紫外分光光度法测定维A酸软膏的含量

吴 畏，陈 雅，杨 征，曾 桥

(中国人民解放军第三军医大学大坪医院药剂科，重庆 400042)

维A酸软膏为医院自制制剂，可减少皮脂腺分泌，溶解毛囊角质栓，并具有抗炎和促进抗真菌药物吸收的作用，用于治疗各种类型的扁平苔藓、毛囊角化病、痤疮以及其他角化异常类皮肤病，疗效显著，应用广泛[1]。目前，其含量测定大多采用较烦琐的高效液相色谱法[2－3]，极少数采用薄层扫描法[4]。本试验建立紫外分光光度法测定维A酸软膏的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器厂);硅胶板GF254(青岛海洋化工厂，批号为20100317);ZF－I型三用紫外分析仪(上海顾材电光仪器厂);分度吸量管A级(三庆玻璃仪器厂);单标线棕色容量瓶A级(北京玻璃仪器厂);Sartorius－BS 124 S型电子天平(德国赛多利斯);DU－800型分光光度仪(美国贝克曼)。维A酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为00307－200201);维A酸(东北制药集团股份有限公司，批号为20101107);液体石蜡药用级(吉林市吉化江城油脂化工有限责任公司，批号为100904);凡士林药用级(包头昆仑石化有限责任公司，批号为090714);0.1%维A酸软膏(医院自制制剂，批号分别为110627，110722，110818);环己烷(国药集团化学试剂有限公司，批号为T20080521);乙醚(扬州三和化工有限公司，批号为20080304);丙酮(重庆川东化工有限公司化学试剂厂，批号为20100901);冰醋酸(重庆茂业化学试剂有限公司，批号为 20100602);甲醇(成都科龙化工试剂厂，批号为20110108)。

2 方法与结果

2.1 制备

取维A酸1 g，加液体石蜡1 mL研磨成极细糊状，再分次加入凡士林研匀，至1000 g，得淡黄色软膏。

2.2 鉴别[5]

取本品适量(相当于维A酸1.25 mg)，加25 mL甲醇，微温，充分搅拌使维A酸溶解，放冷至室温，倾出甲醇液，置水浴上蒸发至约剩5 mL，作为供试品溶液。另取维A酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.25 mg的溶液作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷－乙醚－丙酮－冰醋酸(54∶40∶4∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(254 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.3 含量测定

2.3.1 溶液制备

精密称取维A酸对照品0.0010 g，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解后定容，再精密量取1 mL溶液用甲醇稀释至25 mL得到质量浓度为4μg/mL的溶液，作为对照品溶液，待用。另取维A酸软膏样品适量(相当于维A酸1.25 mg)，加入25 mL甲醇，微温，充分搅拌使维A酸溶解，放冷至室温，倾出甲醇溶液，吸取1 mL，置25 mL棕色容量瓶中甲醇定容，作为供试品溶液待用。另照0.1%维A酸软膏处方比例称取凡士林1.4577 g，液体石蜡0.0262 g加入10 mL甲醇，微温溶解后加入甲醇定容至50 mL，冷却至室温，过滤后作为空白基质溶液待用。

2.3.2 检测波长确定

以甲醇作空白，分别将2.3.1项下3种溶液在200～500 nm波长范围内扫描，光谱图见图1。可见，对照品溶液和供试品溶液在338 nm波长处有最大吸收，空白基质溶液在此波长处几乎无吸收，对样品中维A酸的含量测定基本无干扰，因此将338 nm作为检测波长。

图1 紫外吸收光谱图

2.3.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密称定维A酸对照品0.0010 g，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，再用5 mL移液管准确吸取5 mL溶液，置50 mL棕色容量瓶中用甲醇稀释至刻度即得到质量浓度为10μg/mL的对照品贮备液。将上述贮备液用同一吸量管(10 mL)分别吸取 1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，甲醇定容，摇匀即得到质量浓度分别为 1.5，2.5，3.5，4.5，5.5μg/mL的标准溶液。以甲醇作为空白，分别将上述标准溶液由低质量浓度到高质量浓度在338 nm波长处测定吸光度，以338 nm处吸光度(A)与质量浓度(C)进行线性回归，得回归方程 C=6.7033 A+0.0411，r=0.9999(n=5)。结果表明，维 A 酸质量浓度在 1.5 ～5.5μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验:精密量取同一对照品贮备液(10μg/mL)2.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，在338 nm波长处测定吸光度。结果RSD 为 0.37%(n=5)。

