安络化纤丸预防大鼠酒精性脂肪肝形成的作用

相妍笑，娄海燕，王菊英，于晓彦，冯一民，张岫美

(山东大学 医学院 药理学研究所，山东 济南 250012)

酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease，AFLD)是酒精性肝病的一种，处于酒精性肝病的早期，长期过量的酒精摄入会导致不同程度的肝损伤并逐步向肝纤维化，肝硬化发展［1］，其防治已经成为一个重要的课题。

酒为湿热之品，长期过量饮酒形成湿毒有毒之邪，蕴结中焦，伤及脾胃，连及胆肝。安络化纤丸为中药复方制剂，主要成分为地黄、三七、水蛭、牛黄、地龙等，具有疏通脉络、健脾养肝、凉血活血、软坚散结、清除肝内淤积的作用。

药理学研究证明，安络化纤丸具有降低转氨酶、保肝、抗肝纤维化等作用［2-3］，临床用于治疗乙型肝炎和肝硬化等。我们前期的实验也已经证明安络化纤丸对AFLD大鼠有明显的治疗作用［4］。本文以灌服过量酒精制备大鼠AFLD模型，观察安络化纤丸对其的预防作用。

1 材料

安络化纤丸，森隆药业有限公司提供，批号:2007-12-001;美他多辛，山东齐都药业有限公司生产，批号:070104;天门冬氨酸氨基转换酶(AST/GOT)试剂盒、丙氨酸氨基转换酶(ALT/GPT)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、碱性磷酸酶(AKP)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所;甘油三酯(TG)测定试剂盒购自温州东瓯津玛生物科技有限公司;北京二锅头酒，北京鑫帝酒业开发有限公司，GB10781.2-89，酒精体积分数56%，用时加水稀释。

Wistar大鼠，雄性，体重180～220 g，合格证号:SCXK(鲁)2003004，山东大学实验动物中心提供。

2 方法

2.1 动物分组及给药

Wistar大鼠60只，实验室适应性喂养3 d，随机分为正常组10只和造模50只;正常组大鼠普通饲料喂养，以水10mL/kg灌胃代替药物，自由饮水;AFLD模型大鼠随机分5组:AFLD模型组、安络化纤丸高、中、低剂量组、美他多辛阳性对照组，每组10只。安络化纤丸高、中、低剂量组在实验开始后分别灌服2 160，1 080及540 mg/kg安络化纤丸混悬液;美他多辛组灌服135 mg/kg美他多辛溶液;AFLD模型组每天灌服水10 mL/kg。每天1次，连续灌胃4周。

2.2 大鼠AFLD模型的建立

AFLD模型组大鼠自实验第5周的第1～3天按15 mL/kg给予含15%乙醇的二锅头白酒灌胃，第4天起按15 mL/kg给予含52%乙醇的二锅头白酒灌胃，每天上午1次，药物于下午灌服，连续6周［4-5］。同时喂自制饲料(配方:普通饲料与猪油的比例为85∶15，同时每1 kg饲料加入硫酸亚铁15 g)，自由饮水。

2.3 标本制备

连续灌胃给药10周后，实验前一晚禁食不禁水，并称重。次日以1.5%戊巴比妥钠溶液2 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠，下腔静脉取血5 mL，3 000 r/min离心30 min，取血清备用;取出肝脏，称重后，取肝左叶用4%中性甲醛溶液固定进行病理学检查，右叶肝用4℃生理盐水制备成10%肝匀浆(冰浴，1 000 r/min，1 min)，离心取上清－20℃冻存备用。

2.4 相关指标检测

测定肝指数，即肝重与体重之比值;测定ALT，AST，AKP和TG等血液生化指标;测定TG，MDA和SOD等肝组织生化指标;肝组织病理学检查通过HE染色观察肝脏脂肪变性的程度。

3 结果

3.1 肝组织病理学改变

正常对照组肝组织结构正常，肝小叶清晰，中央静脉位于肝小叶中心，肝细胞围绕中央静脉呈单层放射状排列。肝细胞胞浆丰富，细胞核圆形，大小正常，位于细胞中央，无炎细胞浸润。

