筋骨草初提物调血脂作用研究＊

蔡晓明，刘 云，母 波，曾 梅，杨俊宝，申跃武，陈保锋，梁素华

(川北医学院基础医学院，四川 南充 637007)

高血脂会诱发心脑血管疾病，加重糖尿病、脂肪肝、肾病综合征等的发生和发展，对人体的健康非常有害。筋骨草 Ajuga decumbens Thunb.为唇形目唇形科植物，资源丰富，全草均可入药，性寒、味苦，具有止咳化痰、清热凉血、解毒消肿、止痢的功效，主要用于治疗上呼吸道感染引起的急慢性咽炎、支气管炎、扁桃体炎以及肺炎、痢疾、咳血、疗疮、痈肿、跌打损伤等症。筋骨草还有调血脂、降血糖、降血压、收缩血管、促进红细胞生成、抗HIV、利胆、抑菌、抗肿瘤、强心等药理作用。本试验中研究筋骨草初提液对小鼠调血脂作用效果，为开发筋骨草提供可靠的试验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

四川产筋骨草，将其茎、叶清洗干净，分别用水提法和醇提法抽取初提物;胆固醇为成都科龙化工试剂厂生化产品。

1.2 试验方法

取筋骨草的茎、叶样品，洗净、切碎后，煎煮2次，各30 min，浓缩制水提液备用。取筋骨草样品，将茎、叶洗净，粉碎、匀浆后，加无水乙醇4℃放置过夜，以3000 r/min的速度离心10 min，弃渣，取上清液浓缩，于4℃低温保存备用。

高血脂小鼠模型用基础饲料加5%胆固醇、2%猪油建立。模型建立5周后，检测不同提取方法、不同给药方法、给药时间长短的调血脂作用。小鼠静脉血用摘眼取血法获取，每组试验对照、高血脂昆明小鼠雌雄各4只，作好标签，于川北医学院附属医院检验科检测血清血脂指标，检测数据由SAS软件作方差分析。

1.3 高血脂小鼠模型的建立

取川北医学院试验动物中心5周龄昆明小鼠，雌雄各50只，其中雌雄各10只作空白对照，另雌雄各40只作建模，空白对照用普通饲料喂养，建模小鼠用高脂饲料喂养。建模小鼠与空白对照小鼠血脂检验指标见表1。可见，建模小鼠血脂水平与空白对照相比达到极显著或显著差异水平，说明高血脂模型建立成功。

表1 高血脂小鼠及空白对照血脂平均指标(mmol/L)

2 结果与分析

2.1 不同提取方法初提物调血脂作用

取筋骨草的茎、叶样品3 kg清洗干净，切碎后煎煮2次各30 min，浓缩至水提液5000 mL。取筋骨草样品3 kg，将茎、叶清洗干净，粉碎、匀浆后，加无水乙醇4℃放置过夜，3000 r/min离心10 min，弃渣，取上清液浓缩至5000 mL，于4℃低温保存。分别将两种初提液拌入小鼠常规饲料中，喂养模型小鼠，10 d后检测两种初提液调血脂效果。结果见表2。可见，水提液调总胆固醇效果比醇提液好，差异有显著性，而雌雄小鼠间无明显差异;调甘油三酯效果水提液与醇提液、雌雄小鼠间均无明显差异;调高密度脂蛋白效果水提液与醇提液无明显差异、而雌雄小鼠间达显著差异水平;调低密度脂蛋白效果水提液与醇提液、雌雄小鼠间均无显著差异;调极低密度脂蛋白效果水提液与醇提液无差异，雌雄小鼠间达显著差异水平。调总胆固醇效果水提液与醇提液达显著差异水平，水提液效果较好，可能是两种提取方法初提液中成分差异的结果。调高密度脂蛋白与极低密度脂蛋白效果雌雄小鼠间达显著差异水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，极低密度脂蛋白雌鼠含量高，可能是由于两种提取方法初提液成分差异与雌雄鼠基因差异相互作用的结果。

表2 不同提取方法初提液调血脂作用效果(mmol/L)

2.2 初提物不同给药方法调血脂作用效果

取筋骨草的茎、叶样品5kg清水洗净，切碎后煎煮2次各30 min，浓缩至水提液8000 mL。将浓缩液分成2份各4000 mL，其中用于拌料的直接将4000 mL浓缩液拌入常规饲料中，用于灌胃的4000 mL用烘干法浓缩至2000 mL，每天早、晚由熟练饲养员对小鼠各灌胃1 mL，10 d后检测两种初提液调血脂效果。结果见表3。可见，调总胆固醇效果拌料组与灌胃组、雌雄小鼠间均无明显差异;调甘油三酯效果拌料组与灌胃组、雌雄小鼠间均无明显差异;调高密度脂蛋白效果拌料组与灌胃组无显著差异，但雌雄小鼠间达极显著差异水平;调低密度脂蛋白效果拌料组与灌胃组达显著差异水平，雌雄小鼠间无明显差异。调极低密度脂蛋白效果拌料组与灌胃组、雌雄小鼠间均无明显差异。不同给药方法试验表明，调低密度脂蛋白效果拌料组与灌胃组达到显著差异水平，拌料组效果较好，可能是由于拌料组小鼠摄取药物量比灌胃组小鼠多的结果。调高密度脂蛋白效果雌雄小鼠间达极显著差异水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，可能是由于两种给药方法小鼠药物摄食量差异与雌雄鼠基因差异相互作用的结果。

