2型糖尿病小鼠模型的建立及中药舒糖宝治疗效果的研究①

何胜 李文文 石丽娟 廖维芳 潘裕钊 朱晓莹 张树球

(右江民族医学院重金属与氟砷毒物研究实验室 广西百色 533000)

糖尿病是以血糖升高为特征的全身代谢性疾病,临床上主要分为1型和2型。1型又称胰岛素依赖型,由胰岛素分泌障碍引起;2型又称非胰岛素依赖型,由胰岛素受体缺陷引起。两型的病因、发病机理和治疗方法均不相同。它们的共同特征都是血糖升高。为研究糖尿病进行模型的建立,常用的化学药物四氧嘧啶、链佐霉素均是专一性的选择性破坏胰岛B细胞,一次性注射大剂量造成胰岛素分泌障碍,血糖升高,所成的是1型糖尿病模型。本文先用高脂高糖饲养造成动物血脂升高,再用小剂量的链佐霉素多次注射,使血糖升高,建立类似2型糖尿病,然后进行治疗,测定血糖和血脂含量。现将实验结果报道如下。

1 试剂与方法

1.1 试剂与材料

链佐霉素,分析钝,Sigma产品;柠檬酸、柠檬酸钠,硫脲、饱和硼酸、邻甲苯胺、冰乙酸、标准葡萄糖,均为国产分析钝。总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素测定试剂盒,购自四川、成都迈克试剂公司。

表1 造模前后和治疗前血糖含量比较(s)

表1 造模前后和治疗前血糖含量比较(s)

注:方差分析:组间比较,造模后,与正常组比较,△△P＜0.01,治疗前,与正常组比较,★★P＜0.01,造模后与治疗前比较,稍有升高,正常组变化较小。组内比较,模型组,与造模前比较,aP＜0.01,与造模后比较,bP＜0.01,治1组,与造模前比较,a P＜0.01,与造模后比较,bP＜0.01;治2组,与造模前比较,aP＜0.01,与造模后比较,bP＜0.01

组别 造模前(mmol/L)造模后(2d)(mmol/L)治疗前(mmol/L)正常组 6.02±0.96 5.56±0.89 5.87±1.25模型组 5.89±1.24 (20.54±4.50)△△a (22.97±6.76)★★ab治1组 6.22±0.87 (19.66±6.77)△△a (23.44±10.57)★★ab治2组 6.20±1.16 (18.32±5.04)△△a (25.83±9.32)★★ab

表2 治疗前、后血糖和尿糖含量比较(s)

表2 治疗前、后血糖和尿糖含量比较(s)

注:方差分析:血糖:组间比较,治疗前,与正常组比较,★★P＜0.01,治疗后,与模型组比较,△△P＜0.01,与正常组比较,★★P＜0.01;组内比较,模型组,与治疗前比较,aP＜0.01;治1组双和治2组舒, 与治疗前比较,aP＜0.01;尿糖:治疗前,与正常组比较,△△P＜0.01;治疗后尿糖,与模型组比较,△△P＜0.01;与治2组比较,★★P＜0.01

组别 治疗前血糖(mmol/L)治疗后血糖(mmol/L)治疗前尿糖(mmol/L)治疗后尿糖(mmol/L)正常组 5.87±1.25 (5.62±1.23)△△ 3.59±1.61 (2.46±2.84)△△★★模型组 (22.97±6.76)★★ (26.37±6.39)★★a (275.9±55.10)△△ 335.15±128.38治1组 (23.44±10.57)★★ (18.33±9.86)△△★★a (227.13±83.05)△△ (80.53±27.53)△△★★治2组 (25.83±9.32)★★ (15.14±3.55)△△★★a (349.68±77.69)△△ 298.60±74.74

表3 血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素含量比较(s)

表3 血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素含量比较(s)

注:方差分析:总胆固醇(TC),与治2组比较,△P＜0.05,尿素,与正常组比较,△P＜0.05,△△P＜0.01

组别 总胆固醇(TC)(mmol/L)甘油三脂(TG)(mmol/L)尿素(mmol/L)正常组 (2.27±0.43)△ 0.92±0.24 7.50±1.19模型组 2.59±0.69 0.90±0.26 (11.37±3.09)△治1组 (2.63±0.56)△ 1.19±0.34 (11.91±2.15)△△治2组 3.32±0.84 1.32±0.47 (12.04±2.08)△

图1 正常组肾

图2 模型组肾

图3 治疗1组肾

图4 治疗2组肾

1.2 药品

舒糖宝,用酸荔枝、番石榴、沙田柚等果类提取制成,由本院海尔福研制中心提供。盐酸二甲双胍,购自市内药店。

1.3 动物

48只小白鼠,昆明种,雌雄各半,健康,鼠龄2个月,由学院动物室提供。

1.4 动物实验

用学院动物室提供的标准饲料,加猪油、白砂糖、水一起搅拌,做成饭团状喂养36只小白鼠1个月。然后造模,先用链佐霉素[3],按40mg/(kg·d-1),用0.1mol/L柠檬酸缓冲液(pH4.0)溶解后进行腹腔注射,每天1次,连续5d。测定造模后2d血糖,再加用四氧嘧啶,按100mg/kg腹腔注射1次,测定48h,(2d的血糖)。造模组分成3组:模型组,治1组,治2组,每组12只。另设正常组(12只)。按成人剂量折算计,蒸馏水溶解后灌胃,每日1次。治2组用舒糖宝治疗,每鼠取舒糖宝原液0.2mL加蒸馏水稀释至0.4mL灌胃,每日1次。治疗20d。测定治疗后血糖。收集治疗前、后尿液,测定尿糖。实验结束,从眼球取血,测定TG、TC和尿素。

