儿童喉乳头状瘤方的急性毒理实验

马 捷 李 峰 王 军 刘 燕 马丽晶 渠晓丽

1.北京中医药大学 国家中医药管理局中医科研三级实验室，北京 100029；2.首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科 耳鼻咽喉头颈外科学教育部重点实验室，北京 100730；3.武警后勤学院附属医院，天津 300162

喉乳头状瘤（laryngeal papilloma，LP）是一种非浸润性的良性上皮瘤，其临床可分为成人型（adult-onset laryngeal papilloma，ALP）及儿童型（juvenile-onset laryngeal papilloma，JLP）两类。幼儿型以多发性居多，且发病年龄多在7岁之前。由于本病易造成呼吸道梗阻，且易复发，常需多次手术，故给患者及其家庭造成了沉重的经济与心理负担。随着近年来性病和传染性疾病的增多，儿童复发性呼吸道乳头状瘤病（juvenile onset recurrent respiratory papillomatosis，JORRP） 也有明显增多的趋势。目前，现在国内外治疗本病，以手术切除术为主，在术后应用免疫抑制剂，防止其复发，但疗效不甚理想，所以有必要从祖国医学中寻找有效的治疗途径，本研究结合中医喉科与儿科的特殊理论，针对本病“邪毒瘀滞，痰湿阻喉”的核心病机，立“化痰祛湿，扶正解毒”为法，拟“儿童喉乳头状瘤方”（蒲公英、连翘、半夏、薏艹以仁、浙贝母、白花蛇舌草、青果、地肤子、土茯苓、生甘草、西洋参、陈皮、三七、刘寄奴）。其方在临床中应用多年，具有显著效果。为了明确本方的毒副作用及安全性，进一步指导临床用药，故进行急性毒理学实验研究。

1 仪器与试药

1.1 实验动物

昆明种（KM）小白鼠 40 只，清洁级，体重为（20±2）g，2 个月龄，均由北京中医药大学动物实验中心提供 [许可证号：SYXK（京）2006-0012]。随机将其分为两组，对照组和中药组，每组20只，雌雄各半。两组动物饲料及消毒垫料一致。

1.2 受试药物

儿童喉乳头状瘤方由蒲公英、连翘、半夏、浙贝母、白花蛇舌草、青果、土茯苓、生甘草等药组成。药物饮片由北京中医药大学第一临床医学院药剂科提供，药材来源于北京康仁堂药业有限公司（批号：110401，生产日期：2011年4月16日）。

1.3 实验条件

实验小鼠按雌雄分笼，每笼5只。室温：15～25℃，湿度：60%～70%。给药前后，以全价颗粒饲料喂养，自由饮水。

1.4 主要器材

灌胃器、烧杯、量筒、电子天平等。

2 方法与结果

2.1 方法

2.1.1 急性毒理实验

2.1.1.1 预实验 按急性毒理实验方法[1-2]，选用KM小鼠40只，禁食、不禁水12 h。把中药配制成最大浓度的混悬液，含生药2.633 g/mL（以不堵塞灌胃器为限度）。每只小鼠每次灌胃约为0.8 mL/20 g（体重），24 h内灌胃3次，间隔4 h。然后按常规饲养，并观察小鼠的毒性反应情况（外观、活动、呼吸、分泌物、排便、死亡等），且连续称重7 d。因以最大给药浓度、最大给药容量，均未测出半数致死量（LD50），故做最大给药量实验。

2.1.1.2 最大给药量实验 在预试验的基础上，采用最大给药量法，选用昆明种小白鼠20只，雌雄各半，体重（20±2）g。 给药前均禁食、不禁水12 h。并按预实验方法配药，以每只小鼠给予最大生药浓度2.633 g/mL，最大体积0.8 mL/20 g的药液灌胃，以观察14 d内小鼠的外观、饮食、活动、排泄、死亡等情况。14 d后以颈椎脱臼法处死小鼠，解剖后观察其重要脏器（心、肝、脾、肺、肾、胃、肠等）的变化。

2.1.2 统计学方法

采用Epidata 2.0建立数据库，并进行双人双录入核对；数据采用SPSS 17.0软件进行统计学处理。各项指标中，计量资料数据以均数±标准差（）表示，采用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2.2 结果

2.2.1 一般表现

给药后14 d内，实验组小鼠饮食正常，皮毛光滑，活动自如，大小便正常，无异常分泌物，其呼吸系统（呼吸平稳）、神经系统（未见厮打及嗜睡情况）、消化系统（排便正常，给药当天为棕褐色便，2～3 d后均恢复正常，未见腹泻）与泌尿系统（尿量及颜色正常）均未见异常，小鼠全部存活。其每天最大给药量为290.666 g/kg，相当于临床儿童用药量的206倍。

2.2.2 体重变化情况

给药后14 d内，两组小鼠体重均增加，通过分析给药后7、14 d两个时间内中药组与对照组的体重变化，发现两组体重差异无统计学意义（P>0.05），两组小鼠体重均随时间呈现递增的趋势，且雄性体重均高于雌性。14 d内中药组雄性小鼠体重增长（8.02±1.16）g，对照组雄性小鼠体重增长（8.21±1.03）g，两组体重增长差异无统计学意义（P>0.05）。14 d内中药组雌性小鼠体重增长（3.14±1.35）g，对照组雌性小鼠体重增长（3.04±1.17）g，两组体重增长差异无统计学意义（P>0.05）。两组小鼠体重变化均在生理范围之内。见表1。

