CIK细胞治疗恶性胸腹腔积液的临床观察

常占国，徐全晓，马 磊

(南阳市第一人民医院肿瘤内科，河南 南阳 473010)

恶性肿瘤严重威胁着人类的健康，而恶性胸腹腔积液是晚期恶性肿瘤患者的终末期表现。胸腔积液使患者感到胸闷、气促、心悸、呼吸困难甚至呼吸衰竭等;腹腔积液使患者感到腹胀、纳差、恶心、呕吐等。目前，恶性胸腹腔积液的治疗以灌注化疗药物为主，但毒副反应较重，患者耐受性差。作者采用细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)胸腹腔内灌注治疗恶性胸腹腔积液，取得了较好的疗效。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择我院2009年8月至2011年8月收治的46例经病理组织学或细胞学证实为恶性胸腹腔积液患者，随机分为对照组 (化疗药物灌注)23例、试验组(CIK细胞灌注)23例。试验组:男性13例，女性10例;年龄43～75岁，中位年龄67岁;胸腔积液14例，胸腹腔积液6例，腹腔积液3例;肺癌5例，乳腺癌肺转移6例，乳腺癌肝肺转移1例，晚期卵巢癌4例，胃癌肝转移3例，结肠癌肺转移2例，直肠癌肝转移2例。对照组:男性12例，女性11例;年龄40～73岁，中位年龄64岁;胸腔积液11例，胸腹腔积液8例，腹腔积液4例;肺癌4例，乳腺癌肺转移7例，乳腺癌肝肺转移2例，晚期卵巢癌3例，胃癌肝转移4例，结直肠癌肝转移3例。2组患者的临床资料具有可比性(P＞0.05)。所有患者治疗前均签署知情同意书。灌注治疗后1个月及2个月后分别随访。

1.2 仪器与试剂 CO2培养箱(Thermo公司)，人外周血淋巴细胞分离液(天津市灏洋生物制品公司)，改良型RPMI-1640培养基(HyClone公司)，倒置显微镜、流式细胞仪(BD 公司)，CD3、CD4、CD8、CD56 单克隆抗体(BD公司)，离心机(合肥精密仪器厂)，白介素-1(Pretech公司)，白介素-2(北京双鹭药业股份有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 CIK细胞的制备 采用人外周血淋巴细胞分离液50 mL，分离并收集患者外周血单个核细胞，用PBS洗涤3次，将细胞按2×106·mL-1的密度悬浮于RPMI-1640培养基中，加入干扰素1000 u·mL-1，置于37℃、体积分数5%CO2条件下培养24 h，再加入抗CD3单克隆抗体100 ng·mL-1、白介素-21000 u·mL-1继续培养，2～3 d分瓶1次，并补加培养液及白介素-2。培养至10～14 d经检测无污染后，收集CIK细胞离心并应用质量分数0.9%氯化钠溶液洗涤细胞3次，最后以质量分数0.9%氯化钠溶液100 mL重悬细胞。

1.3.2 观察细胞生长情况 在光学倒置显微镜下动态观察CIK细胞发育过程中的形态学变化。

1.3.3 CIK细胞的表型及病原学检测 CIK细胞诱导培养至14 d时应用流式细胞仪检测 CD3、CD4、CD8、CD56等表面抗原的情况。并经细菌室检测微生物。

1.3.4 治疗方法 患者行胸腹腔穿刺置管引流术，治疗前尽量将胸腹腔积液缓慢引流干净，对照组患者胸腹腔内灌注顺铂60 mg+地塞米松针5 mg，3 d灌注1次，灌注3～4次。灌注前予以止吐药物，灌注后予以水化及利尿3 d等对症处理。试验组患者连续3 d予以CIK细胞胸腹腔内灌注，每次灌注细胞为2～5×1010个，灌注前予以肌注地塞米松5 mg、苯海拉明20 mg。2组患者灌注后夹闭引流管，并嘱患者1 h内改变1次体位，使药物和CIK细胞与胸膜和腹膜充分接触。

