安络化纤丸预防大鼠酒精性脂肪肝形成的作用
2012-07-21相妍笑娄海燕王菊英于晓彦冯一民张岫美
相妍笑,娄海燕,王菊英,于晓彦,冯一民,张岫美
(山东大学 医学院 药理学研究所,山东 济南 250012)
酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver disease,AFLD)是酒精性肝病的一种,处于酒精性肝病的早期,长期过量的酒精摄入会导致不同程度的肝损伤并逐步向肝纤维化,肝硬化发展[1],其防治已经成为一个重要的课题。
酒为湿热之品,长期过量饮酒形成湿毒有毒之邪,蕴结中焦,伤及脾胃,连及胆肝。安络化纤丸为中药复方制剂,主要成分为地黄、三七、水蛭、牛黄、地龙等,具有疏通脉络、健脾养肝、凉血活血、软坚散结、清除肝内淤积的作用。
药理学研究证明,安络化纤丸具有降低转氨酶、保肝、抗肝纤维化等作用[2-3],临床用于治疗乙型肝炎和肝硬化等。我们前期的实验也已经证明安络化纤丸对AFLD大鼠有明显的治疗作用[4]。本文以灌服过量酒精制备大鼠AFLD模型,观察安络化纤丸对其的预防作用。
1 材料
安络化纤丸,森隆药业有限公司提供,批号:2007-12-001;美他多辛,山东齐都药业有限公司生产,批号:070104;天门冬氨酸氨基转换酶(AST/GOT)试剂盒、丙氨酸氨基转换酶(ALT/GPT)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、碱性磷酸酶(AKP)测定试剂盒均购自南京建成生物工程研究所;甘油三酯(TG)测定试剂盒购自温州东瓯津玛生物科技有限公司;北京二锅头酒,北京鑫帝酒业开发有限公司,GB10781.2-89,酒精体积分数56%,用时加水稀释。
Wistar大鼠,雄性,体重180~220 g,合格证号:SCXK(鲁)2003004,山东大学实验动物中心提供。
2 方法
2.1 动物分组及给药
Wistar大鼠60只,实验室适应性喂养3 d,随机分为正常组10只和造模50只;正常组大鼠普通饲料喂养,以水10mL/kg灌胃代替药物,自由饮水;AFLD模型大鼠随机分5组:AFLD模型组、安络化纤丸高、中、低剂量组、美他多辛阳性对照组,每组10只。安络化纤丸高、中、低剂量组在实验开始后分别灌服2 160,1 080及540 mg/kg安络化纤丸混悬液;美他多辛组灌服135 mg/kg美他多辛溶液;AFLD模型组每天灌服水10 mL/kg。每天1次,连续灌胃4周。
2.2 大鼠AFLD模型的建立
AFLD模型组大鼠自实验第5周的第1~3天按15 mL/kg给予含15%乙醇的二锅头白酒灌胃,第4天起按15 mL/kg给予含52%乙醇的二锅头白酒灌胃,每天上午1次,药物于下午灌服,连续6周[4-5]。同时喂自制饲料(配方:普通饲料与猪油的比例为85∶15,同时每1 kg饲料加入硫酸亚铁15 g),自由饮水。
2.3 标本制备
连续灌胃给药10周后,实验前一晚禁食不禁水,并称重。次日以1.5%戊巴比妥钠溶液2 mL/kg腹腔注射麻醉大鼠,下腔静脉取血5 mL,3 000 r/min离心30 min,取血清备用;取出肝脏,称重后,取肝左叶用4%中性甲醛溶液固定进行病理学检查,右叶肝用4℃生理盐水制备成10%肝匀浆(冰浴,1 000 r/min,1 min),离心取上清-20℃冻存备用。
2.4 相关指标检测
测定肝指数,即肝重与体重之比值;测定ALT,AST,AKP和TG等血液生化指标;测定TG,MDA和SOD等肝组织生化指标;肝组织病理学检查通过HE染色观察肝脏脂肪变性的程度。
3 结果
3.1 肝组织病理学改变
正常对照组肝组织结构正常,肝小叶清晰,中央静脉位于肝小叶中心,肝细胞围绕中央静脉呈单层放射状排列。肝细胞胞浆丰富,细胞核圆形,大小正常,位于细胞中央,无炎细胞浸润。
模型组超过1/2的肝细胞胞浆内可见大小不一的脂滴空泡(中、重度脂肪变性),肝血窦扩张充血,间质内可见少量淋巴细胞等慢性炎细胞浸润。