表3 不同给药方法调血脂作用效果(mmol/L)

2.3 初提物给药时间长短调血脂作用效果

取筋骨草的茎、叶样品5 kg清水洗净，切碎后煎煮2次各30 min，浓缩至水提液8000 mL。全部将初提液拌入小鼠常规饲料中，喂养模型小鼠，给料3 d、10 d后检测两种给药时间调血脂效果。结果见表4。可见，调总胆固醇效果3 d组与10 d组未达显著差异水平，而雌雄小鼠间达极显著差异水平;调甘油三酯效果3 d组与10 d组未达显著差异水平，而雌雄小鼠间达显著差异水平;调高密度脂蛋白效果3 d组与10 d组无明显差异，而雌雄小鼠间达极显著差异水平;调低密度脂蛋白效果3 d组与10 d组达极显著差异水平，而雌雄小鼠间无显著差异;调极低密度脂蛋白效果3 d组与10 d组达显著差异水平、而雌雄小鼠间未达显著差异水平。给药时间试验表明，给药时间长短影响调血脂作用效果。3 d组与10 d组调低密度脂蛋白达极显著差异、调极低密度脂蛋白效果达显著差异水平，说明初提物调血脂作用有一个药效过程，10 d左右血脂可达正常水平。调总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白效果，雌雄鼠间达显著或极显著差异水平，可能是药效时间与雌雄鼠基因差异相互作用的结果。

3 讨论

高血脂小鼠模型建立试验表明，总胆固醇高14.83%，低密度脂蛋白建模小鼠平均1.31 mmol/L，比空白对照高523.81%，达极显著差异水平，说明高血脂模型建立成功。在高血脂小鼠建模过程中发现，随着建模时间的延长，高血脂小鼠的皮毛逐渐蓬松、暗淡。取高血脂小鼠肝脏观察，其肝叶及肝脏表面发白，而空白对照小鼠肝叶及肝脏表面色泽鲜红，表明建模小鼠效果明显。

表4 不同给药时间长短调血脂作用效果(mmol/L)

水提法与醇提法初提液调高血脂试验表明，调高血脂效果两种方法差异不大，但调总胆固醇水提液效果略好，可能是两种提取方法初提液中成分有差异的结果。调高密度脂蛋白与极低密度脂蛋白效果雌雄小鼠间达显著差异水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，极低密度脂蛋白雌鼠含量高，可能是由于两种提取方法初提液成分差异与雌雄鼠基因差异相互作用的结果。不同给药方法试验表明，调低密度脂蛋白效果拌料组与灌胃组达到显著差异水平，拌料组效果较好，可能是由于拌料组小鼠摄取药物量比灌胃组小鼠多的结果。调高密度脂蛋白效果雌雄小鼠间达极显著差异水平，高密度脂蛋白雄鼠含量高，可能是由于两种给药方法小鼠药物摄食量差异与雌雄鼠基因差异相互作用的结果。以上试验表明，筋骨草初提液确有调血脂作用效果，但其调血脂作用药效成分目前尚不清楚。大量研究发现，筋骨草含有二萜、环烯醚萜、甾酮、筋骨草内酯、筋骨草糖、黄酮苷、皂苷、生物碱、有机酸、酚性化合物、鞣质、木犀草素等[1－3]，其中甾酮、黄酮苷、皂苷等可能会有调血脂效果，需要进一步深入研究。

给药时间试验表明，给药时间长短影响调血脂作用效果。3 d组与10 d组调低密度脂蛋白达极显著差异、调极低密度脂蛋白效果达显著差异水平，说明初提物调血脂作用有一个药效过程，给药10 d左右血脂可达正常水平。调总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白效果，雌雄鼠间达显著或极显著差异水平，可能是药效时间与雌雄鼠基因差异相互作用的结果。高血脂在体内形成及其降解比较复杂，涉及过氧化物增殖物激活受体(PPAR)调节脂肪生成及脂代谢、固醇调节元件结合蛋白(SREBP)脂肪细胞决定和分化因子、脂肪酸合成酶(FAS)、激素敏感脂酶(HSL)、C反应蛋白(CRP)、血管紧张素转换酶(ACE)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、载脂蛋白(APO)等多种调控过程[4－6]。本试验证明，筋骨草初提液具有调血脂效果，但其调控机制尚需进一步深入研究。

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