乳酸基葛根素衍生物生物活性初步研究＊

陈立书 ，刘应杰 ，曲中堂 ，谭 韬 ，张亚红 ，侯长军 ，兰作平 ，3

(1.重庆医药高等专科学校，重庆 400030; 2.重庆大学生物工程学院，重庆 400030;3.重庆医科大学药学院，重庆 400016)

葛根素(puerarin)是从豆科植物中野葛 Pueraria lobata、甘葛藤 Pueraria thomsonii根中提取的一种黄酮苷，化学名为8－β－D－吡喃葡萄糖－4’，7－二羟基异黄酮，分子式是C21H20O9。动物试验及临床研究表明，葛根素对心血管系统、平滑肌、机体体温均有重要作用[1－7]，但其水溶性和脂溶性均较差，在水中的溶解度仅为4.6 g/L，故生物利用度较低，这就限制了其生物活性的发挥和临床应用。近年来，国内外研究人员合成了葛根素的衍生物，以期改善葛根素的生物活性[8－14]。本研究中以葛根素为对照，对乳酸基葛根素衍生物进行了生物活性初步研究[15]，现报道如下。

1 仪器与材料、动物

RM6240B型生理记录仪(成都仪器厂);血流变仪(济南格利特科技有限公司);SPSS 15.0统计软件。盐酸普萘洛尔片(河南天方药业股份有限公司，批号为100102);葛根素原料药(成都双流应天化工厂，批号为100603，含量为99%);乳酸基葛根素衍生物(重庆大学生物工程学院，批号为090116，经高效液相色谱法测定含量均在95%以上);愈风宁心片(北京同仁堂股份有限公司批号为100105)。

SD大鼠40只，SPF级，体重(200±10)g，雌雄各半;KM种小鼠80只，SPF级，雌雄各半，体重18～20 g(购买后在试验室常规饲养1周，以适应环境)，两种动物均由重庆医科大学实验动物中心提供，许可证号为 SCXY(渝)2007－0001，SYXK(渝)2007－0001。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

试验前，取葛根素原料药，加灭菌蒸馏水配制成一定质量浓度的葛根素溶液;取乳酸基葛根素衍生物，加灭菌蒸馏水配制成一定质量浓度的葛根素衍生物溶液，备用;取盐酸普萘洛尔片，碾细，加灭菌蒸馏水配制成一定质量浓度的盐酸普萘洛尔溶液，备用;取愈风宁心片，研磨成粉末并加适量蒸馏水溶解过滤配制成一定质量浓度的溶液，备用。

2.2 抗心肌缺血作用

选取SPF级SD大鼠40只，体重(200±10)g，雌雄各半，依体重和性别均分成4组，分别为正常动物组、愈风宁心阳性对照组、葛根素溶液组和衍生物溶液组。正常动物组给予蒸馏水20 mL/kg灌胃，愈风宁心阳性对照组每千克体重灌胃给予相当于含10 mg葛根素的愈风宁心溶液，葛根素溶液组每千克体重灌胃给予相当于含400 mg葛根素的葛根素溶液，衍生物溶液组每千克体重灌胃给予相当于含510 mg葛根素衍生物的溶液，连续给药5 d。于第6天给药1 h后，再用30%的戊巴比妥钠按40 mg/kg腹腔注射麻醉后，连接Ⅱ导联电极，先描记各组正常心电图，待稳定后，于尾静脉注入脑垂体后叶素(1 μg/kg)，立即记录心电图，连续描记34 min。计算给药前后T波变化值，并对各组变化值进行统计学分析，结果见表1。结果显示，在尾静脉注射垂体后叶素 0.25，0.5，2，5 min 后，阳性对照组、葛根素溶液组、衍生物溶液组的T波幅度与正常动物组比较，均有显著性差异(P＜0.05)。说明在本试验剂量下，葛根素、葛根素衍生物能明显对抗垂体后叶素所致的大鼠心肌缺血，其中葛根素衍生物作用更显著。

表1 抗垂体后叶素致大鼠心肌缺血T波变化试验结果(n=10)

2.3 抗心律失常作用

取KM种小鼠80只，按体重及性别随机将其分成4组，每组20只，雌雄各半。正常动物组给予蒸馏水10 mL/kg灌胃，盐酸普萘洛尔阳性对照组每千克体重给予含250 mg盐酸普萘洛尔的溶液灌胃，葛根素组每千克体重给予相当于含500 mg葛根素的葛根素溶液灌胃，衍生物组每千克体重给予相当于含650 mg乳酸基葛根素的衍生物溶液灌胃。各组动物预先连续灌胃4 d，并于第5天灌胃1h后，将小鼠放入倒扣的含4mL氯仿棉球的500mL烧杯中，待小鼠呼吸停止后，立即打开胸腔检查心室纤颤阳性率。结果正常动物组心室纤颤阳性17只(85.00%)，阳性对照组9只(45.00%)，葛根素组10只(50.00%)，衍生物组7只(35.00%)，显示葛根素及其衍生物均能明显对抗氯仿所致的小鼠心律失常，降低小鼠心室纤颤的发生率，其中以葛根素衍生物的作用更显著(P ＜0.01)。

2.4 对高脂血症大鼠血液流变学的影响

取SD大鼠40只，按体重及性别随机分成5组，每组8只，雌雄各半。空白对照组给予蒸馏水20 mL/kg灌胃，模型组给予蒸馏水20 mL/kg灌胃，愈风宁心阳性对照组每千克体重给予含200 mg葛根素的愈风宁心溶液灌胃，葛根素组每千克体重给予相当于含400 mg葛根素的葛根素溶液灌胃，衍生物组每千克体重给予相当于含510 mg乳酸基葛根素的溶液。各组动物连续灌胃5 d，除空白对照组外，其他组于第4天给药1 h后，给予肾上腺素每100 g体重0.08 mL皮下注射。4 h后再注射1次，在两次注射肾上腺素期间的中间时间点，将大鼠用冷水浸湿，在4℃冰箱中放置10 min，处置后禁食，次晨给药1 h后取血检测，分别考察全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度等12项指标。结果见表2，表明葛根素和衍生物均能显著改善急性高脂血症大鼠血液流变学相关指标，葛根素衍生物的作用更明显(P＜0.05)。

表2 葛根素及衍生物对高脂血症SD大鼠血液流变学的影响(n=8)

3 讨论

国内外大量的研究表明，葛根素具有多种药理活性，且具有毒性小、代谢快的优点。但其分子结构属于异黄酮类，使得葛根素的水溶性和脂溶性均较差，生物利用度不理想，制约了临床应用，因此必须对其加以结构修饰。在目前报道的葛根素衍生物中，大部分的生物活性仍不理想，临床应用前景不被看好。

基于葛根素衍生物乳酸基葛根素的生物活性试验，本试验进一步证实了其生物活性比葛根素有了一定程度的改善，达到了提高生物利用度、增强药理活性的目的，同时本试验也为今后的制剂开发以及临床应用提供了一定的理论基础和数据支持，提示该衍生物极具临床药用开发价值。

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