高效液相色谱法测定翁沥通胶囊中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量

2012-07-28莫炫永

中国药业 2012年15期

陈平，莫炫永

(1.东莞东华医院药学部，广东东莞 523110; 2.广东省东莞市国药质量检测中心，广东东莞 523010)

翁沥通胶囊由黄芪、金银花、栀子、薏苡仁、大黄、川木通等11味药组方，具有清热利湿、散结祛瘀功效，临床用于证属湿热蕴结、痰瘀交阻之前列腺增生症，症见尿急或尿细、排尿困难等。黄芪具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌之功效，而文献[1－2]未见有测定黄芪的报道。因为黄芪甲苷在紫外没有吸收，故参考文献[3－7]采用高效液相色谱(HPLC)法，对翁沥通胶囊中黄芪的有效成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量进行了研究，旨在为生产及流通控制产品质量提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1200 RRLC型高分离度快速液相色谱仪，包括G1314B VWD SL紫外检测器，G1312B Bin Pump SL二元泵，G1316BTCC SL柱温箱，G1329B ALS SL标准自动进样器(美国安捷伦科技有限公司);KQ5200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电子天平(德国 Sartorius公司，型号为BP211D，CP224S)。毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为111920－201001);黄芪对照药材(蒙古黄芪，中国药品生物制品检定所，批号为110781－200613);乙腈、甲醇 (德国默克集团Merck KGaA)为色谱纯;水(屈臣氏蒸馏水，经0.2 μm微孔滤膜过滤);翁沥通胶囊(吉林省华威药业有限公司，批号分别为110603，110721，110901)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Waters XTERRA MS C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流动相:乙腈－1.5% 磷酸(20 ∶80);流速:1.0 mL/min(流动相在使用前需经0.2 μm微孔滤膜过滤);检测波长:260 nm;进样量:10 μL;柱温:30℃。以保留时间定性，峰面积定量。理论板数以毛蕊异黄酮葡萄糖苷计可达3500以上;样品中毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰与其他峰能达到基线分离，毛蕊异黄酮葡萄糖苷保留时间为7.19 min。分别精密吸取对照品溶液、黄芪对照药材溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10 μL按色谱条件进样。结果在7.28 min处阴性对照品溶液无毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰，供试品溶液与黄芪对照药材溶液比较在 3.20，4.07，7.19，10.56 min 处有共有峰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品15.11 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度为302.2 mg/L的对照品溶液。精密称取黄芪对照药材0.3056 g，置5 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇适量超声20 min并稀释至刻度，摇匀，即得黄芪对照药材溶液。精密量取样品2.3483 g，置25 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇适量超声20 min并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。按照处方及生产工艺制备不含黄芪的阴性样品适量，按供试品溶液方法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系试验:精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品15.11mg，置50 mL棕色容量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为302.2 mg/L的对照品贮备溶液，分别用70%甲醇稀释制成 7.55，15.11，30.22，60.44，90.66，151.1 mg/L的系列溶液。分别精密吸取10 μL按拟订的色谱条件进样，以质量浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线，线性方程为 A=312526 C+20561，r=0.9992(n=6)。结果表明，毛蕊异黄酮葡萄糖苷质量浓度的线性范围为7.55～151.1 mg/L。

精密度试验:吸取质量浓度为90.66 mg/L的对照溶液10 μL，依法重复进样6次，记录峰面积。结果的 RSD为0.53%(n=6)。

重复性试验:精密称取同一样品6份，各2.3 g，按供试品溶液制备方法操作，在拟订的色谱条件下进样分析，记录峰面积。结果的 RSD 为 0.89%(n=6)。

稳定性试验:吸取同一供试品溶液，在室温下放置，分别于0，2，4，8，12，24 h 时进样分析。结果含量的 RSD 为 1.32%(n=6)表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品适量共9份，分别加入80%，100%，120%3种量级的对照品溶液适量，按供试品溶液制备方法操作，在拟订的色谱条件下进样分析。结果见表1。