模型组超过1/2的肝细胞胞浆内可见大小不一的脂滴空泡(中、重度脂肪变性)，肝血窦扩张充血，间质内可见少量淋巴细胞等慢性炎细胞浸润。

安络化纤丸高剂量组肝细胞脂肪变性明显改善，仅少数肝细胞胞浆内查见少量脂滴空泡，肝血窦扩张;中剂量组肝细胞脂肪变性明显改善，仅少数肝细胞胞浆内查见少量脂滴空泡，肝血窦扩张;低剂量组肝细胞脂肪变性改善，少于1/3的肝细胞胞浆内查见脂滴空泡，肝血窦扩张，间质少量炎细胞浸润。

美他多辛阳性对照组肝细胞脂肪变性有改善，仅少量肝细胞胞浆内查见少量脂滴空泡。

总之，模型组出现明显的肝细胞变性(中～重度)，安络化纤丸高、中剂量组对肝细胞脂肪变性明显改善，尤其是高剂量组。低剂量组对肝细胞脂肪变性亦有改善，但不如中、高剂量组明显。美他多辛阳性对照组对肝细胞脂肪变性有改善。见图1。

3.2 安络化纤丸对AFLD大鼠肝指数及血清ALT、AST水平的影响

结果见表1。与正常组相比，AFLD模型组肝指数及血清ALT和AST水平明显升高，显示AFLD模型制备成功。与AFLD模型组相比，安络化纤丸各预防组及美他多辛组明显降低AFLD大鼠的肝指数及血清ALT、AST水平。

3.3 安络化纤丸对AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG含量的影响

结果见表2。与正常组相比，AFLD模型组大鼠血清AKP、TG含量，肝组织TG含量均明显升高(P＜0.05或0.01)，说明模型制备成功。与 AFLD 模型组相比，安络化纤丸各预防组及美他多辛组可不同程度地降低AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG含量。

3.4 安络化纤丸对AFLD大鼠肝组织MDA及SOD含量的影响

结果见表2。与正常对照组相比，AFLD模型组MDA水平明显升高，SOD活性降低。与AFLD模型组相比，安络化纤丸各预防组和美他多辛均可明显降AFLD大鼠肝组织MDA含量，提高SOD活性，与

图1 肝组织病理学检查(HE染色)(200×)Fig.1 Liver histopathological examination(HE staining)(200 × )

表1 安络化纤丸对AFLD大鼠肝指数及血清ALT、AST水平的影响(± s，n=9)Tab.1 Effects of Anluohuaxianwan on the liver index and the levels of ALT and AST in serum in AFLD model rats(± s，n=9)

表1 安络化纤丸对AFLD大鼠肝指数及血清ALT、AST水平的影响(± s，n=9)Tab.1 Effects of Anluohuaxianwan on the liver index and the levels of ALT and AST in serum in AFLD model rats(± s，n=9)

组 别 剂量/(mg/kg) 肝指数/% ALT/(u/L) AST/(u/L)正常对照组 －0.030 ±0.002 23.20 ±4.16 36.10 ±2.93 AFLD 模型组 － 0.046±0.0032 35.50±2.721 89.88±12.552安络化纤丸组 2 160 0.034 ±0.0023 24.43 ±4.893 55.00 ±6.624 1 080 0.035 ±0.0043 26.00 ±4.903 68.27 ±8.383 540 0.038 ±0.0023 28.43 ±5.583 71.15 ±7.023美他多辛组 135 0.036 ±0.0033 24.63 ±4.504 56.88 ±11.754

与正常对照组比较:1P ＜0.05，2P ＜0.01;与AFLD 模型组比较:3P ＜0.05，4P ＜0.05

1P ＜0.05，2P ＜0.01 vs control group;3P ＜0.05，4P ＜0.01 vs AFLD model group

表2 安络化纤丸对AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG、MDA及SOD含量的影响(± s，n=9)Tab.2 Effects of Anluohuaxianwan on the content of AKP，TG in serum and the content of TG，MDA and SOD in liver tissues in AFLD model rats(± s，n=9)

