绞股蓝50%乙醇部位调血脂及抗氧化作用研究

2012-07-28陈桂林乐智勇卢锟刚姜淋洁方念伯余尚工

中国药业 2012年15期

陈桂林，乐智勇，卢锟刚，姜淋洁，方念伯，余尚工

(湖北中医药大学中药资源与中药复方教育部重点实验室，湖北武汉 430065)

绞股蓝 Gynostemma pentaphyllum(Thrunb.)Mak(GP)为葫芦科绞股蓝属植物，始见于1525年(明嘉靖四年)朱棣《救荒本草》，全草入药，味苦、性甘寒、无毒，具有清热解毒、补气生津、祛痰止咳、安神固精的作用[1]。现代化学和药理研究表明[2]，绞股蓝主要药效成分为绞股蓝皂苷，具有降低血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL－C)、极低密度脂蛋白(VLDLC)，增加高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)，抗动脉粥样硬化(AS)作用等[3－4]。其调脂作用与抑制脂肪细胞产生游离脂肪酸及合成中性脂肪有关[5]，临床主要用于调节血脂代谢和抗AS。国内外广大学者对绞股蓝调血脂及抗氧化作用进行了大量研究，但多在总皂苷层面[3，6]，对有效药用部位的研究较少。本试验旨在研究绞股蓝的50%乙醇部位调血脂及抗氧化作用，为指导绞股蓝的临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 设备与材料

上海亚荣RE－6000型旋转蒸发仪、长沙湘平ES－500HA型动物称重天平、长沙平凡TG16－WS型台式高速离心机、菲恰尔TGC－16B型离心机，深圳雷杜RT－9600型半自动生化分析仪。SPF级雄性昆明小鼠，每只18～22 g，购自武汉生物制品研究所，许可证号为SCXK(鄂)2008－0003;饲养环境为室温(22±2)℃，相对湿度(55±5)%。高脂饲料由实验室按照如下方式配置:基础饲料78.8%，蛋黄粉10%，猪油10%，胆固醇1%，胆酸钠0.2%，拌匀，加水适量制成高脂饲料，烘干备用[7]。绞股蓝(批号为10111206，购自咸宁康进中药饮片有限责任公司)，辛伐他汀片(商品名舒降之，规格为20 mg/片×7片/盒，批号为100239，杭州默沙东制药有限公司)。总胆固醇测定试剂盒(TC)、甘油三脂测定试剂盒(TG)、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(HDL－C)均由上海名典生物工程有限公司提供;丙二醛测定试剂盒(MDA)、超氧化物歧化酶测定试剂盒(SOD)均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 提取

取绞股蓝，依次加10倍、10倍、8倍、8倍量水，沸后煎煮2 h，合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥后得黄棕色冻干粉总提物。将冻干粉用50%乙醇回流提取3次，过滤并合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥得到50%醇提部位冻干粉。

1.3 动物分组及给药

SPF级雄性昆明小鼠40只，适应性饲养3 d后，按体重随机分为4组，即正常对照组、高脂对照组、阳性对照组、绞股蓝50%乙醇部位组，每组10只。除正常对照组给予普通饲料外，其余各组给予高脂饲料喂养4周，测定空腹血脂水平，确认血脂症模型成功。正常对照组和高脂对照组以双蒸水灌胃，阳性对照组灌胃舒降之6.7 mg/(kg·d)，绞股蓝50%乙醇部位[相当于生药材5.44 g/(kg·d)]0.34 g/(kg·d)灌胃，连续给药 30 d。

1.4 生化指标

灌胃结束后，小鼠禁食不禁水12 h，然后眼球取血，离心分离血清;解剖采集肝、肾、脾等脏器称重，每块肝切下小片用生理盐水冲洗，再用滤纸吸干后，投入10%福尔马林液中固定作光镜检测用。血清及各脏器于－80℃冰箱保存，备用。将小鼠血清按照各试剂盒说明书规范操作，使用半自动生化分析仪检测TC，TG，HDL－C，SOD，MDA等生化指标，并根据公式计算出LDL－C，HDL－C/TC比值和动脉硬化指数(AI)值，(LDL－C)=TC－(HDL－C)－TG/2.2(mmol·L)，AI=[TC－(HDL－C)]/HDL－C。试验期间各组小鼠每天喂等量饲料，试验结束前对小鼠进行最后一次称重，解剖后称量肝、肾、脾脏器质量，按照公式脏器指数=脏器质量(g)/体重(g)×100%，得出小鼠肝脏、肾脏及脾脏指数。

