HPLC法测定穿心莲滴丸中脱水穿心莲内酯的溶出度

宋 英， 陆静冉， 沈 鸣， 王建新*

(1.复旦大学药学院上海201203，2.上海开拓者医药发展有限公司上海201203，3.上海工程技术大学化学化工学院制药工程专业上海201620)

穿心莲Androyraphis paniculata，具有清热解毒、泻火燥湿、消痈排脓等功能，性寒，味苦［1-2］。目前常用剂型为穿心莲片剂，被收载于《中国药典》并广泛应用于临床［3-4］。然而，由于穿心莲中的主要活性成分穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯［5］等成分的水溶性均较低，导致从片剂中的溶出速度慢、生物利用度低，影响了疗效的发挥。针对这个问题，本实验采用固体分散体技术制备了穿心莲提取物的滴丸剂，以提高其中脂溶性的穿心莲内酯类成分的溶解度和溶出速率，提高生物利用度，缩短起效时间。同时，通过建立有效成分溶出度的测定方法，更有效地控制穿心莲制剂的质量。

1 仪器与试药

RC-8D智能溶出试验仪(天津博宇通达仪器有限公司);LC-10A型高效液相色谱仪(日本导津公司);BS 224S电子天平(德国塞多利斯公司);DWJ-A型滴丸机(天津市弗兰德医药科技发展有限公司);对照品脱水穿心莲内酯(中国药品生物制品检定所，批号:20070425);穿心莲滴丸(自制，批号:20080922，20080925和20080930)，市售穿心莲片(上海雷允上药业有限公司，批号:20080621);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱法测定脱水穿心莲内酯 参考文献［4］，建立了HPLC法测定溶出介质中脱水穿心莲内酯的方法。

2.1.1 色谱条件的确定［6］shimpack VP-ODS C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);测定波长254 nm;柱温 25 ℃;进样量20 μL;流动相比例见表1。

表1 流动相比例

2.1.2 标准曲线的绘制 取脱水穿心莲内酯对照品约15 mg，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇溶液45 mL，超声溶解并加甲醇稀释至刻度，作为对照品贮备液。依次精密量取上述贮备液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL，置10 mL 棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。依次精密吸取各对照品稀释溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积，绘制标准曲线。结果表明，在6.056～121.12 μg/mL范围内，脱水穿心莲内酯的进样量(Y，μg)与峰面积(X)具有良好的线性关系，线性方程为:Y= －6.4614×10－2+6.2030×10－4X，r=0.9999。

2.1.3 样品的回收率 采用加样回收法，精密吸取已知含有量的供试品溶液适量于25 mL棕色量瓶中，共6份，分别加入脱水穿心莲内酯对照品贮备溶液适量，溶出介质定容，测定脱水穿心莲内酯，得平均回收率为101.23%，RSD为1.48%。

2.1.4 精密度试验 取上述2.1.2项下的质量浓度为60.56 μg/mL 对照品溶液，注入液相色谱仪 20 μL，记录色谱图，共平行测定6次，计算峰面积，结果显示:RSD为1.04%，表明精密度良好。

2.1.5 重复性试现 取6份溶出试验供试样品，分别进样测定，计算峰面积。结果表明6次测定结果的 RSD为0.57%，表明测定方法的重复性良好。

2.1.6 样品溶液稳定性试验 取溶出试验供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h 进样测定，结果显示 RSD 为1.69%，表明样品溶液室温放置12 h的稳定性良好。

2.1.7 空白干扰实验 按供试品的处方进行空白滴丸的制备，按2.1.7项下方法进行处理，测定，结果表明辅料对脱水穿心莲内酯的测定无干扰。

2.1.8 溶出样品溶液的测定 依次在各个时间点取溶出液2 mL，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃初滤液，取续滤液，注入液相色谱仪，每次20 μL，记录色谱图，计算各时间点的累积溶出百分率。

2.2 溶出度测定 采用《中国药典》2010年版二部附录X C溶出度测定第一法进行穿心莲滴丸溶出度的测定［7］。分别量取新鲜制备并经脱气处理的溶出介质900 mL加入各溶出杯中，控制溶出介质温度为(37±0.5)℃。取供试品6份(各18粒)，分别投入6个溶出杯内，立即开始搅拌并计时，转速100 r/min。在不同的时间点分别取样2 mL，同时补充等量等温溶液。样品溶液按2.1.8项下方法进行处理，制得供试品溶液。另取自制的滴丸样品20丸，研细，取约0.1 g，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇溶液约20 mL，超声15 min，使之溶解，取出放冷，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，弃初滤液，取续滤液20 μL进样测定，记录色谱图，计算峰面积，求得滴丸中脱水穿心莲内酯的含有量，以此为基数计算各时间点的累积溶出百分率。

