菊泰软膏剂中紫锥菊提取工艺

常艳茹 赵雪娇 刘雅萍 赵昱玮 张 倩 杨冬华

（1 吉林天药药物研发有限公司，吉林 长春130012；2 沈阳化工研究院有限公司，辽宁 沈阳 110141）

菊泰软胶囊为本公司已经上市的保健食品，由西洋参提取物和紫锥菊两味药材组成具有抗疲劳、提高免疫力及升高外周白细胞作用。处方中主药西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根，药理实验表明西洋参具有明显的生肌、收敛、抗菌作用[1]处方中紫锥菊（Echinacea purpurea （L.） Moench.），又名紫花松果菊，为菊科松果菊属植物紫花松果菊的干燥全草，主要药用成分为菊苣酸、松果菊苷、生物碱、多糖及糖蛋白等活性成分[2]。其所含有的多糖可以抑制透明质酸酶，刺激新组织的产生，此外紫锥菊具有良好的抗菌和抗病毒作用，有利于皮肤伤口愈合[3]。基于以上，我们将菊泰软胶囊制成软膏剂，用于清热解毒，凉血祛腐止痛，用于Ⅰ、Ⅱ度烧烫伤。本实验以该处方中紫锥菊为研究对象，建立了高效液相色谱法测定菊苣酸的含量，利用正交实验方法对乙醇提取紫锥菊工艺进行研究。

1 仪器与试药

1.1 实验原料

紫锥菊全草（吉林省宏检医药药材有限公司），提取前粉碎过20目筛。

1.2 实验仪器与试药

高效液相色谱仪：SHIMADZU LC-2010（日本岛津公司），紫外检测器：所用的试剂乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。菊苣酸对照品（批号：111752-200902，规格：20 mg，中国药品生物制品检定所提供。

2 方法与结果

2.1 实验方法[4-7]。

2.1.1 色谱条件

色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.5%磷酸水溶液=15∶85流速为1.0mL/min，检测波长为330nm 检测温度：30℃；进样量为10µL。

2.1.2 标准曲线的绘制

精密称取菊苣酸对照品10mg置20mL容量瓶中，用70%乙醇溶解并加至刻度。再精密吸取1mL置10mL容量瓶中，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得0.05mg/mL对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液2.0、5.0、10.0、15.0、20.0µL注入液相色谱仪中，测定峰面积。以菊苣酸质量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，得方程：Y=5E+06X-9868.6 r=1 线性范围：0.10～1.00µg。

2.1.3 正交实验设计

以干膏得率和菊苣酸的含量为考察指标，用正交实验法L9（34）进行试验，选择影响提取工艺中的4个主要因素：A（乙醇浓度/%）、B（加醇量/倍）、C（提取时间/小时）、D（提取次数/次），每个因素3个水平进行试验。

表1 因素水平表

2.1.4 提取工艺和数据测量

按L9（34）正交表安排实验，称取紫锥菊全草粗粉100g，按表2所列条件加入乙醇后回流，滤过，滤液置已干燥至恒重蒸发皿中水浴蒸干，于60℃减压干燥48h，置干燥器中冷却0.5h，迅速称重并密闭保存。

干膏得率测定：根据干膏得率=W/100×100%计算，W为干膏重。

菊苣酸含量测定：精密称取各提取物样品适量，置10mL量瓶中，用70%乙醇溶解并加至刻度，过0.45µm滤膜，按上述色谱条件，精密取续滤液10µL注入液相色谱仪，记录色谱图；测定菊苣酸峰面积，根据2.1.2中线性方程计算菊苣酸含量，含量结果见表4。

2.2 结果

2.2.1 极差分析

表2 正交设计方案和出膏率试验结果

表3 干膏得率方差分析表

表4 正交设计方案和菊苣酸含量试验结果

表5 菊苣酸含量方差分析表

以干膏得率为考察指标，由表2、表4中极差R值大小显示，各因素主次作为：A＞C＞D＞B，即乙醇浓度为重要因素，其次是提取次数、提取时间和乙醇用量；以菊苣酸含量为考察指标可知，各因素主次作为：A＞C＞B＞D，即乙醇浓度为重要因素，其次是提取次数、乙醇用量和提取时间。

2.2.2 方差分析

将实验所得数据用SPSS软件进行方差分析，结果见表3和表5.方差分析结果表明：以干膏得率为考察指标，A因素和C因素均为显著性影响因素（P＜0.05），B、D无显著性意义，最优工艺为A2B1C3D1即用8倍量70%乙醇提取3次，提取1h。以菊苣酸含量为考察指标可知，A、C因素有极显著性影响（P＜0.05）B为显著性意义，其他因素无显著性意义（P＞0.05）以最优工艺为A3B3C3D3，即用12倍量80%乙醇提取3次，提取2h。

根据极差和方差分析的结果，考虑到菊苣酸为紫锥菊主要有效成分，其含量与软膏药效有重要关系，可能直接影响药物品质，因此以菊苣酸含量作为考察指标，并结合经济节能的原则综合分析确定A3B1C3D1为最佳工艺，即用8倍量80%乙醇提取3次，提取1h。

2.3 验证实验

由于优选的工艺未包括在正交设计表的9次试验中，故对其进行验证试验。用同一批药材，按照前述的提取过程，按A3B1C3D1工艺条件进行试验3次，结果见表6。由表6可知此工艺基本稳定可行。

表6 验证试验结果

3 讨 论

紫锥菊中菊苣酸的提取一般采用水，甲醇，乙醇和超临界提取[8]，由于水提取温度高，容易造成菊苣酸的氧化；甲醇提取容易造成甲醇的残留，降低产品的质量和带来不安全因素，因此不适合于工业化；超临界提取方法既不会造成的氧化，也不会污染产品，但是由于其成本较高，收率低，不适合工业化研究。本实验采用乙醇作为工业化提取溶剂，价格便宜，操作简便安全，适合应用于工业化[9]。

[1]邬秀华.西洋参在临床换药中的应用和体会[J].齐齐哈尔医学院学报,1998,19(3):55.

[2]肖培根.国际流行的免疫调节剂-紫锥菊及其制剂[J].中草药,1996,27(1):46.

[3]busing,1952;Vogel&Mitarb,1968;Bonadeo,1971.

[4]陈波,潘振球,范元成,等.高效液相色谱法制备菊苣酸标准对照品的研究[J].实用预防医学,2001,8(1):15-17.

[5]罗旭彪,陈波.紫锥菊及其复方制剂中菊苣酸的HPLC测定[J].中草药,2002,33(10):890-891.

[6]王弘,王雪薇,陈世忠,等.松果菊属3种植物的理化分析[J].中草药,2001,32(10):934-936.

[7]何传波,吴兰兰,汤凤霞,等.铁观音茶多糖的酶法提取及脱蛋白工艺研究[J].云南民族大学学报:自然科学版,2009,18(1):41-44.

[8]吴启林,袁其朋,陈养文.紫锥菊中菊苣酸提取纯化工艺研究[J].中草药,2004,35(9):995.

[9]张雷,邹任贤,邓韵等.紫锥菊有效部位提取工艺的研究[J].中成药,2008,30(4):603.