稳定性试验:称取0.1%维A酸软膏约0.12 g，置25 mL烧杯中，加入10 mL甲醇，微温溶解，滤纸过滤，重复溶解过滤过程2次，合并滤液于50 mL棕色容量瓶中，甲醇定容后室温放置，在338 nm波长处，分别于 0，1，2，3，4 h 时测定吸光度。结果的 RSD 为0.73%(n=5)，表明供试品溶液在4 h内稳定。

加样回收试验:按照0.1%维A酸软膏处方比例，精密称取维A酸原料0.9 mg和软膏基质(凡士林 0.4577 g、液体石蜡0.0262 g)，模拟处方于25 mL烧杯中配制成软膏样品。向样品中加入10 mL甲醇，微温溶解后用滤纸过滤，重复上述操作2次，滤液合并于50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至50 mL，摇匀即得到维A酸质量浓度为18μg/mL的供试品溶液。精密量取1，2，3 mL供试品溶液各3份，置10 mL棕色容量瓶中，甲醇定容后在338 nm波长处测定吸光度，将吸光度代入回归方程计算含量。结果见表1。

表1 维A酸软膏加样回收试验结果(n=9)

2.3.4 样品含量测定

取 3 个批次的样品，精密称定样品 0.1501，0.1504，0.1503 g，分成3组，分别置25 mL烧杯中，加入10 mL甲醇，微温溶解，滤纸过滤，重复上述操作，合并滤液，置50 mL棕色容量瓶中，甲醇定容，在338 nm波长处测定吸光度，结果含量分别为标示量的98.52%，99.02% ，98.12%。

3 讨论

采用紫外分光光度法测定维A酸软膏的含量，操作简便、快速，结果准确可靠、重复性好，所用仪器普及。与高效液相色谱法相比，虽不及其选择性和准确性高，但操作简便、快速，不需特殊试剂，具有省时、省力、经济实效等优点，适用于医院制剂的快速检验。

维A酸结构为全反式维A酸，有5个共轭双键，易氧化或者光解，因此在整个操作过程取样要快，且应该严格避光。维A酸对光不稳定，在不避光条件下，1 h含量下降13%，若置棕色瓶中则为3.5%，置棕色瓶中且外罩黑布时6 h内稳定[6－7]。本试验中经考察也发现，维A酸软膏的甲醇溶液置棕色瓶中室温下放置，4 h内吸光度值基本无变化，不影响其测定。

维A酸在甲醇、氯仿中微溶，在水中几乎不溶，在异丙醇中溶解较好。因此在配制供试品溶液时，可以先用异丙醇溶解后再用甲醇稀释至定量，或用甲醇溶解时加用超声波加速溶解。

[1]鲁建云，秦桂芝，李 锁，等.异维A酸红霉素凝胶治疗痤疮的疗效观察[J].中国药房，2011，22(2):155－157.

[2]程辉跃.高效液相色谱法同时测定维A酸霜中两组分的含量[J].中国药房，2004，15(5):306－307.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:893.

[4]姜义娜，于香安，于 丽.薄层扫描法测定复方软膏中维A酸的含量[J].中国医院药学杂志，2003，23(2):84－86.

[5]中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范(2002年版)[M].北京:人民军医出版社，2002:166.

[6]盛俊泰，谭会洁，魏开芳.HPLC法测定维A酸乳膏中维A酸及异维A酸的含量[J].食品与药品，2005，7(7A):55－57.

[7]李会轻，庞 靖.醋酸去炎舒松维甲酸乳膏的质量标准研究[J].中国药业，2007，16(22):28－29.