表2 安络化纤丸对AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG、MDA及SOD含量的影响(± s，n=9)Tab.2 Effects of Anluohuaxianwan on the content of AKP，TG in serum and the content of TG，MDA and SOD in liver tissues in AFLD model rats(± s，n=9)

与正常对照组比较:1P ＜0.05，2P ＜0.01;与 AFLD 模型组比较:3P ＜0.05，4P ＜0.011P ＜0.05，2P ＜0.01 vs control group;3P ＜0.05，4P ＜0.01 vs AFLD model group

组 别 剂量/(mg/kg)AKP/(金氏单位/100 mL)血清TG/(mmol/L)肝组织TG/(mmol/L)肝组织MDA/(nmol/mg prot)肝组织SOD/(u/mg prot)正常对照组 － 22.86±4.85 0.73±0.15 0.68±0.17 3.23±0.54 302.53 ±34.43脂肪肝模型组 － 41.13±5.632 1.54±0.252 1.34±0.301 4.72±1.041 202.83±27.852安络化纤丸组 2 160 30.32 ±5.284 0.89 ±0.274 0.83 ±0.284 3.26 ±0.263 303.54 ±16.033 1 080 31.32 ±4.003 1.12 ±0.213 0.91 ±0.213 2.86 ±0.204 293.52 ±7.173 5 40 32.57 ±4.713 1.23 ±0.233 1.02 ±0.234 2.52 ±0.364 302.77 ±52.833美他多辛组 135 29.09 ±5.313 1.03 ±0.234 0.82 ±0.214 1.91 ±0.234 332.38 ±30.594

AFLD模型组相比差异有统计学意义。

4 讨论

长期的过度饮酒，通过乙醇本身和其衍生物乙醛，可使肝细胞反复发生脂肪变性、坏死和再生，而导致酒精性肝病。乙醛为高活性化合物，能干扰肝

细胞多方面的功能，如影响线粒体对ATP的产生，蛋白质的生物合成和排泌，损害微管，使蛋白、脂肪排泌障碍而在肝细胞内蓄积，导致AFLD。安络化纤丸是纯中药制剂，根据疏通化纤机制，组方科学独特，具有消除肝脏脂肪淤滞，改变肝脏微循环，增加血流量，促使肝脏增生纤维结缔组织吸收。改善肝细胞膜的通透性及代谢，从而从根本上恢复肝细胞的功能的作用。

本研究发现，大鼠AFLD形成的同时，血清中ALT、AST的活性明显增强，而安络化纤丸预防给药后大鼠血清中ALT、AST的水平明显低于模型组，而且呈较好的剂量相关性。应用各种剂量的安络化纤丸干预后，大鼠血清AKP、TG含量，大鼠肝组织TG含量较模型组明显下降，表明安络化纤丸可有效防治大鼠肝细胞的脂肪变性和肝脏损伤，促进肝内脂质代谢。另外，安络化纤丸还能够显著降低AFLD大鼠血清MDA含量，明显增强AFLD大鼠SOD活性，说明安络化纤丸对预防大鼠AFLD，阻止脂质过氧化物的产生有明显的作用。

［1］付 好，但自力，唐望先，等.全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏 TGF-β1、CTGF 和 Collal表达的影响［J］.世界华人消化杂志，2006，14:179-183.

［2］张岫美，张 斌，魏欣冰，等.安络化纤丸对急慢性肝损伤的保护作用［J］.中国生化药物杂志，1999，20(1):27-29.

［3］魏欣冰，张岫美，张 斌，等.安络化纤丸对免疫功能的影响［J］.中国生化药物杂志，2002，23(3):137-139.

［4］相妍笑，娄海燕，张岫美，等.安络化纤丸对大鼠酒精性脂肪肝的治疗作用［J］.中国生化药物杂志，2011，32(6):440-443.