1.5 统计分析

数据采用SPSS 16.0软件进行方差齐性、单因素方差分析(one－way－ANOVA)，组间比较用LSD法，试验结果均以表示，P＜0.05为具有统计学差异。

2 结果

2.1 对高脂血症小鼠体重及各脏器指数的影响

与空白组比较，模型组大鼠的体重、肝指数显著升高(P＜0.05);与模型组比较，绞股蓝50%乙醇部位能显著降低高脂模型的体重及肝指数(P＜0.05)，但对高脂模型小鼠的肾指数和脾指数均无显著性影响(P＞0.05)。结果见表1，对脏器系数趋势影响见图1。

表1 对高脂血症小鼠体重及各脏器指数的影响(n=10，)

注:与模型组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01，下表同。

组别空白组模型组阳性组50%乙醇组体重(g)41.18 ± 1.64△43.32 ± 3.6040.48 ± 1.26△40.19 ± 2.41△肝指数(%)4.05 ± 0.39▲5.22 ± 0.564.22 ± 0.24▲4.67 ± 0.35△肾指数(%)1.31 ± 0.121.24 ± 0.201.35 ± 0.08△1.30 ± 0.09脾指数(%)0.39 ± 0.060.32 ± 0.130.30 ± 0.050.37 ± 0.08

图1 不同给药组对小鼠肝、肾、脾系数的影响

2.2 对高脂血症小鼠血脂的影响

与空白组相比，模型组的TC，TG，LDL－C显著升高，HDLC显著降低(P＜0.01)，说明模型建立成功。与模型组相比，绞股蓝50%乙醇部位组小鼠的 TC，TG，LDL－C显著降低，HDL－C有显著升高(P＜0.01)。结果见表2。

表2 对高脂血症大鼠血脂的影响(mmol/L，n=10，)

组别空白组模型组阳性组50%乙醇组TC 3.87 ± 0.17▲9.30 ± 1.414.69 ± 0.87▲5.85 ± 0.58▲TG 0.67 ± 0.06▲1.21 ± 0.120.69 ± 0.09▲0.98 ± 0.06▲HDL－C 3.31 ± 0.14△2.63 ± 0.463.50 ± 0.32▲3.47 ± 0.55▲LDL－C 0.25 ± 0.06▲6.12 ± 1.250.88 ± 0.10▲2.01 ± 0.91▲

2.3 对高脂血症小鼠动脉硬化指数及抗氧化能力的影响

与空白组比较，模型组的HDL－C/TC比值、SOD显著降低，而AI和MDA显著升高(P＜0.01)。与模型组比较，绞股蓝50%乙醇部位能显著降低MDA和AI，显著升高SOD和HDL－C/TC比值(P ＜0.05或 P ＜0.01)。结果见表 3。

表3 对高脂血症小鼠动脉硬化指数(AI)及抗氧化能力的影响(n=10，)

组别空白组模型组阳性组50%乙醇组SOD(U/mL)125.71 ± 7.68▲84.16 ± 5.05120.13 ± 7.80▲104.03 ± 5.91▲MDA(nmol/mL)13.72 ± 1.73▲18.25 ± 1.4013.21 ± 1.57▲16.22 ± 2.15△HDL－C/TC 0.85 ±0.07▲0.28 ± 0.030.75 ±0.06▲0.59 ± 0.12▲AI 0.17 ±0.03▲2.53 ±0.630.34 ±0.05▲0.76 ±0.34▲