1.4 疗效评判标准和KPS评判标准 胸腹腔积液疗效评判按照1980年WHO标准进行。完全缓解(CR):胸腹腔积液完全消失并维持1个月以上;部分缓解(PR):胸腹腔积液减少≥50%，并维持1个月以上;无变化(NC):胸腹腔积液减少＜50%。以CR+PR计算有效率。KPS评分标准为治疗后较治疗前增加≥10分为改善，增加或减少＜10分为稳定，减少≥10分为恶化。

1.5 统计学处理 应用SPSS 13.0进行数据分析，率的比较采用χ2检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 CIK细胞增殖活性 细胞在第4～5天后开始出现增殖，第10～14天快速增长，14 d以后增殖速度减慢，至第21天细胞数量增至原来的37.3～48.7倍。见图 1、2。

图1 培养不同时间段CIK细胞形态学表现

表1 培养不同时间CIK细胞表型

2.2 CIK细胞免疫表型 见表1、图3。

2.3 近期疗效 试验组近期疗效优于对照组(P＜0.01)。见表2。

表2 CIK治疗恶性胸腔积液近期疗效

2.4 毒副反应 对照组患者有17例出现不同程度的胃肠道反应，如恶心、呕吐、食欲差等;10例出现骨髓抑制，应用粒细胞集落刺激因子后很快升至正常。而试验组无一例出现胃肠道反应及骨髓抑制等。2组毒副反应发生率比较差异有统计学意义(P＜0.01)。

2.5 生活质量 患者生活质量的改变以KPS评分的变化进行评估。对照组改善6例(26.1%)，稳定10例(43.5%)，恶化7例(30.5%);试验组改善9例(39.1%)，稳定 12例(52.2%)，恶化 2例(8.7%)。试验组明显优于对照组，比较差异有统计学意义(P＜0.01)。

3 讨论

恶性胸腹腔积液是由恶性肿瘤引起的体腔积液，多并发于晚期恶性肿瘤患者，一旦出现，患者的生活质量将明显下降，中位生存时间不超过3个月［1］。其产生的机制:1)肿瘤分泌的某些产物使血管通透性增加，渗出增多;2)肿瘤压迫血管、淋巴管等导致回流障碍;3)胶体膨胀压降低;4)肿瘤直接侵犯胸腹膜等［2］。治疗恶性胸腹腔积液的常规方法是彻底抽出积液后，在胸腹腔内灌注化疗药物，局部作用于胸腹膜，并通过胸腹膜的吸收作用于肿瘤部位产生“双路治疗”的作用，达到控制恶性积液的目的［3］。这种胸腹腔内灌注化疗药物来控制恶性积液的方法，其毒副反应大，特别是体质差的患者很难耐受这种治疗。将淋巴因子激活的杀伤细胞、肿瘤浸润性淋巴细胞、树突状细胞等应用于恶性积液的治疗［4］，取得了较好的疗效。作为新一代的过继性细胞免疫疗法，CIK细胞是从患者外周血中分离出单个核细胞，在体外用细胞因子和抗CD3单克隆抗体刺激后诱导得到的CD3+CD56+T细胞为主要效应细胞的异质细胞群［5］。CIK细胞主要通过3条途径杀伤肿瘤细胞［6］，首先是经Mcli20识别肿瘤细胞表面配体，通过穿孔形成蛋白和颗粒酶等溶解细胞，直接杀伤肿瘤细胞;其次，进入体内的CIK细胞分泌多种细胞因子，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可以通过调节机体免疫系统间接杀伤肿瘤细胞，并且还能增强T细胞的抗肿瘤功能;最后，CIK细胞可以通过表达FasL诱导肿瘤细胞凋亡［7］。将CIK细胞应用于肿瘤的治疗，相对于放疗和化疗，具有毒副反应轻、患者耐受性好、可提高患者免疫功能及生活质量等特点［8］。本观察中接受CIK细胞治疗的患者，均未出现发热、寒战、水肿等毒副反应。

总之，CIK细胞胸腹腔内灌注治疗恶性胸腹腔积液是一种有效、且安全性高的治疗方法，值得临床推广应用。

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