高效液相色谱法测定复光颗粒中芍药苷含量

2012-07-28王路宏

中国药业 2012年15期

梁帅，王路宏，李岩

(1.吉林省四平市食品药品检验所，吉林四平 136000; 2.吉林省脑科医院，吉林四平 136000)

复光颗粒为吉林省四平市第二荣复军人医院的中药制剂，由白芍、当归、茯苓、白术、柴胡、熟地、山药、生地等15味中药材组方，具有滋肾、养肝、散风明目的功效，主治视物昏渺、蒙昧不清、视功能减退、青盲、内障、视网膜炎、玻璃体混浊、视神经萎缩等眼病，是该院临床应用多年的协定处方。为更好地控制其内在质量，确保临床疗效稳定可靠，本试验中采用高效液相色谱法测定了本品白芍中主要有效成分之一芍药苷的含量，为控制其质量提供科学依据，现报道如下。

1 仪器与试药

岛津2010AHT全自动高效液相色谱仪，紫外检测器，Class－vp工作站。芍药苷对照品(中国药品生物制品检验所)，批号为110736－200629，供含量测定用;批号为110736－200934，含量为95.7%;批号为110736 －200629，含量为 98.1%;批号为 110736 －201035，含量为96.5%);复光颗粒(吉林省四平市第二荣复军人医院提供);甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Zorbax－SB C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Apollo C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Shim －Pack VP －ODS C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－0.05 mol/L 磷酸二氢钾溶液(35∶65);检测波长:230 nm;进样量:10 μL。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2000，芍药苷峰与相邻峰之间的分离度大于1.5，分离度良好。高效液相色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含40 μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的内容物，研细，取约 2.0 g，精密称定，置 50 mL量瓶中，加0.1 mol/L盐酸溶液2 mL润湿，加水35 mL，摇匀，超声处理20 min，放冷，加水至刻度，摇匀，离心，取上清液，即得供试品溶液。取不含白芍的阴性样品，同法制得阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密称取芍药苷对照品10.42 mg(批号为110736－200629)，置 50 mL量瓶中，加甲醇溶解至刻度，制成每 1 mL 含 208.40 μg的溶液，作为对照品溶液Ⅰ;精密吸取 5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成每 1 mL 含 41.68 μg 的溶液，作为对照品溶液Ⅱ;分别取对照品溶液Ⅱ(2，5，10 μL)和对照品溶液Ⅰ(4，8，10，20 μL)注入液相色谱仪，记录峰面积值，以对照品进样量为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线。计算得回归方程 Y=1477.1 X－7577.6，r2=1(n=7)。结果表明，芍药苷进样量在 0.075 ～40 μg范围内与峰面积呈良好线性关系，符合外标法定量测定的要求。

精密度试验:取批号为20110119的样品，按含量测定正文方法制备供试品溶液，吸取10 μL，注入液相色谱仪，重复6次，测定其色谱峰面积值。结果的 RSD=0.08%(n=6)，表明方法具良好的精密度。

稳定性试验:取同一供试品溶液，按拟定的色谱条件于0，2，5，12，24 h 时进样测定。结果峰面积的 RSD=0.81%(n=5)，表明24 h内供试品溶液中芍药苷的含量基本稳定。

重复性试验:取样品(批号为050105)6份，每份约0.4 g，精密称定，照2.2项下方法制备供试品溶液，独立试验。结果含量的RSD=0.6%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20110119，含量为1.1254 mg/g)6份，分别精密加入0.2028 g/L的对照品溶液5 mL，依法测定，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

依法测定5批样品，结果见表2。可见，5批样品含量测定结果差异较大。根据2010年版《中国药典(一部)》白芍药材的含量测定限度按干燥品计算不低于1.6%和该处方中白芍的量，得出本品每袋含芍药苷全部转移时最低不得少于15.36 mg/袋，提取过程转移率按50%计算，制成颗粒时转移率为80%计算，结果为6.14 mg/袋，比较切合实际。样品中的3批白芍药材平均含量为2.9%，5批样品含量测定结果的最低值为8.38 mg/袋，考虑药材由于产地及采收时间的不同导致质量存在较大的差异，因此，暂订本品每袋含芍药苷(C23H28O11)总量不得少于4.0 mg。