重庆板角山羊超数排卵效果研究

文│潘红梅 张凤鸣 张利娟 张亮 王娟（重庆市畜牧科学院）

温清华 刘勇（西南大学荣昌校区）

重庆板角山羊，属优良的皮肉兼用型地方品种，具有适应性强、抗病力强，体型大、生长快，产肉多、膻味轻，皮张面积大、质量好等特点。发展板角山羊养殖业是库区发展草食牲畜，促进农民增收的重要途径。但最新的品种资源调查显示，该品种种群数量正急剧下降，因此，采用生物技术手段，加强选种选配、提纯复壮、快速扩繁是当前急需解决的问题。本试验用加拿大和宁波生产的垂体促卵泡素（FSH）对重庆板角山羊进行超数排卵效果研究。

一、材料与方法

1.试验材料。试验动物由重庆市巫溪县板角山羊保种区内购回，共22只成年板角母山羊和4只成年板角公山羊，全部舍养，精粗饲料搭配饲喂，体况良好、无疾病，定期驱虫与注射疫苗。山羊购入后，用氯前列烯醇（PG）进行流产处理，并加强补饲和管理，使其尽快适应新的环境和饲养管理，膘情达到中等以上。选择健康、发育正常、繁殖机能正常、体况较好、膘情中上等的母羊作受试动物。整个试验于山羊发情季节（9～12月）进行。主要试剂包括FSH、FOLLTROPIN-V，加拿大；FSH、PG、促排卵素3号（LRH-A3），宁波第二激素厂；CIDR，澳大利亚EAZIBREED。

2.试验方法。

（1）试验羊的发情周期观察。超数排卵（以下简称超排）处理前，对供体羊群连续观察两个以上完整发情周期，准确记录每只羊发情周期起止日期及周期天数。

（2）超排处理方案。将CIDR植入供体羊阴道内，在发情的第15天，注射FSH进行超排，连续4天，上下午各注射1次，共8次。加拿大激素总剂量为8.8毫克（第一天1.45毫克，第二天1.95毫克，第三天2.45毫克，第四天2.95毫克）；宁波激素总剂量为300国际单位（第一天45国际单位，第二天40国际单位，第三天35国际单位，第四天30国际单位）。分别于最后1次注射的同时肌注PG 0.1毫克/头，并取出CIDR，于第2天开始观察发情，发情后立即配种，同时静脉注射LRH-A3 100国际单位，12小时后补配1次。配种后第6天手术子宫角冲胚利用，并统计超排结果。之后，再依据上述试验的结果，采用宁波FSH对不同剂量FSH的超排效果进行研究。

（3）试情及配种。最后一次注射FSH后，用试情公羊检测供体羊发情情况，此后，第2天早晨开始给供受体羊每2小时试情一次。母羊接受爬跨为发情时间，发情后2～3小时静脉注射LRH-A3 100国际单位，15～20小时开始配种，配种次数1～2次。

（4）手术及胚胎收集。于配种后的6～7天，将受试羊用846注射液1～1.5毫升肌肉注射全身麻醉后采用手术法进行胚胎采集，由子宫角注入30毫升预热的冲卵液，在输卵管伞部一端用集胚杯收集胚胎。供体发情后50～55小时，通过手术方法，在输卵管回收受精卵。即于乳腺根部两乳静脉之间将皮肤切开，露出并切开腹中线，用两指将子宫及卵巢拉出体外，检查黄体数及卵泡数，把冲卵管一端经输卵管伞部插入，另一端接集卵皿，然后将套管针经富管结合部刺入并注射5毫升冲卵液（DPBS+10%发情山羊血清）。

（5）胚胎质量评价。根据胚胎形态特征分为A、B、C、D四个等级。A级胚胎：透明带体积充实、饱满，卵裂球紧密，大小色泽充实度均匀一致，没有缺陷的标准胚胎；B级胚胎：其结构形态基本符合一级标准，仅个别卵裂球有增大现象；C级胚胎：胚胎结构和卵裂球大小色泽致密度基本正常，仅个别卵裂球凸于细胞团表面；D级胚胎：胚胎大小色泽致密度不正常，卵裂球凸于细胞团表面较多，或者是根本没有受精的卵母细胞或退化变性胚胎。A、B级胚胎为可移植用胚胎。在体视镜下用吸卵管将胚胎转入凹皿，根据形态分成可移植用与不可移植用胚胎，将可移植用胚胎置入38.9℃、5%二氧化碳培养箱中供移植或冷冻保存。

表1 不同FSH剂量对超排效果的影响

3.统计方法。t检验对数据进行显著分析。

二、试验结果与分析

1.不同来源FSH对板角山羊超排效果的影响。加拿大、宁波生产的FSH超排结果表明，两组羊的平均黄体数、可用胚胎数差异均不显著（P＞0.05）。加拿大组和宁波组平均每只羊获得可用胚胎分别为（11.88±6.83）枚和（12.00±6.77）枚。

2.不同FSH剂量对板角山羊超排效果的影响。

用三种不同的FSH剂量（280国际单位、300国际单位、320国际单位）对板角山羊进行超排处理，结果见表1。

三、讨论

1.不同来源FSH对板角山羊超排效果的影响。

关于不同来源的FSH对超排效果的影响，不同的研究者获得的超排效果差异很大。本研究发现，加拿大产FSH和宁波产FSH超排效果类似，平均黄体数、回收胚胎总数以及可用胚胎数差异均不显著（P＞0.05）；一定剂量的国产（宁波）激素可以获得与进口激素相同的超排效果，但用进口FSH超排时，未排卵泡较少。

从成本的角度来看，进口FSH虽能获得相对稳定的超排效果，但其昂贵的价格令规模生产者们望而却步；国产激素的价格优势不言而喻，但其超排效果不稳定，常因厂家和批次的不同而有所差异。因此，在进行大规模的胚胎移植前必须做预试。

2.不同FSH剂量对板角山羊超排效果的影响。

李拥军等（2008）认为对山羊进行超排处理时，外源FSH可促进卵巢中卵泡的发育、成熟，但到一定剂量后，超排效果并不随FSH剂量的增加而增加。如果FSH使用剂量过大，卵巢中发育的卵泡和排卵数量过多，会导致卵巢体积异常增大和卵子接受障碍，经输卵管伞接受到的卵子数量却很有限。同时，多数黄体分泌的孕酮量增大，可能使运行到输卵管的精子和卵子发生变性，导致回收的胚胎退化或未受精卵的比例增高。

本试验参照李拥军等对超排所用的剂量分组，获得与李拥军试验组II相似的结果，即280国际单位为最佳的超排剂量。因本试验所用的全部是从未受过FSH处理的山羊，且多数为初产羊，体内的激素水平不稳定，对激素敏感性高，加大激素剂量时，虽然能促进卵泡发育、排卵，但受精率降低。因此，为了能取得更好的超排效果，在生产实践中，未生产过也没有接受过超排处理的羊，应该用较低剂量超排，而生产过且接受过超排处理的羊，可以适当增加FSH剂量。