2.4 对高脂血症小鼠肝脏组织病理学的影响

试验结束后，肉眼观察各组肝脏结构发现:正常组肝脏体积较小，颜色鲜红，被膜光滑，切面光洁;模型组肝脏均呈现不同程度的脂肪浸润(大部分肝脏外观呈现黄白色，切面油腻)，且较正常小鼠的肝脏肥大;阳性组及50%乙醇部位给药组的肝脏形态均不同程度地接近正常组。病理切片显示，正常组肝脏组织肝小叶结构清析，肝细胞正常，无肿胀和脂肪变性、坏死，无炎细胞浸润，胞浆内未见脂滴;模型组肝小叶结构紊乱，肝细胞体积明显肿大以及严重脂肪变性，局部区域细胞发生灶状坏死，脂肪空泡占据大部分胞浆，肝细胞核被脂滴挤向细胞一侧，胞浆脂滴大量出现且严重聚积;阳性组与模型组相比肝小叶结构基本恢复正常，脂肪空泡明显减少;与模型组相比，50%乙醇部位组肝细胞的脂肪体积均有不同程度的减少，肝细胞也有不同程度的恢复;但肝细胞轻度大泡性脂肪病变，呈带状分布，偶见点状坏死。

3 讨论

血脂代谢紊乱是动脉粥样硬化主要病因，可导致心脑血管疾病。高脂血症中医通常以痰浊、血瘀辨证论治。试验用绞股蓝味苦、微甘，性寒，具有清热解毒、祛除痰浊的功效[8]，从中医理论上讲可用于防治高脂血症。迄今发现的绞股蓝皂苷已达136种[9]。药理研究证明，绞股蓝含有83种与人参皂苷有类似骨架的达玛烷型皂苷，有抗炎、降低胆固醇、降血糖和免疫调节等多方面的生物活性和药理作用，具有降低TC，TG，LDL－C和升高HDL－C功效。绞股蓝通过调节脂肪代谢有减肥作用，无泻下副作用，不影响食欲[10]。大量临床资料证实其调脂功效[11－13]，但对其发挥调血脂和抗氧化作用的有效部位研究较少。本研究通过高脂饲料建立高脂血症小鼠模型，观察绞股蓝50%乙醇部位调血脂和抗氧化作用，为绞股蓝的临床应用提供依据。

高脂饮食可以导致高脂血症和肝脏脂代谢紊乱[14]。高脂饲料喂养30 d后，模型组血脂水平TC、TG、LDL－C显著性上升，HDL－C显著降低，表明高脂血症模型复制成功。在每天喂养高脂饲料并同时给药30 d后，绞股蓝50%乙醇部位给药组能明显降低高脂血症小鼠的体重，明显降低高脂血症小鼠TC，TG，LDL－C的含量，提高HDL－C水平，表明绞股蓝50%乙醇部位对高脂血症有较好的治疗作用。

脂类代谢与心血管疾病密切相关，高血脂则是引发动脉粥样硬化(AS)的主要原因之一，特别是TC及LDL－C水平增高是危险指标。血脂浓度的高低除机体代谢，特别是内分泌系统的调控外，外源性物质的影响也是很重要的一个方面;研究表明HDLC的升高可抗阻动脉粥样硬化的形成，因此可改善脂质代谢。临床上以降低LDL－C和升高HDL－C水平为治疗高脂血症的主要目标。MDA的含量常常可反映机体内过氧化的程度，间接地反映出血管老化的程度;在生理状态下，人体也有自由基的产生，但体内存在的抗氧化酶系统能清除之，不致于引起组织细胞出现过氧化导致损伤，SOD是抗氧化酶系统的主要代表，它是自由基的清除剂，可抑制黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶，从而抑制过氧化脂质反应，减少自由基和MDA的产生[15]。绞股蓝50%乙醇部位给药组给药30 d后能显著降低高脂血症小鼠TC，TG，LDLC的含量，提高HDL－C水平，并能明显提高SOD活力和降低MDA含量，提示该药具有预防动脉粥样硬化和抗氧化的作用。绞股蓝和辛伐他汀一样具有一定治疗高胆固醇饵料饲养导致的血脂升高、预防动物发生动脉粥样硬化的作用[16]，说明绞股蓝调节血脂代谢和抑制动脉粥样硬化的疗效得到进一步验证，为开发新的调脂药提供依据。

由上可知，绞股蓝50%乙醇部位部位有较好的调血脂及抗氧化作用。同时，本试验室还将对其相关成分深入研究，进一步为指导临床提供依据。

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