高效液相色谱法测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷与黄芩素含量

2012-08-06邵礼梅王云龙李延雪

中国药业 2012年4期

邵礼梅，王云龙，李延雪

(黑龙江省鸡西市药品检验所，黑龙江鸡西 158100)

蒲地蓝消炎片由黄芩、蒲公英、板蓝根、苦地丁4味中药组方，具有清热解毒、抗炎消肿的功效，用于疖肿、腮腺炎、淋巴腺炎、扁桃腺炎等症。方中黄芩清热燥湿、泻火解毒、止血，有效成分为黄芩苷、黄芩素[1]。其原标准[2]中没有黄芩的含量测定方法和标准。为完善质量控制方法，笔者以黄芩苷、黄芩素[1，3－5]为测定指标，建立了同时测定蒲地蓝消炎片中黄芩苷、黄芩素含量的高效液相色谱(HPLC)法，现报道如下。

1 仪器与试药

LC－2010A型高效液相色谱仪(岛津)，包括LC－2010型紫外检测器、在线脱气机、四元泵、自动进样器、LCsolution色谱工作站;AG285型电子分析天平，KQ－400KDE型超声波清洗器，TU－1901型双光束紫外－可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。黄芩苷对照品(批号为110715－201016，含量以94.0%计)、黄芩素对照品(批号为111595－200604)均来自中国药品生物制品检定所;蒲地蓝消炎片(批号分别为091110，20100701，101101，20101201);甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Zorbax SB －C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:A相为0.1%磷酸水溶液，C相为甲醇，梯度洗脱(0～40 min，60%→20%A，40%→80%C;40～60 min，20%→60%A，80%→40%C);流速:1.0 mL/min;检测波长:274 nm;柱温:30℃;进样量:5μL。理论板数黄芩苷峰不低于5 000，黄芩素峰不低于7 000。

2.2 溶液制备

分别精密称取黄芩苷对照品24.16 mg(含量以94.0%计)与黄芩素对照品8.49 mg，分别置100 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液A和B。分别精密吸取上述对照品贮备液A和B各5 mL，至同一20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成混合对照品溶液C(质量浓度分别为黄芩苷56.78 μg/mL，黄芩素 21.22 μg/mL)，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得对照品溶液。取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约1片重，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入70%乙醇溶液40 mL，密塞，超声处理(功率 400 W，频率36 kHz)30 min，取出，放冷，加70%乙醇溶液至刻度，摇匀，过滤，精密吸取续滤液5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按处方量并以相同工艺制备缺黄芩的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按拟订的色谱条件测定，高效液相色谱图见图1。阴性对照品溶液色谱图中，与黄芩苷、黄芩素对照品溶液色谱相应位置的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对其测定无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品混合溶液 C 0.5，1.0，3.0，5.0，7.0，9.0，11.0 μL，注入液相色谱仪，测定黄芩苷、黄芩素峰面积。分别以进样量(μg)为横坐标(X)、峰面积(Y)为纵坐标进行回归分析，黄芩苷、黄芩素回归方程分别为 Y苷=3.7×106 X+1 120.6，r苷=1.000 0(n=7);Y素=6.2 ×106 X+432.0，r素=1.0000(n=7)。结果表明，黄芩苷进样量在 0.02839 ～0.62458μg、黄芩素进样量在0.010 61～0.233 42 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样5次，测定黄芩苷、黄芩素峰面积。结果黄芩苷峰面积平均值为1 005 936.8，RSD=0.21%;黄芩素峰面积平均值为 634 524，RSD=0.07%(n=5)。表明在该条件下仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为101101)溶液，分别在0，2，4，8，12，16，24 h 时进样，记录峰面积。结果黄芩苷峰面积平均值为 477534.71，RSD=0.27%;黄芩素峰面积平均值为 288575.71，RSD=0.28%(n=7)。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

重复性试验:分别精密称取样品(批号为101101)5份，按供试品溶液的制备方法制备溶液并测定含量。结果黄芩苷平均含量为 6.73 mg/片，RSD=0.37%;黄芩素平均含量为 2.41 mg/片，RSD=0.53%。结果表明，方法的重复性良好。

加样回收试验:称取已知含量的同一批样品(批号为101101，平均片重 0.300 7 g，黄芩苷含量为 6.73 mg/片;黄芩素含量为 2.41 mg/片)约 0.15 g，精密称定，共 6 份，以两份为一组，每组分别精密加入黄芩苷对照品 2.695，3.350，4.035 mg 与黄芩素对照品 0.965，1.200，1.445 mg，按 2.2 项下方法制成供试品溶液。在拟订的色谱条件下，分别进样测定，计算回收率。结果见表1。