安络化纤丸高剂量组肝细胞脂肪变性明显改善,仅少数肝细胞胞浆内查见少量脂滴空泡,肝血窦扩张;中剂量组肝细胞脂肪变性明显改善,仅少数肝细胞胞浆内查见少量脂滴空泡,肝血窦扩张;低剂量组肝细胞脂肪变性改善,少于1/3的肝细胞胞浆内查见脂滴空泡,肝血窦扩张,间质少量炎细胞浸润。
美他多辛阳性对照组肝细胞脂肪变性有改善,仅少量肝细胞胞浆内查见少量脂滴空泡。
总之,模型组出现明显的肝细胞变性(中~重度),安络化纤丸高、中剂量组对肝细胞脂肪变性明显改善,尤其是高剂量组。低剂量组对肝细胞脂肪变性亦有改善,但不如中、高剂量组明显。美他多辛阳性对照组对肝细胞脂肪变性有改善。见图1。
3.2 安络化纤丸对AFLD大鼠肝指数及血清ALT、AST水平的影响
结果见表1。与正常组相比,AFLD模型组肝指数及血清ALT和AST水平明显升高,显示AFLD模型制备成功。与AFLD模型组相比,安络化纤丸各预防组及美他多辛组明显降低AFLD大鼠的肝指数及血清ALT、AST水平。
3.3 安络化纤丸对AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG含量的影响
结果见表2。与正常组相比,AFLD模型组大鼠血清AKP、TG含量,肝组织TG含量均明显升高(P<0.05或0.01),说明模型制备成功。与 AFLD 模型组相比,安络化纤丸各预防组及美他多辛组可不同程度地降低AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG含量。
3.4 安络化纤丸对AFLD大鼠肝组织MDA及SOD含量的影响
结果见表2。与正常对照组相比,AFLD模型组MDA水平明显升高,SOD活性降低。与AFLD模型组相比,安络化纤丸各预防组和美他多辛均可明显降AFLD大鼠肝组织MDA含量,提高SOD活性,与
图1 肝组织病理学检查(HE染色)(200×)Fig.1 Liver histopathological examination(HE staining)(200 × )
表1 安络化纤丸对AFLD大鼠肝指数及血清ALT、AST水平的影响(± s,n=9)Tab.1 Effects of Anluohuaxianwan on the liver index and the levels of ALT and AST in serum in AFLD model rats(± s,n=9)
表1 安络化纤丸对AFLD大鼠肝指数及血清ALT、AST水平的影响(± s,n=9)Tab.1 Effects of Anluohuaxianwan on the liver index and the levels of ALT and AST in serum in AFLD model rats(± s,n=9)
组 别 剂量/(mg/kg) 肝指数/% ALT/(u/L) AST/(u/L)正常对照组 -0.030 ±0.002 23.20 ±4.16 36.10 ±2.93 AFLD 模型组 - 0.046±0.0032 35.50±2.721 89.88±12.552安络化纤丸组 2 160 0.034 ±0.0023 24.43 ±4.893 55.00 ±6.624 1 080 0.035 ±0.0043 26.00 ±4.903 68.27 ±8.383 540 0.038 ±0.0023 28.43 ±5.583 71.15 ±7.023美他多辛组 135 0.036 ±0.0033 24.63 ±4.504 56.88 ±11.754
与正常对照组比较:1P <0.05,2P <0.01;与AFLD 模型组比较:3P <0.05,4P <0.05
1P <0.05,2P <0.01 vs control group;3P <0.05,4P <0.01 vs AFLD model group
