高效液相色谱－蒸发光散射检测器法测定盐酸金刚烷胺片中盐酸金刚烷胺含量

裴 璐，张爱兵

(河北省唐山市药品检验所，河北 唐山 063000)

盐酸金刚烷胺片主要用于治疗帕金森综合征药物诱发的锥体外系疾病，也用于预防A型流感病毒所引起的呼吸道感染，其在紫外及可见光区均无吸收。对于盐酸金刚烷胺片的含量测定方法，2005年版《中国药典(二部)》采用高氯酸非水滴定法[1]，2010年版《中国药典(二部)》采用的电位滴定法[2]，操作烦琐，前处理样品取样量较大。有报道采用酸性染料比色法[3]、滴定法[4]、高效液相色谱法[5－6]、示波极谱法[7]等测定盐酸金刚烷胺含量。笔者采用高效液相色谱－蒸发光散射检测器法测定盐酸金刚烷胺片的含量，快速、简便、准确、重复性好。

1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱系统;Alltech 2000ES ELSD检测器;Empower色谱工作站;Sartorius BP211D型电子天平。盐酸金刚烷胺对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100426－200301);盐酸金刚烷胺片(0.1 g)为市售，水为纯化水，乙腈为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱柱:Aglient BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 －水(70∶30)，流速:0.5mL/min，柱温:30℃，进样量:10μL;漂移管温度:95℃，雾化气体为空气，载气流速:2.5 L/min。在该色谱条件下，理论板数不低于4000。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱－蒸发光散射检测器法色谱图

2.2 溶液制备

精密称取盐酸金刚烷胺对照品10.12 mg，置100 mL容量瓶中，加流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。取盐酸金刚烷胺片20片，精密称定，研细，精密称取细粉0.08475 g(约相当于盐酸金刚烷胺50 mg)，置50 mL容量瓶中，加流动相振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL置50 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。同时配制不含主药的阴性空白溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取 2.2项下的对照品贮备液2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 mL，分别置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制得系列对照品溶液，按上述色谱条件进样测定，以峰面积(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=3.736×106X －2.3496×104，r=0.9996(n=6)。结果表明，盐酸金刚烷胺质量浓度在 40.92 ～143.22 μg/mL 范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，连续进样6次，记录色谱图。结果峰面积的 RSD为0.7%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:精密量取同一供试品溶液10 μL，分别于0，4，8，12，16，20，24 h 时进样测定。结果峰面积的 RSD 为 0.8%(n=7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重复性试验:按2.2项下方法制备供试品溶液6份，进样测定，记录色谱图，按外标法计算。结果平均标示含量为99.6%，RSD 为 0.6%(n=6)。

加样回收试验:精密称取已知含量盐酸金刚烷胺片细粉9份，精密加 2.26 g/L 的对照品溶液 4.0，5.0，6.0 mL，按 2.2 项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取5批不同厂家样品，按上述方法测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(百分标示量，n=5)

3 讨论

盐酸金刚烷胺在水或乙醇中易溶[2]。经试验，盐酸金刚烷胺片在水中能很好溶解，但水的沸点高，对漂移管的温度要求高，因此溶剂选择与流动相比例一致的乙腈、水能够有效地改善样品雾化温度，达到检出率高的效果。为使测定结果准确，方法的重现性好，对被测样品质量溶度进行选择，分别配制 0.05，0.1，0.2 g/L 的供试品溶液进行测定。根据盐酸金刚烷胺的峰面积及灵敏度，选择0.1 g/L为宜。

现行质量标准[2]采用容量法测定。试验中发现，该操作步骤烦琐，而文中建立的高效液相色谱－蒸发光散射检测器法简便、快速、准确。

盐酸金刚烷胺，分子结构中无共轭双键，因而在紫外光区无吸收，最大吸收波长为195 nm，用紫外方法测定时存在基线漂移不稳、不宜检测等缺点。蒸发光检测器基线平稳，试验中对雾化载气流量和漂移管温度进行优化，用高效液相色谱－蒸发光散射检测器法测定盐酸金刚烷胺的含量，获得较好的结果。

试验中，考察了乙腈－0.06%三氟醋酸流动相系统，基线不容易平稳，同时三氟醋酸为挥发性酸，腐蚀性强，不利于环保;以乙腈－水(70∶30)流动相时系统出峰时间快，峰面积稳定。

试验中考察了 Aglient BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Thermo BDS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)、Phenomsil BDS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)不同厂家的3根色谱柱，发现不同品牌的色谱柱峰面积稳定，重现性良好。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:538.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:716.

[3]姜德长，何选林，秦旭东.盐酸金刚烷胺片的含量测定[J].中国药业，2006，15(15):44.

[4]涂 琼，吴澄清，卢庆红.双相滴定法测定金刚烷胺合剂的含量[J].儿科药学杂志，2004，10(4):45.

[5]修 虹，黄榕珍，付梅春.HPLC－ELSD法测定复方氨酚烷胺胶囊中盐酸金刚烷胺及对乙酰氨基酚的含量[J].中国药品标准，2006，7(1):23.

[6]李士敏，王 伟.液相色谱－质谱联用法测定大鼠血浆中盐酸金刚烷胺浓度及体内药动学研究[J].药物分析杂志，2007，27(1):66.

[7]宋宏春，王 伟，杨永明.示波极谱法测定盐酸金刚烷胺及其制剂的含量[J].药物分析杂志，1993，13(6):401.