2.2.1 溶出介质［8-9］的选择 分别考察了以pH6.8磷酸盐缓冲液、人工胃液、人工肠液为溶出介质时脱水穿心莲内酯的溶出情况，结果见表2。

表2 不同溶出介质中脱水穿心莲内酯的溶出百分率(n=6)

结果显示，在考察的3种溶出介质中，脱水穿心莲内酯在人工胃液中的溶出最快。考虑到口服给药后，滴丸在胃中的停留时间约为2 h，即主要在胃液中崩解溶出，故选择人工胃液为溶出介质，以更好的模拟体内药物溶出的过程。

2.2.2 累积溶出试验与曲线 分别取3批穿心莲滴丸样品(批号分别为20080922、20080925和20080930)，以人工胃液900 mL为溶剂，依上述方法操作，测定脱水穿心莲内酯的溶出度。分别于3、5、10、15、20、30 min 各取2 mL 样品溶液(同时补充等量等温溶出介质)，弃初滤液，取续滤液，注入液相色谱仪，每次20 μL，记录色谱图，计算各个时间点的累积溶出百分率，结果见表3。

表3 3批滴丸样品的溶出试验结果(n=6)

分别以零级释放、一级释放、Higuchi方程对表3中3批样品的累积溶出百分率的平均值进行拟合，得到3个不同方程释药曲线的相关系数 r分别为0.7948，0.8643，0.8767。以Higuchi方程拟合得到的相关系数最好。从表3溶出数据也可以看出，脱水穿心莲内酯从滴丸中的溶出很快，10 min后样品的溶出百分率就超过80%，且3批样品的结果重现性良好。

2.2.3 穿心莲自制滴丸和市售穿心莲片的溶出度比较 分别取批号为20080925的穿心莲滴丸和批号为20080621穿心莲片按上述方法测定脱水穿心莲内酯的溶出百分率。结果(见表4)表明，脱水穿心莲内酯从两种制剂中的溶出速率相差很大，在15 min时，片剂中的累积溶出百分率只有滴丸的约1/10。说明穿心莲提取物制成固体分散体滴丸后可显著提高其中脂溶性有效成分的溶出速率，从而可以缩短起效时间，提高生物利用度。

表4 穿心莲滴丸和片剂中脱水穿心莲内酯的溶出比较

3 讨论

3.1 目前穿心莲片的质量标准中，仅采用崩解时限检查衡量制剂的溶出情况，但崩解试验结果往往与溶出度不具有良好的相关性，尤其是当有效成分难溶于水时。本实验也证实了脱水穿心莲内酯从片剂中溶出的速率较慢［10］，需要对剂型进行改进。

3.2 在对穿心莲制剂进行溶出度研究时，可以选择穿心莲内酯或脱水穿心莲内酯为指标成分［8，11-12］。在本实验研究过程中我们发现，药材中脱水穿心连内酯的量比穿心莲内酯高近3倍，具有更好的代表性。因此，本实验参考《中国药典》2010年版，建立了脱水穿心莲内酯溶出度的HPLC测定方法，方法学研究证明了该方法的可靠性。根据溶出度测定结果，也证明了增加穿心莲片的脱水穿心莲內酯溶出度检查的必要性，以保证制剂的质量。

3.3 实验结果证明，将穿心莲提取物采用固体分散体技术制成滴丸后，可增加内酯类难溶性成分的溶出速率［12］，从而可能产生更好的生物利用度和疗效。

［1］邓文龙.脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯药理作用研究一抗炎作用［J］.药学学报，1980，15(10):590.

［2］吴俊.穿琥宁注射液治疗小儿急性呼吸系统感染200例疗效观察［J］.中西医结合实用临床急救，1997，4(10):447.

［3］史文翠，颜廷旭.炎琥宁临床疗效观察［J］.中国实用医药，2010，5(33):168-169.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.

［5］赵延德，薛涛云，周涛桂，等.常用药物手册［M］.2版.广州:广东科技出版社，1992:433.

［6］徐韧柳.复方苦木消炎片薄层鉴别与脱水穿心莲内酯含量测定研究［J］.中成药，2004，26(12):1003-1006.

［7］国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版二部［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:附录85-87.

［8］王景云.穿心莲滴丸及穿心莲内酯片释放度的比较实验［J］.河南中医药学刊，2002，17(4):29.

［9］魏树礼.生物药剂学与药物动力学［M］.北京:北京医科大学和中国协和医科大学联合出版社，1997:l79.

［10］杨洪武，田 原，杨 明，等.提高穿心莲片溶出度的新工艺研究［J］.辽宁中医杂志，2008，35(3):434.

［11］周 兰 ，赵朝伟.穿心莲内酯片的体外溶出度研究［J］.中国药业，2005，14(8):57.

［12］索绪斌，张云凌，杨兆琪，等.穿心莲内酯固体分散体的制备及体外溶出度测定［J］.中成药，2007，29(4):594-596.