1.5 测定方法

血糖,用邻甲苯胺微量法测定,从小鼠尾巴取全血20uL,按文献操作[1]。TC用COD-CE-PAP法测定;TG用GPO-PAP法测定;尿素,用脲酶波氏法测定;具体操作按试剂盒说明书。

1.6 统计学处理

数据用SSTP软件(上海科技出版社2.00版本)统计,方差分析,Q检验。结果用(s)表示。

2 结果

(1)造模前、后血糖含量测定结果。结果显示,组内前、后比较,造模组造模后血糖含量明显升高,差异有统计学意义,P＜0.01;治疗前比造模后尚进一步升高。组间比较,造模组血糖含量明显高于正常组,见表1。

(2)治疗前、后血糖和尿糖含量测定结果。结果显示,血糖:组间比较,治疗前、后正常组均明显低于其他3组,差异有统计学意义,P＜0.01;组内前、后比较,模型组,治疗后明显高于治疗前,差异有统计学意义,P＜0.01;治1组和治2组,治疗后明显低于治疗前,差异有统计学意义,P＜0.01;尿糖治疗前、后正常组均明显低于其他3组,治疗后治疗组均降低,模型组升高,见表2。

(3)治疗后血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿素含量测定结果。结果显示,总胆固醇(TC)治2组明显高于正常组和治1组;尿素正常组明显低于其他3组,见表3。

(4)肾病理形态研究结果。结果显示,正常组:肾小体大小正常,肾小囊壁、边界清析可见。肾小管细胞无空泡和坏死和排列及结构正常,无出血、肿状、空泡和坏死现象(图1)。模型组:肾小体数量减少,肾小体边界不清楚,肾小囊壁有断裂现象,肾小管细胞肿状、空泡和坏死,肾间质有出血现象(图2)。治疗1组:肾组织病理改变好转,肾小管细胞和排列及结构基本正常,肿状、空泡和坏死现象减少(图3)。治疗2组:肾组织基本正常,肾小体数量增多,肾小囊壁、脏层边界清析,肾小管细胞肿状、空泡和坏死病理改变明显好转(图4)。

3 讨论

(1)造模小鼠血糖明显升高,平均都在15mmol/L以上,且明显高于正常组。表明造模是成功的。文献普遍认为血糖高于11.1mmol/L以上为造模成功[2]。因此可用于实验治疗。本次是采用链佐霉素多次中剂量连续腹腔注射,比起覃艺用一次性注射链佐霉素血糖升高较好[5],一次性血糖升高不够高,不理想,用于实验治疗较难对照比较。一般平均在15mmol/L以上较好,但最高血糖达30mmol/L以上,又容易死亡。

(2)治疗后,标准药物对照组[3]盐酸二甲双胍组(治1组)血糖从(23.44±10.57)降至(18.33±9.86),舒糖宝治2组血糖从(25.83±9.32)降至(15.14±3.55),虽然没有降至正常,但降的幅度都较大,说明有较好的治疗效果。对照组正常组前后变化不大,模型组没有降低反而升高了。

(3)尿糖测定结果表明,在治疗前,模型组、治1组、治2组尿糖都明显高于正常组(P＜0.01),治疗后,治1组下降最明显,治2组也有一定程度下降,模型组不降反而有升高。尿糖结果与血糖结果是一致的。正常组也测出少量尿糖,其原因不清楚。

(4)总胆固醇(TC):治2组明显高于正常组和治1组;甘油三脂(TG)没有统计学的差异,据临床所见,部分糖尿病人可见总胆固醇和甘油三脂升高,这是糖代谢障碍导致脂类代谢障碍的结果[4],但并非一定出现,仅部分病人,以甘油三脂升高多些;尿素正常组明显低于其它3组(P＜0.01),显示高血糖可能造成肾脏损害,这与肾脏病理形态损害相一致,也与临床所见相一致,但后3组之间尚未出现显著性差异,原因尚待进一步探讨。

[1]安乙敏.生化检验学[M].成都:四川科学技术出版社出版,1990:68.

[2]黄松.糖尿病动物模型研究现状及进展[J].广西医学,2002,24(1):46～47.

[3]赵世华,赵文娟,阎胜利,等.吡格列酮和二甲双胍治疗2型糖尿病的对照研究[J].天津医药,2004,32(8):463～465.

[4]钱荣立.糖尿病与血脂异常[J].中国糖尿病杂志,2000,10(2):125.

[5]覃艺,张树球,郭厚基,等.舒糖宝对STZ造模2型糖尿病小鼠生化指标的影晌[J].实用糖尿病杂志,2005,1(5):21～23.