2.2.3 主要脏器观察

对两组小鼠进行断颈处死后，进行实体解剖，对心、肝、脾、肺、肾、肠道进行观察，均未见脏器肿大、萎缩、坏死等异常现象，主要脏器外形完整，无任何不良病变。提示本药无毒，其临床用药量是一个安全的剂量，临床用药安全。

3 讨论

本方对术后患儿的治疗有显著的意义。方以“二陈汤”为基础进行化裁。“二陈汤”为宋代《太平惠民合剂局方》所载。其中，半夏，燥湿化痰；陈皮，理气燥湿，顺气消痰；甘草，可润肺和中，而本方用生者，取其“用气平而泻火”之意[3]。据研究发现，本病多以“痰湿阻喉”证为主，《医方集解》曾言：“治痰通用二陈”[4]，故用本方颇为妥当。同时，方中又加入薏苡仁，甘淡利湿，而兼顾小儿脾胃；浙贝母，体坚味苦，以祛风痰；蒲公英、连翘、白花蛇舌草，三者可清热解毒，消肿散结，且白花蛇舌草一味，可专治咽喉肿痛；三七、刘寄奴祛瘀生新；青果，解毒利咽；地肤子、土茯苓，利湿消肿；西洋参，以顾护小儿气阴之不足。全方共凑“化痰祛瘀，扶正解毒”之效。

表1 最大给药量实验体重变化表（，g）

表1 最大给药量实验体重变化表（，g）

通过对相关单味药文献分析，本方中诸药药性有抗炎、抗肿瘤、抗癌的功效。其中，连翘、浙贝母、生甘草尚有抗病毒的效用。另外，本病与尖锐湿疣同属一种病毒感染，所以，在条目中又列“治疣”一项，并发现本方中有四味药有此特效。据现代药理学研究表明，白花蛇舌草中含多糖类物质，对淋巴细胞具有刺激作用，可显著增强机体免疫活性，具有抑制肿瘤细胞增殖的功效，而且，据研究其在体内能刺激网状内皮系统增生，促进抗体形成，使网状细胞、白细胞的吞噬能力增强，从而达到抗病毒、抗炎的作用。同时，土茯苓中的总皂苷成分，具有抗肿瘤作用，而总黄酮成分可以抗脂质过氧化并且可以增加机体免疫能力[5]。另据体内和体外实验研究证明：西洋参中的单体化合物游离色氨酸、游离脂肪酸和多糖类物质均具有抗肿瘤活性[6-7]，临床应用获得满意的疗效。青果中含有黄酮类物质及没食子酸，是其抑菌防腐的主要药效成分，有较好的抗炎、镇痛和抑菌作用，据临床报道，其对慢性咽喉肿痛亦有佳效[8-9]。佐药甘草中含有甘草甜素，可发挥类激素作用，对多种病毒有明显的抑制效果，并可有效提高机体的免疫功能。

本研究在预实验中未测出半数致死量（LD50），故进行最大给药量实验。结果提示，小鼠每天最大给药量为290.666 g/kg，相当于临床儿童用药量的206倍，14 d后模型小鼠在全身体征，内脏状况观察均为出现异常情况。并隔日测量体重，分析两组小鼠体重变化，提示两组体重无显著性差异，中药组体重随时间呈递增趋势，雄性高于雌性。与正常组相吻合。同时，本研究还发现，在给药期间，小鼠精神状态较稳定，未见撕咬等情况，提示本药未见精神毒性作用。通过上述分析，本方对于喉乳头状瘤病儿童的临床应用，较为安全。

[1]卫生部药政局.中药新药研究指南[S].北京:人民卫生出版社，1992：203-207.

[2]胡雷.药物非临床研究与临床试验质量管理务实全书[M].北京：当代中国音像出版社，2003：683.

[3]丁甘仁.药性辑录[M].福州：福建科技出版社，2007：23.

[4]汪昂.医方集解[M].上海：上海科技出版社，1959：245.

[5]郭淑云，张薇，张琰，等.土茯苓水提物对高尿酸血症模型小鼠血清尿酸和甘油三酯、胆固醇的影响[J].中国药房，2011，22（47）：4439-4440.

[6]吴华彰，赵云利，费鸿君，等.西洋参皂甙的抗氧化功能及其对小鼠遗传损伤的保护作用[J].中国生物制品学杂志，2012，25（1）：61-64.

[7]李冀，付雪艳，郝娴，等.西洋参多糖类物质研究进展[J].中医药信息，2006，23（4）：14-15.

[8]王恒，宋良科，汤昊，等.不同种质青果清热利咽化学组分的研究[J].中国中药杂志，2010，35（6）：669-672.

[9]何颖，杨桂林，胡祥宇，等.青果总黄酮的抗炎作用研究[J].安徽农业科学，2012，40（5）：2632-2650.