醋的用量对炮制草乌生物碱类成分的影响

杜 红 张洞于 侯跃飞 王晶娟 谭 鹏 李向日 杨 蕾 李 飞

北京中医药大学，北京 100029

草乌是蒙、中医常用药，为毛茛科植物北乌头 (Aconitum kusnezoffii Reichb．)的干燥块根。味辛，性温，功能消“粘”燥“协日乌素”、止痛［1］。草乌有大毒，临床多经过炮制降低毒性后使用。其减毒作用主要是在加工炮制过程中，剧毒的双酯型生物碱 (乌头碱、新乌头碱、次乌头碱等)发生水解，生成毒性较低的单酯型生物碱 (苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱等)等水解产物［2］。历代中、蒙医草乌炮制方法记载颇多，笔者发现:在传统草乌炮制方法中，有许多都是通过酸性条件来达到促进水解的目的。如内蒙古蒙成药标准中记载了甘草汤、诃子汤制［3］;《仙授理伤寻短秘方》、《圣济总录》中记载了醋煮等［4－5］;现代研究也表明诃子汤炮制草乌的减毒效果优于清水煮［6］。但尚未见以常用酸性炮制辅料醋来炮制草乌的研究报道。本文拟采用不同用量的米醋炮制草乌，并通过检测炮制前后乌头类生物碱的含量变化，探讨酸性条件炮制对草乌成分的影响。

1 材料

草乌购自北京华邈中药工程技术开发中心，经北京中医药大学张贵君教授鉴定为毛茛科植物北乌头Aconitum kusnezoffii Reichb的块根。

炮制辅料用醋:龙门米醋，酸度3．95g/100ml。

对照品:乌头碱 (批号:10720－200308)、新乌头碱(批号:110799－200404)、次乌头碱 (批号:0798－9403)均购自中国药品生物制品检定所;苯甲酰乌头碱 (批号:B010－110316，纯度:98．3﹪)、苯甲酰新乌头碱 (批号:B009－119316，纯度:99.1﹪)、苯甲酰次乌头碱(批号:B016－110316，纯度:98.8﹪)均购自上海康标化学品有限公司。乙腈、四氢呋喃、甲醇为色谱纯、水为高纯水，其余试剂均为分析纯。

TCO－250型超声波清洗器 (北京医疗设备二厂);Waters1525高效液相色谱仪，Waters2428紫外检测器。安捷伦extend－C18柱。

2 方法与结果

2.1 炮制品的制备

生草乌 取原药材，除去杂质，洗净，干燥，即得。

制草乌 按《中国药典》2010版［7］制草乌项下炮制。取草乌，大小分档，用水浸泡至内无干心，取出，加水煮至取大个切开内无白心，口尝微有麻舌感时，取出，干燥，即得。

醋制草乌 参照药典制草乌的炮制方法制备。其中将浸泡用水用不同用量的米醋替换，其余操作方法同上。米醋用量分别为20%、40%、60%、80%，加水稀释至相同体积。以上样品分别粉碎，过50目筛后备用。

2.2 生物碱的含量测定

双酯型生物碱对照品溶液的制备 精密称取新乌头碱对照品10.04mg、乌头碱对照品3.07mg、次乌头碱对照品1.88mg混合，加入异丙醇－三氯甲烷 (1∶1)混合溶液定容至10ml，混匀，即得。

单酯型生物碱对照品溶液的制备 精密称取苯甲酰乌头原碱对照品0.23mg、苯甲酰次乌头原碱对照品1.15mg、苯甲酰新乌头原碱对照品1.22mg混合，加入异丙醇－三氯甲烷 (1∶1)混合溶液定容至10ml，混匀，即得。

供试品溶液的制备 分别取生草乌及草乌炮制品粉末2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入氨试液3ml，再精密加入异丙醇－乙酸乙酯 (1∶1)混合液50ml，称重，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇－乙酸乙酯 (1:1)混合液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，40℃减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇－三氯甲烷 (1∶1)混合液3ml溶解，密塞，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

色谱条件 以乙腈－四氢呋喃 (25∶15)为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液 (每1000ml加冰醋酸0.5ml)为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱。检测波长为235nm，流速:1ml/min。

表1 色谱条件

样品测定 分别精密量取对照品及各供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定。外标法计算各供试品溶液中乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的含量。色谱图见图1，各成分含量见表2，图2。

表2 各炮制品中乌头类生物碱含量 (%)

3 讨论

草乌经过醋制以后，双酯型和单酯型生物碱含量均发生了明显的变化。双酯型生物碱大幅度下降，单酯型生物碱明显升高，说明醋炮制后可以将剧毒的双酯型生物碱水解为毒性较低的单酯型生物碱，达到炮制减毒的要求。

醋制草乌酯型生物碱含量比药典法的炮制品高得多。提示，临床如果使用醋制法炮制草乌应该进一步优化炮制工艺或者减少草乌用量使之达到既保持疗效又防止中毒的目的。具体的用量还应该参考量效、毒效关系实验，笔者将进一步研究。

草乌炮制过程中生物碱含量的变化与醋的用量有一定相关性。单酯型生物碱的含量随着米醋用量的增加，呈先升高再减少的趋势;双酯型生物碱的含量随着米醋用量的增加，呈先明显降低，后变化缓慢的趋势。从图2可知，醋的用量在20%～40%之间，单酯型生物碱含量最高，双酯型生物碱含量较低，可达到最佳的减毒存效要求。该范围的醋的用量，与《北京市中药饮片炮制规范》中收载的一般醋制法的用量基本相符，可为进一步制定醋制工艺提供依据。

从图1可知，草乌在醋制过程中，除了三种单酯型生物碱以外，还有其他类型的化合物生成 (黑圈所示)。草乌中生物碱成分种类多样，包括双酯型生物碱、单酯型生物碱、胺醇型生物碱、脂碱等。不同类型的生物碱的毒性和生物活性均不同，在炮制过程中这些成分的变化都有可能对最终草乌炮制品的毒性和疗效产生影响。因此，仅仅以六种生物碱的含量变化来衡量草乌的炮制效果是不够全面的。在对各种生物碱的毒性和药理活性尚未研究清楚前，现阶段仍需结合炮制品的毒理、药理研究结果来作为控制草乌炮制品质量的指标，确保临床用药的安全有效。

［1］罗布桑．蒙药学［M］．呼和浩特:民族出版社，1989:286～288．

［2］邹恩济，冯国庆．蒙药草乌炮制中生物碱含量的变化［J］．中成药研究，1988，(2):20－21．

［3］内蒙古卫生厅．内蒙古蒙成药标准［S］．呼和浩特:内蒙古人民出版社，1999．

［4］蔺道人．仙授理伤寻短秘［M］．北京:人民卫生出版社，1957．

［5］宋．太医院．圣济总录［M］．北京:人民卫生出版社，1962．

［6］侯敏，石文宏，盛惟等．草乌不同炮制方法与急性毒性的相关性研究［J］．中国民族医药杂志，2011，(8):30－31．

［7］国家药典委员会．中国药典 (Ⅰ部) ［S］．北京:化学工业出版社，2010:220．