调零，得出的光谱图完全不一样，由此可得出试剂盒里现有的配套使用的空白试剂与应用试剂的成分有差别。根据试验操作的平行原则，笔者认为在消除试验空白时，应以应用试剂来消除试验空白，而不是以空气或空白试剂来消除空白；按照产品说明书的检验要求，虽整个试验过程都是平行操作进行，但通过试验证明，用不同的方式进行测试，所得的试验结果完全不同，而这种存在差异的结果是否能为临床医生提供真实可靠的数据，又是否会影响到IMA在临床上的诊断意义呢？

[1]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.GB/T 26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）[S].2011。

[2]史连义，吴宝水，张继领.缺血修饰白蛋白临床应用研究进展[J].医学综述2009年11月第15卷第21期 3239-3241。

[3]贾克刚，韩雪晶，唐红霞，南芳，张淑菊.应用全自动生化分析仪测定缺血修饰白蛋白[J].检验医学2007年第22卷第3期。

[4]梁宏.缺血修饰白蛋白-心肌缺血标志物研究进展[J].中国实验诊断学2006年10月第10卷第10期。

[5]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验手册[M].3版.南京.东南大学出版社 2006452-456。

[6]陆永绥，李清华，张伟民.临床检验自动化分析标准操作规程[M].浙江大学出版社.2006.9。

[7]中华人民共和国卫生部.WS/T 124-1999临床化学体外诊断试剂盒质量检验总则[S].1999。