高效液相色谱法测定格列齐特缓释片的含量

蒋海峰

(黑龙江大学化学化工与材料学院有机化学实验室，黑龙江 哈尔滨 150080)

格列齐特为磺酰脲类第2代口服降糖药物[1－2]，格列齐特缓释片是其缓释剂型之一，也是目前患者常用药物。2005年版《中国药典(二部)》和文献[3]，其中格列齐特片的含量测定方法为电位滴定法、紫外分光光度法和高效液相色谱法，但未详细设有该物质的相关检测项;同时，由于格列齐特缓释片辅料的原因，在228 nm波长下紫外测定有干扰，而高效液相色谱法在测定药物有效含量时具有精密度高、重现性好等优点[3－5]。因此，笔者采用高效液相色谱法测定了格列齐特缓释片的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC－10ATVP液相色谱仪(日本岛津公司);SPD－10AVP紫外检测器(日本岛津公司);JA1003型电子天平(沈阳龙腾电子有限公司)。色谱乙腈(山东禹王实业有限公司化工分公司);磷酸(天津科密欧化学试剂有限公司)，格列齐特原料药(天津中新药业集团股份有限公司，批号为Y05050035，纯度99%);无水乙醇(分析纯，天津市北方天医化学试剂厂);色谱甲醇(天津科密欧化学试剂有限公司);格列齐特缓释片(施维雅＜天津＞制药有限公司，批号分别为 9G0502，2002258，2001948)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μL);流动相:乙腈 － 水 － 磷酸(70 ∶30 ∶0.1);流速:0.8 mL/min;检测波长:228 nm;柱温:室温。

2.2 溶液制备

精密称取干燥至恒重的格列齐特原料药0.0032 g，置100 mL容量瓶中，加95%乙醇适量，超声使其完全溶解，再加95%乙醇定容至100 mL，作为贮备液。根据2010年版《中国药典(二部)》，取10片格列齐特缓释片(批号为9G0502)，捣碎，研细，取细粉适量置于50 mL容量瓶中，加95%乙醇适量，超声使其完全溶解，室温下加95%乙醇稀释至刻度，摇匀，用一次性滤膜过滤，取滤液适量，再用95%乙醇定量稀释制成20 μg/mL的滤液，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

检测限试验:将配置好的供试品溶液不断稀释，摇匀，进样，以信噪比 S/N=3作为检测限。结果检测限为0.5 μg/mL。

专属性试验:分别取格列齐特原料药的贮备液和供试品溶液各20 μL进样，按色谱条件进样，色谱图见图1。可见，格列齐特原料药保留时间是7.0 min，格列齐特缓释片的辅料出峰在6 min以内，格列齐特主药峰与辅料峰达到有效分离，分离度大于2，辅料对格列齐特测定无干扰，理论板数按格列齐特峰计算不低于2000，表明方法专属性良好。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密称取105℃干燥至恒重的格列齐特原料药0.0032 g，置100 mL的容量瓶中，按贮备液方法制备溶液，用移液管从贮备液中精密量取 0.2，1，2，4，6，8，10 mL，分别置于10 mL容量瓶中，用95%乙醇定容，每次用液相针取20 μL注入液相色谱仪中，峰面积分别为 24107.9，80170.5，159033.8，315542.7，473342.8，638712.3，792820.0，得到标准曲线 A=24675 C+2886.3，r=0.9999(n=7)。结果表明，格列齐特的95%乙醇液在0.64～32 μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好线性关系。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12 h时依法进样。结果峰面积分别为 496501，496383，496156，496373，496079，平均 496298，RSD 为 0.035%(n=5)，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

加样回收试验:按处方比例精密称取格列齐特和辅料混合，分别为标示量的90%，100%，120%，置100 mL容量瓶中，用95%乙醇溶解并稀释定容至刻度，经0.8 μm微孔滤膜过滤，精密量取滤液并稀释。结果见表1。

表1 格列齐特加样回收试验结果(n=9)

精密度试验:取标示量为90%的加样回收试验项下溶液，连续进样6次。结果的 RSD为0.22%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:取同一批次(批号为9G0502)的样品10片，按供试品溶液制备方法操作，重复试验6次。结果的 RSD为0.57%(n=6)，表明方法重现性良好。

2.4 样品含量测定

取3种同一厂家不同批次(9G0502，2002258，2001948)的格列齐特缓释片各10片，依法测定，结果含量分别为标示量的99%，101%，98%，均符合要求。

3 讨论

由2010年版《中国药典(二部)》[6]可知，格列齐特溶于三氯甲烷，在甲醇中略溶，在乙醇中微溶。本试验中，为了避免三氯甲烷和甲醇的毒性，将格列齐特溶于95%乙醇中，但一定要长时间超声处理，确保格列齐特全部溶于乙醇中，才能使数据准确。

称取格列齐特原料药2 mg于50 mL烧杯中，用少量95%乙醇溶解，转移至50 mL容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻度线，以95%乙醇为空白对照，在采用紫外分光光度法，200～400 nm波长处进行波长扫描，格列齐特在228 nm波长处有最大吸收。笔者查阅相关文献资料[8]，通过紫外分光光度法试验确定了格列齐特的波长为228 nm，辅料的杂质峰的干扰可以忽略，用外标法以色谱峰的面积计算药品含量。经过方法学验证，本方法操作简便，回收率、精密度、重现性等结果均符合分析方法规范要求，可用作格列齐特缓释片的含量测定方法。

[2]Krentz A J，Bailey CJ.Oral antidiabetic agents:Current role in type 2 di-abetes mellitus[J].Drugs，2005，65:385－411.

[3]Rambiritch V，Naidoo P.Gliclazide modified release[J].Drugs，2005，65:1449－1450.

[4]董翠萍.反相高效液相色谱法测定治伤胶囊中欧前胡素含量[J].中国药业，2012，24(1):30 －31.

[5]刘 杨，赖庆宽.高效液相色谱法测定复方茶新那敏片中马来酸氯苯那敏含量[J].中国药业，2012，21(1):26－27.

[6]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:809－810.

[7]陈勇川，董 慧，代 青，等.反相高效液相色谱法测定生物样品中左氧氟沙星的含量[J].中国抗生素杂志，1998，23(5):342－343.