表2 安络化纤丸对AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG、MDA及SOD含量的影响(± s,n=9)Tab.2 Effects of Anluohuaxianwan on the content of AKP,TG in serum and the content of TG,MDA and SOD in liver tissues in AFLD model rats(± s,n=9)
表2 安络化纤丸对AFLD大鼠血清AKP、TG及肝组织TG、MDA及SOD含量的影响(± s,n=9)Tab.2 Effects of Anluohuaxianwan on the content of AKP,TG in serum and the content of TG,MDA and SOD in liver tissues in AFLD model rats(± s,n=9)
与正常对照组比较:1P <0.05,2P <0.01;与 AFLD 模型组比较:3P <0.05,4P <0.011P <0.05,2P <0.01 vs control group;3P <0.05,4P <0.01 vs AFLD model group
组 别 剂量/(mg/kg)AKP/(金氏单位/100 mL)血清TG/(mmol/L)肝组织TG/(mmol/L)肝组织MDA/(nmol/mg prot)肝组织SOD/(u/mg prot)正常对照组 - 22.86±4.85 0.73±0.15 0.68±0.17 3.23±0.54 302.53 ±34.43脂肪肝模型组 - 41.13±5.632 1.54±0.252 1.34±0.301 4.72±1.041 202.83±27.852安络化纤丸组 2 160 30.32 ±5.284 0.89 ±0.274 0.83 ±0.284 3.26 ±0.263 303.54 ±16.033 1 080 31.32 ±4.003 1.12 ±0.213 0.91 ±0.213 2.86 ±0.204 293.52 ±7.173 5 40 32.57 ±4.713 1.23 ±0.233 1.02 ±0.234 2.52 ±0.364 302.77 ±52.833美他多辛组 135 29.09 ±5.313 1.03 ±0.234 0.82 ±0.214 1.91 ±0.234 332.38 ±30.594
AFLD模型组相比差异有统计学意义。
4 讨论
长期的过度饮酒,通过乙醇本身和其衍生物乙醛,可使肝细胞反复发生脂肪变性、坏死和再生,而导致酒精性肝病。乙醛为高活性化合物,能干扰肝
细胞多方面的功能,如影响线粒体对ATP的产生,蛋白质的生物合成和排泌,损害微管,使蛋白、脂肪排泌障碍而在肝细胞内蓄积,导致AFLD。安络化纤丸是纯中药制剂,根据疏通化纤机制,组方科学独特,具有消除肝脏脂肪淤滞,改变肝脏微循环,增加血流量,促使肝脏增生纤维结缔组织吸收。改善肝细胞膜的通透性及代谢,从而从根本上恢复肝细胞的功能的作用。
本研究发现,大鼠AFLD形成的同时,血清中ALT、AST的活性明显增强,而安络化纤丸预防给药后大鼠血清中ALT、AST的水平明显低于模型组,而且呈较好的剂量相关性。应用各种剂量的安络化纤丸干预后,大鼠血清AKP、TG含量,大鼠肝组织TG含量较模型组明显下降,表明安络化纤丸可有效防治大鼠肝细胞的脂肪变性和肝脏损伤,促进肝内脂质代谢。另外,安络化纤丸还能够显著降低AFLD大鼠血清MDA含量,明显增强AFLD大鼠SOD活性,说明安络化纤丸对预防大鼠AFLD,阻止脂质过氧化物的产生有明显的作用。
[1]付 好,但自力,唐望先,等.全反式维甲酸对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏 TGF-β1、CTGF 和 Collal表达的影响[J].世界华人消化杂志,2006,14:179-183.
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[4]相妍笑,娄海燕,张岫美,等.安络化纤丸对大鼠酒精性脂肪肝的治疗作用[J].中国生化药物杂志,2011,32(6):440-443.